SYN、Tβ4與非小細(xì)胞肺癌臨床特征及預(yù)后的關(guān)系

伍永升，宋利明，王正煜，范志剛

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)是原發(fā)于支氣管黏膜、腺體及肺泡上皮的一種惡性腫瘤，具有發(fā)病率高、病死率高的特點(diǎn)[1]。目前，臨床主要依據(jù)患者TNM分期采用合適的診療計(jì)劃進(jìn)行治療，但NSCLC作為一種高度異質(zhì)性疾病，在療效及預(yù)后等方面仍存在明顯的個(gè)體差異，僅通過TNM分期作為方案制定的依據(jù)難以滿足治療需求。奚劍敏等[2]在NSCLC的研究中提出，突觸素(SYN)的檢測(cè)有利于預(yù)測(cè)NSCLC患者的預(yù)后，可作為病情進(jìn)展評(píng)估的重要標(biāo)志，但仍有部分學(xué)者持有不同意見。SYN屬于鈣結(jié)合糖蛋白，分布于神經(jīng)元突觸前囊泡膜，參與鈣調(diào)節(jié)及囊泡運(yùn)輸?shù)倪^程。而胸腺素β4(Tβ4)對(duì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、增殖分化有一定影響，屬于肌動(dòng)蛋白的鰲合型分子。馬藝欣等[3]認(rèn)為，Tβ4高表達(dá)與NSCLC預(yù)后不良相關(guān)，可能參與上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化成間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過程。因此，本研究通過分析SYN、Tβ4在不同組織中的表達(dá)情況及作用機(jī)制，旨在探索SYN、Tβ4與NSCLC臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年2月—2021年2月收治的NSCLC 98例。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理學(xué)檢查確診；臨床資料完整；均未接受放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能異常者；合并其他血液、腫瘤疾??；存在自身免疫性疾病。98例中男53例，女45例；年齡40～78(61.42±18.56)歲；疾病類型：腺癌66例，鱗癌32例；分化程度：低分化28例，中分化32例，高分化38例；腫瘤分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期34例，Ⅲ期36例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：轉(zhuǎn)移39例，無轉(zhuǎn)移59例。

1.2方法 所有患者在CT下經(jīng)皮穿刺活檢取材，在腫瘤組織及癌旁組織(距腫瘤組織5 cm)處取材。SYN、Tβ4抗體均購自Abcam公司，通用型SP試劑盒、DAB顯色管及抗原修復(fù)液等材料均購自北京中杉金橋生物有限公司。采用免疫組化法檢測(cè)SYN、Tβ4表達(dá)情況，具體步驟：將手術(shù)獲取的組織進(jìn)行包埋處理，切取厚度為4 μm的石蠟切片，經(jīng)基礎(chǔ)脫蠟、水化后，加0.3% H2O2內(nèi)源性過氧化氫酶15 min。經(jīng)過抗原熱修復(fù)后，將SYN、Tβ4抗體放入37 ℃環(huán)境中孵育120 min，封閉劑溫育30 min，隨后滴加二抗溫育30 min，將DAB作為顯色劑，用蘇木素染色，隨后進(jìn)行常規(guī)脫水、封片處理。結(jié)果評(píng)定：選10個(gè)高倍視野(×400)進(jìn)行觀察。SYN、Tβ4顯示淡黃至深棕色則為陽性，最終評(píng)分為染色強(qiáng)度×陽性細(xì)胞百分比。陽性細(xì)胞比例評(píng)分為0分：≤10%，1分：11%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分：≥75%。染色強(qiáng)度：0分：無色，1分：淡黃色，2分：棕色，3分：深棕色。最終評(píng)分：0～4分表示陰性，5～12分表示陽性。

1.3觀察指標(biāo) ①對(duì)比不同組織中SYN、Tβ4的表達(dá)情況。②分析SYN、Tβ4表達(dá)與臨床特征的關(guān)系。③通過電話、復(fù)查等方式隨訪1年，根據(jù)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組(1年內(nèi)無復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡)和預(yù)后不良組(1年內(nèi)死亡、病情進(jìn)展)，分析患者預(yù)后不良的影響因素。

2 結(jié)果

2.1SYN、Tβ4表達(dá)情況 NSCLC組織中SYN陽性表達(dá)率低于癌旁組織，Tβ4陽性表達(dá)率高于癌旁組織(P<0.01)。見表1。

2.2SYN、Tβ4表達(dá)與臨床特征的關(guān)系 NSCLC組織中SYN、Tβ4表達(dá)與年齡、性別、病理類型、腫瘤大小、吸煙史、分化程度無關(guān)(P>0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)(P<0.05)。見表2。

2.3影響NSCLC患者預(yù)后不良的單因素分析 98例中在1年內(nèi)無復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡60例，為預(yù)后良好組；1年內(nèi)死亡、病情進(jìn)展38例，為預(yù)后不良組。經(jīng)單因素分析，2組年齡、腫瘤大小、分化程度、病理類型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及SYN、Tβ4表達(dá)情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表3 影響NSCLC患者預(yù)后的單因素分析[例(%)]

