CD200在惡性腫瘤作用中的研究進展

董一楠 賈佩琦

作者單位：300308 天津 天津市腫瘤醫(yī)院空港醫(yī)院腫瘤科

腫瘤免疫治療包括主動免疫治療、過繼細胞轉移治療和免疫檢查點阻斷治療，是極具前景的腫瘤治療手段。在腫瘤患者中，腫瘤細胞可以“劫持”某些免疫檢查點通路，逃避免疫監(jiān)視，抵抗宿主T細胞的細胞毒性作用。因此，阻斷免疫檢查點能降低腫瘤細胞的免疫逃逸，抑制腫瘤生長[1]。目前免疫檢查點阻斷療法在黑色素瘤、腎癌、非小細胞肺癌等實體腫瘤治療中已表現(xiàn)出顯著的臨床療效，而且隨著研究的深入，越來越多的免疫檢查點相繼被報道。CD200及其受體CD200R均屬于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成員，CD200與CD200R結合在抑制抗腫瘤免疫應答中發(fā)揮重要作用。近年來，研究顯示免疫檢查點CD200/CD200R在多種腫瘤中異常表達，且與腫瘤侵襲、轉移及患者預后相關，可能成為抗腫瘤治療的潛在靶點。本文就CD200的結構、生物學功能及其在腫瘤中的表達及臨床意義進行綜述。

1 CD200結構及其生物學功能

CD200（又稱為OX2、OX-90、MOX-2）是分子量為48 kDa的細胞表面糖蛋白，基因定位于染色體3q13.2，屬于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成員。CD200與CD47、PD-1、CTLA-4等免疫檢查點分子具有結構相似性，其包含2個胞外免疫球蛋白樣結構域：1個單跨膜的結構域和1個沒有信號模體的短細胞質尾[2-3]。CD200的受體CD200R（在小鼠為CD200R1-5；在人類為CD200R1，R2）也屬于Ⅰ型免疫球蛋白超家族成員，是CD200的同源受體，具有2個細胞外免疫球蛋白樣結構域和1個細胞質NPxY模體[4-5]。

CD200是一種免疫耐受信號分子，在維持機體自身免疫耐受中發(fā)揮重要作用[6-7]。CD200-CD200R相互作用能抑制促炎分子如TNF-α、IFN-γ及誘導型一氧化氮合酶的表達，繼而通過調節(jié)炎癥免疫反應的激活閾值，保護免疫特權部位、干細胞和其他重要組織細胞免受免疫損傷，以及促進外周免疫耐受[2，4，8]。此外，CD200-CD200R產生的免疫抑制效應在組織修復過程、移植物排斥反應、自身免疫性疾病及癌癥監(jiān)測中也起到關鍵性的作用[9]。CD200與CD200R結合后可導致CD200R的NPxY序列中的酪氨酸302磷酸化，激活Dok2-RasGAP復合物，抑制Ras-ERK信號傳導，進而抑制髓系細胞活化[5]。CD200與CD200R相互作用還能有效抑制T細胞免疫應答及NK細胞的殺傷活性，促進巨噬細胞分泌免疫抑制性色氨酸分解酶——吲哚胺-2，3-雙加氧酶（IDO），并且誘導調節(jié)性T細胞（regulatory T cell，Treg）擴增，導致Th1細胞因子轉變?yōu)?Th2 細胞因子，從而抑制免疫應答反應[8，10]。CD200/CD200R主要通過調節(jié)免疫和血管生成在腫瘤和非腫瘤疾病中發(fā)揮重要作用[11-14]。由此可見，CD200/CD200R主要通過調節(jié)免疫和血管生成在腫瘤和非腫瘤疾病中發(fā)揮重要作用。此外，PANKRATOVA等[15]發(fā)現(xiàn)CD200的新功能，能促進中樞神經系統(tǒng)神經發(fā)生，且與免疫調節(jié)作用無關。

