紫錐菊提取物對(duì)大鼠濕熱泄瀉的療效及其機(jī)制

池幸子，楊詩(shī)靖，楊泊文，孫 晗，姚麗麗，顧達(dá)星，郭世寧,2，石達(dá)友,2，武 力,2，劉 翠,2*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州 510642； 2.廣東省獸用中藥與天然藥物工程技術(shù)研究中心，廣州 510642)

隨著現(xiàn)代養(yǎng)殖集約化、規(guī)?；靶笄萘鲃?dòng)性的增加，內(nèi)外濕熱侵襲畜禽機(jī)體導(dǎo)致脾胃、腸道功能紊亂的濕熱泄瀉相關(guān)疾病時(shí)有發(fā)生，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大損失。濕熱泄瀉主要有“濕熱氣盛，是以溫厲大行”的病理特點(diǎn)，濕熱壅滯，損傷脾胃?jìng)骰С?，?dǎo)致腸道傳導(dǎo)功能紊亂，臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、肛門灼熱、里急后重、苔黃膩，大便黏膩、色黃且臭[1]。臨床實(shí)踐表明，采用化學(xué)藥物控制炎癥反應(yīng)以治療畜禽濕熱泄瀉，其療效不佳，且藥物不合理使用易致耐藥性及藥物殘留，對(duì)人類健康構(gòu)成潛在威脅[2]。

濕熱泄瀉的發(fā)展與飲食、環(huán)境、生物因素等密切相關(guān)，目前，濕熱泄瀉證常以“內(nèi)濕+外濕+客邪”為原則建模，即喂養(yǎng)高脂高糖飼料以制造內(nèi)濕，置于高溫高濕環(huán)境以制造外濕，給予病原體以制造客邪[3]。本研究根據(jù)參考文獻(xiàn)[4]，在高溫高濕環(huán)境下給予大鼠高糖高脂飲食后，腹腔注射大腸桿菌菌液建立大鼠濕熱泄瀉模型,通過(guò)對(duì)其臨床體征、體重、采食、飲水量的監(jiān)測(cè)進(jìn)行模型評(píng)價(jià)，其中，臨床體征主要為精神狀態(tài)、糞便含水量與色澤等宏觀證候指標(biāo)的監(jiān)測(cè)[5]。

紫錐菊(Echinaceapurpurea)屬菊科紫錐花屬植物，也稱“松果菊”，味辛、苦，性涼，歸肺、脾經(jīng)，有清熱解毒，益氣扶正的功效[6]。紫錐菊含有菊苣酸、咖啡酸、多糖等多種活性物質(zhì)，在抗感染和提高免疫力方面有顯著作用[7]。此前已有研究發(fā)現(xiàn)，紫錐菊在結(jié)腸炎模型的治療中具有抗炎作用[8]，本研究通過(guò)建立大鼠濕熱泄瀉模型，探討紫錐菊提取物對(duì)濕熱泄瀉大鼠的療效，為紫錐菊提取物防治濕熱泄瀉疾病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

豬油購(gòu)自頓蒿特食品有限公司；營(yíng)養(yǎng)瓊脂購(gòu)自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；大鼠 IL-6、IL-10、IL-17、IL-23 ELISA試劑盒購(gòu)自江蘇酶免生物科技有限公司；大鼠TGF-β、IL-2 ELISA試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；葡萄糖、甲醛、氯仿、無(wú)水乙醇購(gòu)于天津市大茂化學(xué)試劑廠；異丙醇購(gòu)于天津市富宇精細(xì)化工有限公司；RNALaterTM動(dòng)物組織RNA穩(wěn)定保存液購(gòu)于上海碧云天生物科技有限公司。RNaze-free ddH2O、RNA isolater Total RNA Extraction Reagent、Hiscript Ⅲ RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)購(gòu)于南京諾唯贊生物科技股份有限公司。

