肺癌組織中USP3及FOXF1表達與臨床特征的關(guān)系及其與肺癌組織EMT標識物的相關(guān)性

馮佳 袁傲 黃芳 章建國

肺癌是常見惡性腫瘤，一般起源于支氣管黏膜上皮細胞，目前臨床通過放化療、手術(shù)、靶向治療等延緩肺癌發(fā)展[1]。由于肺癌早期臨床表現(xiàn)不明顯，部分患者確診時已發(fā)展為中晚期，癌細胞已發(fā)生轉(zhuǎn)移，治療難度較大，預(yù)后較差，因此，研究肺癌的轉(zhuǎn)移機制對于肺癌的治療具有重要意義[2]。細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是指上皮細胞轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細胞的過程，參與癌細胞的轉(zhuǎn)移，有研究顯示EMT 在癌細胞遷移、侵襲的時候顯著增強，因此，了解肺癌細胞EMT 的機制是目前肺癌領(lǐng)域研究的重點[3-4]。EMT 標志物主要有上皮型鈣黏附素（E-cardherin）及波形蛋白（Vimentin），目前科研人員致力于尋找更多與肺癌EMT 相關(guān)的因子，以探究肺癌細胞EMT。有研究發(fā)現(xiàn)，去泛素化酶3（ubiquitin-specific protease 3，USP3）在非小細胞癌中高度表達，能夠參與非小細胞癌細胞增殖，促進非小細胞癌的發(fā)展[5]。叉頭蛋白1（forkhead box F1，F(xiàn)OXF1）屬于叉頭框基因，在人體內(nèi)通過轉(zhuǎn)錄作用，對多種基因的表達進行調(diào)控，在癌細胞的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用[6]。本研究旨在探究USP3、FOXF1 的表達與肺癌細胞EMT 的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2016 年1 月-2019 年12 月南通大學(xué)附屬醫(yī)院收治的130 例肺癌患者的臨床資料。納入標準：（1）符合文獻[7]《中華醫(yī)學(xué)會肺癌臨床診療指南（2019 版）》中肺癌的診斷標準，均進行影像學(xué)診斷，并確診為肺癌；（2）均有病理診斷結(jié)果；（3）均首次確診為肺癌。排除標準：（1）均為原發(fā)性肺癌；（2）術(shù)前進行過放療或輔助化療；（3）精神類疾?。唬?）凝血功能障礙；（5）免疫系統(tǒng)疾病；（6）既往有肺部疾病手術(shù)史。男69 例，女61 例，年齡40～80 歲，平均（66.57±7.87）歲，臨床分期：Ⅰ期33 例，Ⅱ期33 例，Ⅲ期64 例，病理類型：鱗癌64 例，腺癌46 例，小細胞癌20 例。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 方法（1）FOXF1、USP3 表達情況：采用免疫組化法檢測FOXF1、USP3 的表達，切片中出現(xiàn)棕褐色或棕黃色顆粒視為陽性細胞，無色、黃色、棕黃色及棕褐色分別為0～3 分：陽性細胞占0～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%分別為1～4 分，總分≥3 分視為陽性表達，＜3 分視為陰性[8]。（2）E-cadherin 陽性：切片中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞（細胞膜或細胞漿），陽性細胞占比≥10%，視為表達陽性。Vimtemin 陽性：切片中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞（細胞膜或細胞漿），500 個細胞中，陽性細胞占比≥10%，視為表達陽性[9-10]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 22.0 分析，計量資料用（x-±s）表示，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗；采用Spearman 分析USP3、FOXF1 表達與EMT 標識物的相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 USP3、FOXF1 在肺癌及癌旁組織中的表達情況 肺癌組織的USP3 及FOXF1 陽性表達率均高于癌旁組織（P＜0.05），見表1。

表1 USP3、FOXF1在肺癌及癌旁組織中的表達情況[例（%）]

2.2 肺癌組織中USP3 及FOXF1 表達與臨床特征的關(guān)系 不同USP3 及FOXF1 表達情況患者的性別、年齡及病理類型比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。不同USP3 及FOXF1 表達情況患者的臨床分期比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2、3。

表2 USP3表達與臨床特征的關(guān)系[例（%）]

表2 （續(xù)）

表3 FOXF1表達與臨床特征的關(guān)系[例（%）]

表3 （續(xù)）

2.3 肺癌組織EMT 標識物表達情況 130 例肺癌組織樣本中Vimentin 陽性81 例，陽性表達率為62.31%，E-cadherin 陰性90 例，陰性表達率為69.23%。