2 CD200/CD200R在腫瘤中的作用

2.1 血液系統(tǒng)惡性腫瘤

既往研究已證實CD200在多種血液系統(tǒng)腫瘤中過表達，包括B細胞非霍奇金淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin lymohoma，B-NHL）、急性B淋巴細胞白血?。╝cute B lymphoblastic leukemia，B-ALL）、急性髓細胞白血?。╝cute ayelocytic leukemia，AML）、慢性淋巴細胞白血病（chronic lymphocytic leukemia，CLL）和多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）等，并且CD200高表達與患者預后不良相關，有望作為腫瘤治療靶點。AREF等[2]應用流式細胞術檢測52例初治AML患者治療前骨髓細胞CD200的表達情況，發(fā)現(xiàn)CD200陽性表達率為28.8%（15/52），其中CD200+患者的總生存率明顯低于 CD200-患者（19.2%vs35.3%，P=0.049）。KANDEEL等[16]對89例兒童AML患者治療前后的骨髓標本進行分析，發(fā)現(xiàn)CD200過表達與微小殘留病灶及淋巴結腫大相關，CD200和CD123共表達與較差的細胞遺傳學核型和較高的白細胞計數(shù)相關，且對完全緩解（complete response，CR）、微小殘留病灶陽性率和總生存期均有不利影響。在B-ALL研究中也顯示CD200和（或）CD56陽性表達的B-ALL患者預后不良，表現(xiàn)為CD200+和CD56+患者的總生存期（overall survival，OS）和 無 病生存期（disease-free survival，DFS）均低于CD200-和CD56-患者，因此檢測CD200和CD56表達水平，可能有助于對成人B-ALL患者進行分層[8]。

關于CD200/CD200R的作用機制，CD200可能通過增強Treg的功能促進腫瘤免疫逃逸，從而影響腫瘤進展，導致患者預后不良。在腫瘤免疫中，過表達CD200的腫瘤細胞能抑制表達CD200R的髓細胞正常激活，最終導致免疫抑制性級聯(lián)反應，并且導致混合淋巴細胞反應中的細胞因子譜改變，從Th1細胞因子（IFNs，IL-2）轉變?yōu)門h2細胞因子（IL-10，IL-4），從而誘導Treg擴增，抑制免疫應答反應。此外，CD200-CD200R還能抑制細胞毒性T淋巴細胞以及NK細胞的活性[2，12]。有研究報道，CD200在AML患者中過表達，并且通過上調CD4+CD25+FoxP3+Treg、調節(jié)性樹突狀細胞及免疫抑制性細胞因子，抑制AML記憶性Th1免疫反應，且直接損害NK細胞功能，協(xié)同免疫逃逸，促進腫瘤進展[2，16]。MCWHIRTER 等[17]發(fā)現(xiàn)CLL患者B細胞表面CD200高表達；在體外混合淋巴細胞反應中加入原代CLL細胞后發(fā)現(xiàn)，IL-2和IFN-γ下調并抑制Th1免疫反應，而應用抗CD200抗體能恢復Th1免疫反應并抑制Treg功能。還有研究表明，表達于腫瘤細胞表面的CD200經金屬蛋白酶切割后能以可溶性形式釋放，腫瘤釋放的CD200與抗原提呈細胞上的CD200R相互結合，抑制促炎細胞因子如IL-2和IFN-γ的分泌，增加髓源性抑制細胞和Treg的產生并抑制抗腫瘤免疫反應[11]。AREF等[18]發(fā)現(xiàn)CD200在MM患者中高表達，且CD200表達水平與Treg百分比呈顯著正相關；CD200-患者的無進展生存期（progression-free survival，PFS）和OS均優(yōu)于CD200+患者。該研究提示CD200過表達及Treg的擴增可能在MM進展中起到一定的作用，且CD200高表達是MM預后不良的因素。此外，SHI等[19]通過分析47例CD200+MM患者在治療過程中CD200表達的動態(tài)變化發(fā)現(xiàn)，38例（80.9%）患者在治療期間CD200表達轉陰，提示CD200表達可能是MM治療期間可用于評估預后的一個獨立標志物。

此外，CD200在慢性淋巴細胞增生性疾病的診斷中也具有重要意義。EL DIN FOUAD等[20]發(fā)現(xiàn)CD200對鑒別CLL、套細胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）和非典型CLL有較高的價值，在CLL預后和治療療效預測中也具有一定的應用潛力。CD160和CD200也被報道可能作為診斷CLL的敏感標志物，兩者聯(lián)合還能提高對CLL和B-NHL的鑒別敏感性[3]。VAUGHAN等[21]發(fā)現(xiàn)所有CD200+單形性移植后淋巴細胞增生性疾病（post-transplantation lymphoproliferative diseases，PTLDs）均為彌漫性大B細胞淋巴瘤，并且CD200+PTLDs患者的中位FoxP3+Treg水平高于CD200-PTLDs患者，且CD200+PTLDs患者的5年總生存率更低。

以上研究結果提示，CD200在多種血液系統(tǒng)腫瘤中廣泛表達，且與腫瘤的免疫逃逸、預后不良、療效評估等方面相關，可能作為血液系統(tǒng)腫瘤診斷的重要標志物及腫瘤治療的潛在靶點。