全自動(dòng)生化分析儀(BS-320，WS-49002086)、離心機(jī)(湖南湘儀，L420)、酶標(biāo)儀(Thermo，357-701660)、恒溫水浴鍋(常州澳華)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn))、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(艾本德，5425R)、PCR儀(美國(guó)伯樂(lè)，BIOT100)。

1.2 藥物與菌種

紫錐菊提取物(EPE)，由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室與廣州華農(nóng)高科生物科技有限公司研制，廣州華農(nóng)高科生物科技有限公司中試生產(chǎn)，批號(hào)：20191201，含單咖啡酰酒石酸和菊苣酸的總量≥2.0%，100 g·袋-1。

產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(O78)購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 模型建立及其判斷標(biāo)準(zhǔn)

廣州南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心購(gòu)進(jìn)40只SPF級(jí)Wistar大鼠，體重180～220 g，雌雄各半，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK(粵)2019-0136。40只Wistar大鼠隨機(jī)均分為5組：空白組、模型組、EPE低劑量組、EPE高劑量組及陽(yáng)性藥物組，雌雄各半。除空白組外，其余各組大鼠單日灌胃豬油(20 mL·kg-1)，并給予充足飼料，雙日禁食，且自由飲用30%的葡萄糖水，并放置于高溫高濕環(huán)境中，維持室內(nèi)溫度33 ℃±2 ℃，濕度90%±5%，每日持續(xù)8 h，共10 d。10 d后，除空白組外，其余各組大鼠腹腔注射2 mL·kg-1劑量產(chǎn)毒性大腸桿菌菌液(1.8×109CFU·mL-1)，間隔24 h后，再次注射1 mL·kg-1劑量大腸桿菌菌液，自然適應(yīng)1 d，空白組大鼠腹腔注射等量生理鹽水。造模后，EPE低、高劑量組每日分別灌胃1與3 g·kg-1EPE，陽(yáng)性藥物組每日灌胃0.1 g·kg-1柳氮磺吡啶，空白組與模型組大鼠給予等量生理鹽水，持續(xù)6 d(圖1)。

實(shí)施特深井(13 000 m以深)科學(xué)鉆探工程之前，建立結(jié)晶巖鉆探施工必要的理論基礎(chǔ)和構(gòu)建初步的技術(shù)體系是非常必要的，只有在具備較完備的理論基礎(chǔ)和完善的施工技術(shù)體系的前提下，才能安全、高效地完成特深井科學(xué)鉆探任務(wù)。

圖1 模型建立與藥物治療Fig.1 Model establishment and drug therapy

根據(jù)臨床癥狀評(píng)分評(píng)價(jià)各組大鼠濕熱泄瀉臨床癥狀變化程度，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考王濤[4]方法，見表1。根據(jù)表1中糞便形狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)大鼠腹瀉程度。

表1 大鼠臨床癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Scoring standard of clinical symptoms in rats

1.4 觀察大鼠臨床體征變化

觀察各組大鼠臨床體征，記錄體重、飲水量與采食量。

1.5 大鼠血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)

各組大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血，采抗凝血液約1 mL。進(jìn)行血常規(guī)指標(biāo)測(cè)定，主要檢測(cè)白細(xì)胞數(shù)目(white blood cell count, WBC)、中性粒細(xì)胞數(shù)目(neutrophil count, NEU)、單核細(xì)胞數(shù)目(monocytes count, MON)、淋巴細(xì)胞數(shù)目(lymphocyte count, LYM)、紅細(xì)胞壓積(hematocrit, HCT)、紅細(xì)胞數(shù)目(red blood cell count, RBC)、血紅蛋白濃度(hemoglobin, HGB)和血小板數(shù)目(platelet count, PLT)。

1.6 大鼠主要血清生化指標(biāo)檢測(cè)

各組大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈采全血4 mL，靜置2～3 h，室溫下3 500 r·min-1離心10 min，取上清備用。使用全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)血清中總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、葡萄糖(glucose，GLU)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、肌酐(creatinine，CREA)和尿素(urea，UREA)。

1.7 大鼠主要血清因子含量檢測(cè)

ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清中TGF-β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-17、IL-23含量。

1.8 大鼠主要臟器指數(shù)測(cè)定

剖取大鼠心、肝、脾、肺、腎、胸腺以及盲腸至肛門段腸道，剝除臟器表面被膜及脂肪后，稱量各臟器質(zhì)量，并計(jì)算大鼠臟器指數(shù)：

臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/大鼠體質(zhì)量(mg·g-1)

1.9 大鼠主要臟器的病理組織學(xué)觀察

取各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、胸腺置于10%中性甲醛溶液中固定后，雙蒸水沖洗干凈，然后乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片并HE染色，顯微鏡下進(jìn)行各組大鼠主要臟器的病理組織學(xué)觀察。

1.10 大鼠結(jié)腸TGF-β1、Foxp3、RORγt mRNA表達(dá)水平測(cè)定

取各組大鼠結(jié)腸組織，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)、維甲酸相關(guān)孤兒受體γt(retinoid acid-related orphan receptor gammat，RORγt)、叉頭框蛋白P3(forkhead box protein P3，F(xiàn)oxp3) mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.11 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié) 果

2.1 大鼠臨床體征變化

試驗(yàn)期間空白組大鼠被毛光潔，精神狀態(tài)良好，活潑好動(dòng)，采食飲水，以及糞便、尿液、肛門情況均正常。與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠精神沉郁，被毛粗糙泛黃(圖2A)，蜷縮懶動(dòng)，食欲明顯下降，糞便稀薄黏膩、色黃而臭(圖2B)，符合濕熱泄瀉證候的整體特征。采用紫錐菊提取物和柳氮磺吡啶治療6 d后，與模型組相比，各治療組的癥狀明顯減輕，被毛恢復(fù)光澤(圖2D)，飲食與活動(dòng)增加，糞便逐漸成形且顏色加深，肛門狀態(tài)良好(圖2 C)，個(gè)別大鼠的糞便仍黏軟呈黃褐色，提示紫錐菊提取物對(duì)濕熱泄瀉證具有緩解效果。

A、B. 治療前濕熱泄瀉大鼠糞便情況與被毛狀態(tài)；C、D.紫錐菊提取物低劑量組治療后大鼠的肛門與精神狀態(tài)。掃描文章首頁(yè)OSID碼可查看彩圖A, B. Hair state and the feces of rats with dampness-heat diarrhea before treatment; C, D. The anal and mental state of rats in the low-dose group of Echinacea purpurea extract after treatment. The color picture can be found by scanning the OSID code on the front page of the article圖2 治療前后濕熱泄瀉大鼠臨床癥狀Fig.2 Clinical symptoms of rats with Intestine amp-heat syndrome before and after treatment

第12天造模結(jié)束時(shí)，與空白組相比，模型組大鼠臨床癥狀評(píng)分顯著升高(P<0.05)，腹瀉程度評(píng)分顯著升高(P<0.05)。第13～18天評(píng)分持續(xù)降低且顯著高于空白組(P<0.05)。與模型組相比，各治療組臨床癥狀評(píng)分在第13～17天無(wú)顯著差異(P>0.05)，第18天時(shí)紫錐菊提取物低劑量組大鼠臨床癥狀評(píng)分與腹瀉程度評(píng)分顯著降低(P<0.05)(圖3A、B)。

A.臨床癥狀評(píng)分；B.腹瀉程度評(píng)分；C.體重；D.飲水量；E.采食量。*.與空白組相比，模型組P<0.05， #. 與模型組相比，治療組P<0.05。掃描文章首頁(yè)OSID碼可查看彩圖A. Clinical symptom scores; B. Diarrhea scores; C. Body weight; D. Water consumption; E. Feed intake. * indicates that compared with the blank group, the model group P<0.05, # indicates that compared with the model group, the treatment group P<0.05. The color picture can be found by scanning the OSID code on the front page of the article圖3 各組大鼠臨床體征變化情況Fig.3 Changes of clinical signs of rats in each group

