IRMA及SP免疫組化染色檢測(cè)在結(jié)腸癌診斷中的意義

陳敬信 王小玲

(1.陜西省森林工業(yè)職工醫(yī)院病理科，陜西 西安 710300；2.渭南市第二醫(yī)院病理科，陜西 渭南 714000)

結(jié)腸癌為結(jié)直腸癌的主要類型之一，其發(fā)生周期比較長(zhǎng)，開(kāi)始發(fā)病時(shí)多為結(jié)腸良性腫瘤，然后逐漸發(fā)展到結(jié)腸癌，這個(gè)過(guò)程涉及到多種基因的突變與異常表達(dá)等[1]。生長(zhǎng)抑制因子2(ING2)為一種抑制因子，但是也在多種惡性腫瘤呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，可促進(jìn)腫瘤增殖與侵襲[2]。基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)為一種促癌因子，也屬于基質(zhì)金屬蛋白酶重要家族成員之一，MMP-13表達(dá)升高可參與惡性腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者的病情惡化[5]。當(dāng)前診斷結(jié)腸癌的方法比較多，鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(SP)免疫組化染色為檢測(cè)ING2與MMP-13表達(dá)的重要方法，但是多為定性分析，定量分析還存在一定的不足[3]。固相免疫放射分析法(IRMA)為當(dāng)前比較新穎的診斷方法，是基于血清學(xué)的診斷方法。本文探討了IRMA及SP免疫組化染色檢測(cè)在結(jié)腸癌診斷中的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年8月到2021年6月在我院手術(shù)切除的結(jié)腸良性腫瘤患者(結(jié)腸良性腫瘤組)78例與結(jié)腸癌患者(結(jié)腸癌組)78例。結(jié)腸癌組中男40例，女38例，平均年齡(57.39±3.68)歲，平均體質(zhì)量指數(shù)(20.87±1.57)kg/m2，平均腫瘤直徑(3.58±0.27)cm。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡20～75歲；所有病例經(jīng)過(guò)病理診斷為結(jié)腸癌或結(jié)腸良性腫瘤，病理類型：腺癌70例，鱗癌8例；漿膜浸潤(rùn)30例；組織學(xué)分化：高分化18例，中分化29例，低分化31例；臨床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期 22例，Ⅲ期16例，Ⅳ期12例。結(jié)腸良性腫瘤組中男39例，女39例，平均年齡(57.29±5.11)歲，平均體質(zhì)量指數(shù)(20.48±1.11)kg/m2，平均腫瘤直徑(3.56±0.33)cm。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡20～75歲；所有病例經(jīng)過(guò)病理診斷為結(jié)腸癌或結(jié)腸良性腫瘤；本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)；具有詳細(xì)的一般資料與病理資料；無(wú)結(jié)腸手術(shù)史；手術(shù)與病理檢查前未給予任何治療(包括放療、生物治療、化療等)；患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：所取得標(biāo)本不全者；臨床資料不全者；樣本無(wú)法進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)分析者；妊娠與哺乳期婦女；合并其他部位腫瘤者。兩組患者一般資料對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2SP免疫組化染色檢測(cè) 采用免疫組化SP法檢測(cè)腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞ING2和MMP-13表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和陽(yáng)性強(qiáng)度。腫瘤組織經(jīng)4%甲醛固定、石蠟切片后，行SP法免疫組化染色。加入抗ING2和抗MMP-13，抗體滴度分別為1：50 和1：100，計(jì)算ING2與MMP-13陽(yáng)性表達(dá)率。染色強(qiáng)度評(píng)分：0分-無(wú)色，1分-淺黃色，2分-黃色，3分-深黃色。陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：0分-≤5%，1分-5%～25%，2分-26%～50%，3分-51%～75%，4分->75%。染色強(qiáng)度*陽(yáng)性細(xì)胞百分比=最終得分，0～4分為陰性表達(dá)，5～12分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3IRMA檢測(cè) 取所有患者的空腹靜脈血1～2 mL，靜置30 min后，1 000 rpm/min離心10 min，取上層血清，采用IRMA法檢測(cè)血清ING2與MMP-13含量，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京福瑞生物工程公司，陽(yáng)性閾值：ING2≥6.66 pg/mL，MMP-13≥4.45 pg/mL。

1.4調(diào)查內(nèi)容 調(diào)查兩組患者的性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤部位、腫瘤直徑等一般資料，重點(diǎn)記錄結(jié)腸癌患者的組織學(xué)分化、漿膜浸潤(rùn)、臨床分期、病理類型等情況。

2 結(jié) 果

2.1ING2與MMP-13 IRMA陽(yáng)性率對(duì)比 結(jié)腸癌組的ING2與MMP-13 IRMA陽(yáng)性率分別為71.8%和76.9%，高于結(jié)腸良性腫瘤組的14.1%和16.7%(χ2=52.977、56.875，P<0.05)。