2.2 實體腫瘤

在實體腫瘤中，CD200/CD200R也可作為關鍵免疫檢查點。既往研究已表明CD200在多種實體腫瘤中過表達，且與腫瘤組織分化程度差及轉移相關，有望作為預后評估指標[22]。在皮膚鱗狀細胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma，CSCC）[23]中，CD200 高表達與腫瘤分化程度差及臨床分期高相關；且CD200高表達組患者OS短于CD200低表達組（31.3個月vs41.9個月）。REXIN等[4]發(fā)現(xiàn)在人膀胱移行細胞癌組織中CD200表達顯著高于正常膀胱組織，發(fā)生轉移的患者CD200表達水平明顯高于未發(fā)生轉移患者；且CD200表達水平與腫瘤組織分級呈正相關。BISGIN等[24]對直腸癌組織和正常直腸黏膜組織進行免疫組織化學分析，結果顯示，腫瘤細胞CD200高表達，正常黏膜上皮和基質細胞中的CD200R1高表達；其中87%的轉移性癌癥患者腫瘤細胞CD200表達上調，且基質細胞中CD200R1高表達，而CD200低表達與患者的較好OS相關。也有研究顯示CD200在卵巢癌、黑色素瘤、神經母細胞瘤和腎細胞癌的腫瘤細胞系上表達，抑制抗腫瘤免疫反應[25]。以上研究表明CD200/CD200R的表達水平與多種實體腫瘤患者復發(fā)風險、轉移和預后相關，可能成為實體腫瘤潛在治療靶點。

既往研究表明CD200可能通過參與免疫逃逸機制促進腫瘤生長。在結腸癌肝轉移患者中，CD200低表達組患者CD4+、CD8+、CD45RO+腫瘤浸潤淋巴細胞明顯高于CD200高表達組[26]。 ZGODZINSKI等[27]發(fā)現(xiàn)胃癌患者中表達CD200抗原的CD3+、CD3+/CD4+和CD3+/CD8+T細胞百分比均高于對照組，而表達CD200R的CD3+、CD3+/CD4+和CD3+/CD8+T細胞頻率均低于對照組；且胃癌患者CD19+/CD200+B淋巴細胞百分比高于健康對照組，而CD19+/CD200R+B淋巴細胞百分比低于健康對照組。以上研究提示CD200/CD200R可能與腫瘤的免疫逃逸機制有關，阻斷CD200/CD200R可能成為腫瘤免疫治療的新靶點。

此外，CD200-CD200R相互作用可能是調節(jié)腫瘤微環(huán)境的重要因素[28]。既往研究表明CD200可能通過增強骨髓源性抑制細胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）的功能促進腫瘤生長。例如，BELKIN等[29]在CSCC小鼠模型研究中發(fā)現(xiàn)CD200通過調節(jié)MDSC的功能來抑制抗腫瘤免疫反應，促進轉移性CSCC細胞的存活及轉移瘤形成。同樣，CHOUERIRY等[30]發(fā)現(xiàn)CD200在人胰腺細胞系、胰腺導管腺癌細胞及平滑肌肌動蛋白陽性的基質細胞中均有表達；而CD200R在胰腺導管腺癌患者的CD11b+CD33+HLADRlo/-MDSC中表達上調。該研究進一步通過體內實驗發(fā)現(xiàn)，應用抗CD200抗體能抑制皮下荷瘤小鼠的腫瘤生長，CD200抗體治療的小鼠腫瘤組織中MDSC的比例顯著降低，并且能顯著提高PD-1檢查點抗體治療的療效。體外實驗表明，與重組CD200蛋白共培養(yǎng)后能提高人MDSC介導的細胞因子表達和其抑制免疫細胞應答的能力。

如上所述，CD200在多種實體腫瘤中過表達，且與腫瘤病理分級、轉移、免疫逃逸相關，可能是預后不良的指標及腫瘤治療的潛在靶點。然而，近年來也有研究顯示CD200在部分腫瘤中發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用[28]。例如，YOSHIMURA等[12]發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中，CD200R高表達與預后不良相關，而CD200高表達與較好的預后相關，進一步在肺癌細胞系中下調CD200R，發(fā)現(xiàn)能顯著抑制腫瘤細胞增殖，改變炎癥和致癌信號通路相關基因的內源性mRNA表達水平。ISHIBASHI等[31]發(fā)現(xiàn)了一種特殊的患者特異性癌癥相關成纖維細胞（CAFs）亞群，該亞群能增強表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因突變陽性肺癌對EGFR-酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）吉非替尼的敏感性，而下調CD200能抑制CAFs的增敏潛能，這表明CD200可能是增強吉非替尼敏感性的功能分子。由此可見，CD200陽性的CAFs可以增強對EGFR-TKIs的敏感性，并可能在EGFR-TKIs的治療中具有重要的應用價值。