表1 NSCLC患者不同組織中SYN、Tβ4表達(dá)情況[例(%)]

表2 NSCLC患者SYN、Tβ4表達(dá)與臨床特征的關(guān)系[例(%)]

2.4影響NSCLC患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 將單因素分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)納入多因素Logistic回歸分析，以預(yù)后情況為因變量(預(yù)后良好=0，預(yù)后不良=1)，自變量賦值：TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期=0，Ⅲ期=1；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：否=0，是=1；SYN：陽性=0，陰性=1；Tβ4：陰性=0，陽性=1。結(jié)果顯示，TNM分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及SYN陰性表達(dá)、Tβ4陽性表達(dá)是NSCLC患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05，P<0.01)。見表4。

3 討論

NSCLC是臨床常見的肺癌類型，約占肺癌的80%[4-5]。彭博和張臨友[6]報(bào)道，多數(shù)NSCLC患者預(yù)后較差且容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)等情況。隨著研究的深入，探索影響NSCLC預(yù)后的分子機(jī)制，逐漸發(fā)展為臨床研究的熱點(diǎn)。

大量研究證實(shí)，Tβ4在膀胱癌、結(jié)腸癌及甲狀腺髓樣癌等多種疾病中均出現(xiàn)異常表達(dá)的情況，其陽性表達(dá)率的上升與腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移息息相關(guān)[7]。盧晴晴等[8]研究發(fā)現(xiàn)，SYN在輔助診斷小細(xì)胞肺癌時(shí)的敏感度較高，其高表達(dá)與患者低生存率存在一定聯(lián)系。而在NSCLC中關(guān)于SYN的相關(guān)研究較少。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織中Tβ4陽性表達(dá)率高于癌旁組織，SYN陽性表達(dá)率低于癌旁組織，與眭玉霞等[9]研究結(jié)果基本一致。推測(cè)原因在于Tβ4可能通過誘導(dǎo)原肌球蛋白、β-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)，間接參與網(wǎng)絡(luò)重組過程，其誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化與細(xì)胞-基質(zhì)轉(zhuǎn)化極為相似，從而促進(jìn)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)與存活，當(dāng)Tβ4表達(dá)上調(diào)時(shí)，能明顯促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力[10]。

表4 影響NSCLC患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

在腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)生上皮-間質(zhì)的轉(zhuǎn)化過程中，SYN可能發(fā)揮明顯的抑制作用。在此過程中相關(guān)膠原蛋白、蛋白聚糖等黏性物質(zhì)被有效降解，促使細(xì)胞外基質(zhì)成分發(fā)生改變，顯著降低細(xì)胞黏附性，而SYN表達(dá)下調(diào)時(shí)，轉(zhuǎn)化抑制作用受限，造成腫瘤細(xì)胞遷移[11]。GüBELI等[12]在對(duì)體外進(jìn)化肽結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白的研究中發(fā)現(xiàn)，Tβ4與肌動(dòng)蛋白同為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的內(nèi)源性底物，在該酶的凋亡程序中具有重要意義。而轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶可通過促進(jìn)蛋白質(zhì)間發(fā)生共價(jià)交聯(lián)，使相關(guān)蛋白在結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生一定改變，能有效調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生。劉愛鳳等[13]研究發(fā)現(xiàn)，SYN在肺淋巴上皮瘤樣癌組織中陰性表達(dá)。而本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織中SYN、Tβ4的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)。提示，SYN陰性表達(dá)、Tβ4陽性表達(dá)與腫瘤細(xì)胞發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、促進(jìn)病情發(fā)展有關(guān)。分析原因在于，Tβ4能明顯加速間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖速度，利用其自身的更新和多向分化能力，對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)生表型轉(zhuǎn)移具有重要意義，其作用機(jī)制可能與白細(xì)胞介素-8的依賴性有關(guān)[14]。而ZHONG等[15]提出SYN基因在腎上腺皮質(zhì)瘤中的甲基化程度有所提升。其主要通過化學(xué)修飾的方式將蛋白質(zhì)、核酸等基因組形成甲基化產(chǎn)物，對(duì)相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控有一定的作用。在NSCLC組織中SYN甲基化程度升高，導(dǎo)致其陽性表達(dá)率下降。此外，本研究多因素Logistic回歸分析顯示，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及SYN、Tβ4表達(dá)情況為NSCLC患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。證實(shí)了SYN、Tβ4表達(dá)情況可作為NSCLC患者預(yù)后評(píng)估的有效依據(jù)。在以往體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，Tβ4表達(dá)下調(diào)對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲有著重要作用[16]。因此，當(dāng)Tβ4表達(dá)上調(diào)、SYN表達(dá)下調(diào)時(shí)，NSCLC患者預(yù)后通常不能達(dá)到理想狀態(tài)，但具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，NSCLC組織中SYN、Tβ4表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)，SYN陰性表達(dá)、Tβ4陽性表達(dá)是預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。