2.2ING2與MMP-13 SP陽(yáng)性率對(duì)比 結(jié)腸癌組的ING2與MMP-13 SP陽(yáng)性率分別為74.4%和78.2%，高于結(jié)腸良性腫瘤組的15.4%和19.2%(χ2=54.833、54.292，P<0.05)。

2.3診斷情況 在156例患者中，IRMA診斷為結(jié)腸癌71例，結(jié)腸良性腫瘤85例；SP診斷為結(jié)腸癌77例，結(jié)腸良性腫瘤79例。

2.4診斷價(jià)值對(duì)比 IRMA診斷結(jié)腸癌的敏感性與特異性為89.7%(70/78)和98.7%(77/78)，SP診斷的敏感性與特異性為98.7%(77/78)和100.0%(78/78)，SP診斷的敏感性高于IRMA(χ2=5.778，1.006，P<0.05)。

3 討 論

ING2在乳腺癌、胃癌、食管癌、白血病、肺癌等人類多種惡性腫瘤組織中表達(dá)上升，而這種表達(dá)上升的現(xiàn)象是由于mRNA 表達(dá)減少或穩(wěn)定性下降有關(guān)，揭示ING2表達(dá)上升很可能參與了這些惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，初步確定了ING2 促癌基因的地位[4]。MMP-13 蛋白的過(guò)表達(dá)屬于病理狀態(tài)，與腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移密切有關(guān)[5]。

本文結(jié)果顯示，結(jié)腸癌組的ING2與MMP-13 IRMA陽(yáng)性率分別為71.8%和76.9%，高于結(jié)腸良性腫瘤組的14.1%和16.7%(P<0.05)；結(jié)腸癌組的ING2與MMP-13 SP陽(yáng)性率分別為74.4%和78.2%，高于結(jié)腸良性腫瘤組的15.4%和19.2%(P<0.05)，表明ING2與MMP-13在結(jié)腸癌患者IRMA及SP免疫組化染色診斷中都呈現(xiàn)高表達(dá)狀況。當(dāng)前也有研究顯示結(jié)直腸癌組織中MMP-13蛋白高于非病灶組織，也高于正常人群，且與結(jié)直腸癌的病理特征具有相關(guān)性，還可預(yù)測(cè)患者的預(yù)后[6]。ING2 在腫瘤組織或正常組織中的表達(dá)情況可能存在對(duì)器官的選擇性或是受不同蛋白的調(diào)控作用，ING2 高表達(dá)可能也參與了對(duì)一些與惡性腫瘤侵襲、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因的調(diào)控，而基質(zhì)屬蛋白酶家族就是參與腫瘤侵襲、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的主要基因家族[7]。

結(jié)腸癌也是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，占消化道腫瘤的20.0%以上。早期結(jié)腸癌患者的5年生存率可在50.0%以上，而晚期結(jié)腸癌患者的5年生存率低于20.0%，因此早期診斷結(jié)腸癌具有重要價(jià)值[8]。IRMA檢測(cè)屬于無(wú)創(chuàng)性檢測(cè)，還有簡(jiǎn)單、方便快速等特點(diǎn)，但是診斷的敏感性有待提高。免疫組化為病理科的常見(jiàn)檢測(cè)方法，診斷的特異性與敏感性都比較高，但是診斷比較費(fèi)時(shí)，對(duì)于診斷人員的經(jīng)驗(yàn)要求比較高[9]。本研究顯示，在156例患者中，IRMA診斷為結(jié)腸癌71例，結(jié)腸良性腫瘤85例；SP診斷為結(jié)腸癌77例，結(jié)腸良性腫瘤79例；IRMA診斷結(jié)腸癌的敏感性與特異性為89.7%(70/78)和98.7%(77/78)，SP診斷的敏感性與特異性為98.7%(77/78)和100.0%(78/78)，SP診斷的敏感性高于IRMA(P<0.05)，表明兩者診斷結(jié)直腸癌都有很高的特異性，但是SP診斷的敏感性更好。當(dāng)前有研究顯示顯示ING2與MMP-13 在正常人類成纖維細(xì)胞中穩(wěn)定的表達(dá)對(duì)維持其正常生長(zhǎng)過(guò)程發(fā)揮著極其重要的作用，不過(guò)ING2與MMP-13在不同腫瘤類型中的表達(dá)也存在差異性[10]。

綜上，ING2與MMP-13在結(jié)腸癌患者IRMA及SP免疫組化染色診斷中都呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，IRMA及SP診斷結(jié)直腸癌都有很高的特異性，但是SP診斷的敏感性更好。