第12天造模結(jié)束時(shí)，與空白組相比，模型組大鼠體重顯著降低(P<0.05)。第13～18 d治療過(guò)程中模型組與各治療組體重逐漸升高，第18天時(shí)紫錐菊提取物高劑量組與陽(yáng)性藥物組的大鼠體重高于模型組，但無(wú)顯著差異(P>0.05)(圖3C)。

第12 天造模結(jié)束時(shí)，與空白組相比，模型組大鼠飲水量升高但差異不顯著(P>0.05)，第13～18天模型組與各治療組大鼠飲水量逐步恢復(fù)至正常水平(圖3D)。

第12天造模結(jié)束時(shí)，與空白組相比，模型組大鼠采食量顯著降低(P<0.05)。第13～18天模型組與各治療組大鼠采食量逐步恢復(fù)至正常水平(圖3E)。

2.2 大鼠血常規(guī)指標(biāo)變化

與空白組相比，模型組大鼠血液中RBC、HGB、HCT含量均顯著降低(P<0.05)，WBC、NEU有增加的趨勢(shì)但差異不顯著(P>0.05)。與模型組相比，經(jīng)紫錐菊提取物及陽(yáng)性藥物治療后，各治療組大鼠血液RBC、HGB、HCT含量均有升高趨勢(shì)，其中，紫錐菊提取物高劑量組的HCT顯著增加(P<0.05)，紫錐菊提取物高、低劑量組與陽(yáng)性藥物組大鼠血液WBC、NEU的含量均有降低的趨勢(shì)但差異不顯著(P>0.05)(表2)。

表2 血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果Table 2 The results of blood routine test(n=8,

2.3 大鼠主要血清生化檢指標(biāo)變化

與空白組相比，模型組大鼠血清UREA、ALT水平均顯著降低(P<0.05)，AST、TC、TG、TP、ALB水平降低，但差異不顯著(P>0.05)。與模型組相比，經(jīng)紫錐菊提取物及陽(yáng)性藥物治療后，紫錐菊提取物高、低劑量組與陽(yáng)性藥物組大鼠UREA、ALT、AST、TC、TG、TP、ALB水平均有升高趨勢(shì)，其中，各治療組的TP顯著升高(P<0.05)，紫錐菊提取物高、低劑量組的UREA、TC、TP、ALB水平顯著升高(P<0.05)，陽(yáng)性藥物組AST水平升高且差異顯著(P<0.05)(表3)。

表3 血生化檢測(cè)結(jié)果Table 3 The results of blood biochemical test(n=8,

2.4 大鼠主要血清炎性因子水平變化

與空白組相比，模型組大鼠血清IL-6、IL-17、IL-23水平均顯著升高(P<0.05)，血清TGF-β、IL-2、IL-10水平均顯著降低(P<0.05)。與模型組相比，紫錐菊提取物高、低劑量組與陽(yáng)性藥物組大鼠血清IL-17、IL-23水平均顯著降低(P<0.05)，紫錐菊提取物高、低劑量組大鼠血清TGF-β水平升高，且顯著高于模型組(P<0.05)，其中，紫錐菊提取物低劑量組IL-2、IL-10、IL-17、IL-23效果優(yōu)于紫錐菊提取物高劑量組與陽(yáng)性藥物組(圖4)。

C.空白組；M.模型組；L.紫錐菊提取物低劑量組；H.紫錐菊提取物高劑量組；S.陽(yáng)性藥物組。圖中字母不同表示各組間差異顯著(P<0.05)C. Control group; M. Model group; L. Low-dose group of E. purpurea extract; H. High-dose group of E. purpurea extract; S. Positive medicine control group. The columns with different small letters mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter mean no significant difference (P>0.05)圖4 大鼠血清炎性細(xì)胞因子水平的變化Fig.4 Changes of serum inflammatory cytokines in rats