2.4 USP3、FOXF1 表達與EMT 標識物的相關(guān)性分析經(jīng)Spearman 相關(guān)分析，USP3、FOXF1 與Vimentin 均呈正相關(guān)，USP3、FOXF1 與E-cadherin均呈負相關(guān)（P＜0.05），見表4。

表4 USP3、FOXF1表達與EMT標識物的相關(guān)性分析

3 討論

近年來，肺癌的發(fā)病率呈上升趨勢，導(dǎo)致其死亡率不斷升高，有研究顯示，約80%的死亡病例均發(fā)生了不同程度的癌細胞轉(zhuǎn)移，因此了解肺癌轉(zhuǎn)移機制對于肺癌的早期診斷、治療及其預(yù)后均有積極作用[11]。目前關(guān)于肺癌細胞轉(zhuǎn)移的機制尚無確切定論，由于EMT 參與癌細胞轉(zhuǎn)移，其逐漸成為肺癌細胞轉(zhuǎn)移機制研究的熱點[12]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)FOXF1 與結(jié)直腸癌及乳腺癌的疾病發(fā)展密切相關(guān)，有研究顯示，F(xiàn)OXF1 通過SNAI1 的轉(zhuǎn)錄激活誘導(dǎo)EMT 在結(jié)直腸癌細胞轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用[13]。USP3則在胃癌的發(fā)展及預(yù)后，膠質(zhì)母細胞瘤的EMT 中發(fā)揮重要作用，因此推測FOXF1、USP3 在肺癌的發(fā)展及EMT 中具有一定作用[14-15]。目前關(guān)于USP3、FOXF1 的表達與肺癌細胞EMT 關(guān)系的研究較少，本文對此進行探究，以期為肺癌的治療提供新的研究方向。

130 例肺癌組織標本中USP3 及FOXF1 陽性表達率分別為92.31%、86.15%，癌旁組織中分別為31.54%、29.23%，其中肺癌組織的USP3 及FOXF1陽性表達率均高于癌旁組織，提示USP3 及FOXF1在肺癌組織中表達明顯。不同USP3 及FOXF1 表達情況患者的臨床分期比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明USP3、FOXF1 表達與肺癌的臨床分期具有相關(guān)性。分析原因為，USP3 具有促進細胞凋亡，調(diào)節(jié)細胞增殖、發(fā)育等作用，USP3在胃癌、肝癌等多種癌癥中均呈異常高度表達[16]。FOXF1 是叉頭基因的一種，通過轉(zhuǎn)錄因子對多種靶向基因進行調(diào)控，并參與腫瘤的形成。E-cardherin是EMT 相關(guān)蛋白的一種，有研究顯示，E-cardherin是FOXF1 的靶點之一，F(xiàn)OXF1 沉默后，E-cardherin表達上調(diào)，同時Vimtemin 蛋白表達下調(diào)，從而抑制EMT 形成，抑制癌細胞的侵襲能力[17-18]。本研究結(jié)果顯示USP3 及FOXF1 在肺癌組織中表達明顯，且與臨床分期有關(guān)，而EMT 則在癌細胞的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，因此推測USP3、FOXF1 與肺癌細胞EMT 存在某種聯(lián)系。為進一步探究USP3、FOXF1與肺癌細胞EMT 的關(guān)系，本研究對130 例肺癌組織樣本中EMT 指標進行檢測，其中Vimentin 陽性表達率為62.31%（81/130），E-cadherin 陰性表達率為69.23%（90/130），經(jīng)Spearman 相關(guān)分析，USP3、FOXF1 與Vimentin 均呈正相關(guān)，USP3、FOXF1 與E-cadherin 均呈負相關(guān)（P＜0.05）。由于Vimtemin表達陽性且E-cadherin 表達陰性視為EMT，因此USP3、FOXF1 的表達與EMT 密切相關(guān)。部分研究也得到類似的結(jié)論，如在口腔癌中，F(xiàn)OXF1 與E-cadherin 呈負相關(guān)，與本研究結(jié)果相符[19-20]。

綜上所述，USP3、FOXF1 在肺癌組織中表達明顯，與肺癌患者臨床分期具有一定的聯(lián)系，同時USP3、FOXF1 與Vimtemin 和E-cadherin 具有明 顯的相關(guān)性，與肺癌的發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，USP3、FOXF1 有可能是肺癌藥物治療的新靶點，為肺癌的藥物研究提供新的研究思路。