3 CD200抑制劑的應用

CD200-CD200R信號通路能抑制抗腫瘤免疫反應。多項實驗和臨床研究已表明阻斷CD200-CD200R信號通路能增強Th1細胞相關細胞因子表達及炎癥反應，抑制腫瘤生長[12，32]。CD200抑制劑Samalizumab（ALXN 6000，沙馬組單抗）是一種針對CD200的新型重組人源化單克隆抗體，能特異性地結合CD200，阻斷其與CD200R相互作用。目前Samalizumab被合理地設計成Ig G2/G4恒定區(qū)域，以最小化效應功能并保留免疫細胞亞群。一項Ⅰ期臨床試驗（NCT00648739）[10]探討了Samalizumab在CLL和MM中的治療作用。該研究中共23例晚期CLL患者和3例MM患者參與試驗，在“3+3”研究設計中，患者被依次分配到7個劑量水平隊列中（50 mg/m2，100 mg/m2，200 mg/m2，300 mg/m2，400 mg/m2，500 mg/m2及600 mg/m2），每28 d接受1次單劑量Samalizumab靜脈注射，其中21例（81%）患者接受多次給藥周期，5例（19%）患者（包括2例MM患者）接受1次劑量治療。結果顯示，Samalizumab可使CLL患者的腫瘤細胞CD200表達水平及循環(huán)CD200+CD4+T細胞頻率呈劑量依賴性下降，但Samalizumab沒有達到最大耐受劑量（maximal tolerable dose，MTD）；最終14例CLL患者腫瘤負荷減輕，1例CLL患者部分緩解，16例病情穩(wěn)定，而所有MM患者均出現(xiàn)疾病進展。提示在大多數(shù)晚期CLL患者中，Samalizumab具有良好的安全性，且治療療效好與腫瘤負荷降低有關。該研究的初步結果支持了Samalizumab可作為免疫檢查點抑制劑在CLL治療中發(fā)揮作用，但目前相關臨床試驗仍處于初級階段，仍需要進一步的臨床試驗研究。

GAISER等[33]發(fā)現(xiàn)在默克爾細胞癌（merkel cell carcinoma，MCC）中CD200高表達，CD200R表達于腫瘤微環(huán)境中的髓細胞。將抗CD200抗體靜脈注射到MCC異種移植小鼠體內后，發(fā)現(xiàn)抗CD200抗體對腫瘤具有特異性靶向作用，能增強機體對表達CD200腫瘤細胞的抗腫瘤免疫活性。因此，應用抗CD200抗體可能為MCC提供一種新的不依賴于PD-1/PD-L1阻斷的免疫治療方法。相似地，OLIN等[11]探討了以CD200為靶點的合成肽（CD200AR-L）在犬自發(fā)性膠質瘤動物模型中療效。結果顯示，與單獨皮下注射腫瘤裂解疫苗相比，在自體腫瘤裂解疫苗中加入CD200AR-L能顯著延長患自發(fā)性膠質瘤犬的中位OS（6.36個月vs12.70個月）。此外，CD200AR-L能增強抗原提呈細胞和T淋巴細胞的功能，抑制CD200R的表達，從而增強膠質母細胞瘤微環(huán)境中啟動免疫反應的能力。研究者進一步研發(fā)一種人源化的CD200AR-L并證實其能誘導趨化因子反應，刺激未成熟樹突狀細胞分化并顯著增強抗原特異性應答；且應用CD200AR-L可下調CD200R和PD-1受體的表達[34]。以上結果提示CD200AR-L可能作為一種新型的膠質母細胞瘤免疫治療藥物。

4 小結

綜上所述，CD200/CD200R通過參與免疫逃逸機制，抑制抗腫瘤免疫反應，促進腫瘤進展。免疫檢查點CD200在多種腫瘤中過表達，且與腫瘤的侵襲性增強、易轉移及患者的生存率低相關。阻斷CD200能增強抗腫瘤免疫反應，抑制腫瘤生長，但是在部分腫瘤中，腫瘤細胞表達CD200發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用?？傮w來說，CD200/CD200R在抑制抗腫瘤免疫應答反應中發(fā)揮了重要作用，因此可能成為抗腫瘤治療的潛在靶點。目前應用CD200抑制劑進行抗腫瘤治療的試驗也取得了一定進展，為抗腫瘤治療提供了新的思路。但目前關于CD200抑制劑的研究仍處于初級階段，未來仍需大量的臨床試驗進一步探索。