2.5 大鼠主要臟器指數(shù)變化

與空白組相比，模型組大鼠心、脾與肺指數(shù)顯著升高(P<0.05)，胸腺指數(shù)升高但差異不顯著(P>0.05)。與模型組相比，紫錐菊提取物高、低劑量組與陽(yáng)性藥物組大鼠心、脾、肺與胸腺指數(shù)均有降低的趨勢(shì)，其中，紫錐菊提取物高劑量組大鼠的心指數(shù)顯著降低(P<0.05)，紫錐菊提取物低劑量組的肺、脾指數(shù)顯著降低(P<0.05)，陽(yáng)性藥物組的肺指數(shù)顯著降低(P<0.05)。各治療組大鼠胸腺指數(shù)降低但差異不顯著(P>0.05)(表4)。

表4 大鼠臟器指數(shù)的變化Table 4 Changes of organ index in rats(n=8,

2.6 大鼠主要臟器的病理組織學(xué)變化

大鼠心、肝、脾、肺、腎、胸腺病理組織學(xué)檢查結(jié)果如圖5所示，空白組心肌纖維形態(tài)正常，無(wú)明顯病理變化；肝細(xì)胞均為正常形態(tài)，肝索排列整齊；脾組織、細(xì)胞形態(tài)正常，紅髓、白髓界限清晰；肺的組織界限清晰，肺泡隔、肺泡腔、肺間質(zhì)均顯示形態(tài)正常，無(wú)異常細(xì)胞浸潤(rùn)；腎小球、腎小囊、腎小管均形態(tài)正常；胸腺組織結(jié)構(gòu)正常，無(wú)明顯病理變化。

C.空白組；M.模型組；L.紫錐菊提取物低劑量組；H.紫錐菊提取物高劑量組；S.陽(yáng)性藥物組。掃描文章首頁(yè)OSID碼可查看彩圖C. Control group; M. Model group; L. Low-dose group of E. purpurea extract; H. High-dose group of E. purpurea extract; S. Positive medicine control group. The color picture can be found by scanning the OSID code on the front page of the article圖5 大鼠心、肝、脾、肺、腎、胸腺病理組織切片圖(HE，200×)Fig.5 Pathological sections of heart, liver, spleen, lung, kidney and thymus in rats(HE，200×)

模型組可見心組織出現(xiàn)出血瘀血現(xiàn)象(圖5中箭頭)；肝組織結(jié)構(gòu)正常，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)水腫現(xiàn)象，細(xì)胞界限不清；脾出現(xiàn)紅細(xì)胞沉積，顯示脾陳舊性出血(圖5中箭頭)；腎小球上皮細(xì)胞變性壞死，可見炎性細(xì)胞增生浸潤(rùn)(圖5中箭頭)；肺與胸腺無(wú)明顯病理變化。

紫錐菊提取物高、低劑量組可見心肌纖維結(jié)構(gòu)正常，肝、腎組織形態(tài)正常；脾出血情況有所好轉(zhuǎn)，趨于正常。陽(yáng)性藥物組部分肝細(xì)胞出現(xiàn)變性壞死，可見組織水腫；脾淋巴細(xì)胞稀疏，出現(xiàn)水腫現(xiàn)象；腎組織間出現(xiàn)大面積蛋白尿的沉積(圖5中箭頭)。

2.7 大鼠結(jié)腸TGF-β1、Foxp3、RORγt mRNA相對(duì)表達(dá)量

與空白組相比，模型組的TGF-β1與Foxp3 mRNA表達(dá)量顯著下降(P<0.05)，而RORγt mRNA表達(dá)顯著上升(P<0.05)。與模型組相比，紫錐菊提取物高、低劑量組的TGF-β1與Foxp3 mRNA表達(dá)顯著上升(P<0.05)，紫錐菊提取物高、低劑量組與陽(yáng)性藥物組的RORγt mRNA表達(dá)顯著下降(P<0.05)(表5)。

表5 各組大鼠結(jié)腸TGF-β1、Foxp3和RORγt mRNA表達(dá)水平Table 5 Colon TGF-β1, Foxp3 and RORγt mRNA expression level in each group (n=6,

3 討 論

畜禽濕熱泄瀉通常表現(xiàn)為機(jī)體津液黏膩，舌色赤黃且苔厚，小便短少，并伴隨著劇烈泄瀉，腹部腸鳴如雷，糞便質(zhì)如稀粥且混有黏液，糞便味臭等。濕熱泄瀉動(dòng)物模型的建立結(jié)合了現(xiàn)代獸醫(yī)學(xué)的“病”與中獸醫(yī)學(xué)的“證”，本研究中濕熱泄瀉模型大鼠不僅出現(xiàn)腹瀉和黏液便等病理變化，同時(shí)還出現(xiàn)精神沉郁、舌苔黃厚、糞便黏膩等臨床證候整體特征[5]。紫錐菊具有清熱涼血、疏風(fēng)散邪的功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，紫錐菊有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗真菌、抗病毒和抗氧化等作用，并有研究表明，紫錐菊醇提取物有降血壓、降血脂的作用[9-10]。本研究采用紫錐菊提取物治療濕熱泄瀉大鼠，結(jié)果表明，紫錐菊提取物具有緩解濕熱泄瀉大鼠臨床癥狀的效果，各治療組在試驗(yàn)過(guò)程中其臨床癥狀評(píng)分隨時(shí)間出現(xiàn)明顯下降的趨勢(shì)，且治療結(jié)束時(shí)各治療組評(píng)分均低于模型組，其中，紫錐菊提取物低劑量組的評(píng)分顯著低于模型組，且效果優(yōu)于高劑量紫錐菊提取物與陽(yáng)性藥物。紫錐菊提取物高、低劑量組與陽(yáng)性藥物組大鼠體重在治療過(guò)程中緩慢增長(zhǎng)，接近正常水平，飲水量與采食量也處于正常范圍內(nèi)。提示大鼠經(jīng)紫錐菊提取物治療后，其濕熱泄瀉癥狀與體征得到明顯改善，機(jī)體逐步恢復(fù)正常，且低劑量的紫錐菊提取物有更好的治療效果。

脾是淋巴細(xì)胞接受抗原刺激和發(fā)生免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所，也是T、B細(xì)胞發(fā)育的重要場(chǎng)所，脾和胸腺重量的異?？蓪?dǎo)致動(dòng)物免疫功能的降低[11-12]。本研究中，經(jīng)紫錐菊提取物治療后，濕熱泄瀉大鼠心、肺、脾、胸腺指數(shù)回調(diào)，且紫錐菊提取物低劑量組的肺、脾指數(shù)顯著低于空白組，說(shuō)明紫錐菊提取物對(duì)濕熱泄瀉大鼠的免疫機(jī)能和心肺功能具有調(diào)節(jié)作用。

血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)中，主要參與機(jī)體防衛(wèi)功能的WBC具有免疫反應(yīng)和吞噬作用，其中，NEU數(shù)目的異常提示可能發(fā)生急性感染或炎癥，RBC可以為機(jī)體輸送氧氣與二氧化碳，調(diào)節(jié)血液酸堿度，并起到免疫調(diào)節(jié)的作用[13-14]。有研究表明腹瀉會(huì)導(dǎo)致白細(xì)胞病理性的升高或降低，并出現(xiàn)血小板降低的現(xiàn)象[15]。本研究中紫錐菊提取物可以改善濕熱泄瀉大鼠顯著降低的RBC、HGB、HCT含量與降低的WBC、NEU含量，說(shuō)明感染大腸桿菌的濕熱泄瀉模型大鼠機(jī)體引起炎癥反應(yīng)。而紫錐菊提取物具有改善自身細(xì)胞的炎性損傷和緩解應(yīng)激作用。

血液生化學(xué)的一些指標(biāo)能夠?qū)膊〉脑\斷起到輔助作用，其中，血清TP與ALB由肝合成，具有輸送各種代謝產(chǎn)物、維持機(jī)體膠體滲透壓等生理功能，從而對(duì)機(jī)體起到免疫調(diào)節(jié)作用[16]。ALT、AST、TG、TC等指標(biāo)反映了肝功能情況，ALT是位于肝細(xì)胞胞質(zhì)的胞質(zhì)酶，而AST通常位于肝細(xì)胞線粒體中，當(dāng)肝受損較輕時(shí)細(xì)胞膜通透性增加引起細(xì)胞質(zhì)內(nèi)ALT釋放，肝細(xì)胞受損嚴(yán)重時(shí)才釋放線粒體內(nèi)AST[17]。UREA與CREA是反映腎功能的重要指標(biāo)，當(dāng)腎發(fā)生炎癥或腎功能不全時(shí)，UREA與CREA由于無(wú)法排出體外而累積過(guò)多[18]。本研究中，紫錐菊提取物能夠提高由于濕熱泄瀉造模過(guò)程造成的UREA、ALT、AST、TC、TG、TP、ALB水平的降低，說(shuō)明造模過(guò)程中飲食過(guò)度肥甘厚膩損傷機(jī)體肝腎功能，引起血脂上升，而紫錐菊提取物能夠回調(diào)紊亂的血生化指標(biāo)，具有一定的抗損傷保肝作用。

Th17分泌的IL-17可以調(diào)控下游細(xì)胞因子和趨化因子，與炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病密切相關(guān)[19]。機(jī)體受到外源性抗原刺激時(shí)，樹突狀細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞會(huì)被激活而產(chǎn)生IL-23[20]。TGF-β能上調(diào)Foxp3的表達(dá)，促進(jìn)通過(guò)細(xì)胞接觸依賴機(jī)制Treg細(xì)胞的分化，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[21-23]。經(jīng)過(guò)紫錐菊提取物與陽(yáng)性藥物的治療，各治療組血清IL-17、IL-23水平顯著降低，TGF-β水平顯著升高，說(shuō)明紫錐菊提取物可抑制濕熱泄瀉大鼠分泌過(guò)多的炎性介質(zhì)，減少炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，使機(jī)體促炎與抑炎細(xì)胞因子逐步恢復(fù)平衡狀態(tài)[24-25]。促進(jìn)Th17細(xì)胞增殖分化的RORγt通過(guò)抑制效應(yīng)T細(xì)胞誘導(dǎo)機(jī)體炎癥，F(xiàn)oxp3通過(guò)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖分化調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，研究表明，Treg細(xì)胞能通過(guò)調(diào)控腸道T細(xì)胞的活化從而調(diào)節(jié)小鼠的腸道免疫反應(yīng)[26-27]。本試驗(yàn)中紫錐菊提取物可顯著上調(diào)濕熱泄瀉大鼠結(jié)腸TGF-β1、Foxp3 mRNA水平，降低RORγt mRNA水平，調(diào)節(jié)失衡的Th17/Treg，改善機(jī)體炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮對(duì)濕熱泄瀉的治療效果[28-29]。

本研究中，濕熱之邪主犯胃腸道，但對(duì)其他臟腑也有一定損害，濕熱泄瀉模型大鼠的心、肝、脾、腎等臟器均有不同程度的病理學(xué)變化，心出現(xiàn)大面積瘀血，肝水腫，脾水腫，腎出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及蛋白尿的沉積。經(jīng)紫錐菊提取物治療后，受損臟器的病理變化減輕或消失，基本恢復(fù)正常。提示紫錐菊提取物對(duì)濕熱泄瀉大鼠臟器水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及瘀血均有一定程度的緩解作用[30]。

4 結(jié) 論

紫錐菊提取物能夠通過(guò)降低血脂、調(diào)節(jié)血清炎性因子水平及改善臟器功能，以改善濕熱泄瀉大鼠的臨床癥狀，其中，低劑量的紫錐菊提取物在降低血清IL-17、IL-23水平與結(jié)腸TGF-β1 mRNA、RORγt mRNA表達(dá)方面對(duì)緩解大鼠濕熱泄瀉的效果更好。