腦膠質(zhì)瘤組織中腫瘤壞死因子與MG-Ags的表達(dá)及其臨床意義

韓向陽(yáng) 張紅星 賈樂(lè)

(1.宜川縣醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 宜川 716200；2.西北大學(xué)附屬西安高新醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)三科，陜西 西安 710000；3.寶雞市中醫(yī)醫(yī)院病理科，陜西 寶雞 721001)

腦膠質(zhì)瘤是一類基因、組織和臨床特征存在異質(zhì)性的顱內(nèi)原位腫瘤，也是常見的腦部腫瘤，占顱內(nèi)原位腫瘤的40.0%左右。影像學(xué)為腦膠質(zhì)瘤的重要檢查方法，但是很難明確患者的病情，且主觀性比較強(qiáng)。當(dāng)前隨著分子生物學(xué)研究的逐漸深入，腦膠質(zhì)瘤的研究逐漸向分子病理學(xué)方向發(fā)展，特別是當(dāng)前腦膠質(zhì)瘤的基因治療方法與診斷方法也已經(jīng)取得了比較好的效果[1]。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)為比較常見的炎性標(biāo)志物，能加快腫瘤細(xì)胞的增殖并抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡[2]。胃癌抗原(MG-Ags)的表達(dá)水平與胃炎、胃癌的發(fā)展密切相關(guān)，當(dāng)前也是其他各種惡性腫瘤的重要標(biāo)志物，比如MG-Ags在血液惡性疾病與消化道惡性疾病中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，并參與凋亡、侵襲、增殖、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過(guò)程[3]。本文旨在探討腦膠質(zhì)瘤組織中TNF-α與MG-Ags的表達(dá)及其臨床意義，希望尋找腦膠質(zhì)瘤潛在治療靶點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年8月至2021年5月在本院診治的腦膠質(zhì)瘤患者66例，其中男35例，女31例；年齡22～74歲，平均(55.62±4.18)歲；臨床分期：Ⅰ期+Ⅱ期42例，Ⅲ期+Ⅳ期24例；組織學(xué)分化：高分化6例，中分化25例，低分化35例；腫瘤轉(zhuǎn)移35例；病理類型：星形細(xì)胞瘤36例，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤30例。納入標(biāo)準(zhǔn)：病理診斷為腦膠質(zhì)瘤；首次手術(shù)并且術(shù)前未接受任何形式的抗腫瘤治療；年齡20～75歲；臨床資料完整；醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此次研究；患者簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他腦部疾病的患者；患有其他嚴(yán)重急危重癥病的患者；妊娠與哺乳期婦女；合并其他部位腫瘤者；小學(xué)及其以下文化水平者。

1.2方法 (1)標(biāo)本取樣： 所有患者均接受手術(shù)治療，術(shù)中留取腦膠質(zhì)瘤組織(癌灶組)及癌旁組織(癌旁組，距癌組織3 cm處)。抗TNF-α抗體、抗MG-Ags抗體均購(gòu)自上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司，免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海生工公司，總RNA提取試劑購(gòu)自大連TAKARA公司。將所有組織標(biāo)本分為兩部分，一部分置于10%福爾馬林液中固定，另一部分保存于1.5 mL EP凍存管并投至液氮中速凍。(2)熒光定量PCR檢測(cè)：提取組織中的總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)TNF-α與MG-Ags mRNA相對(duì)表達(dá)水平，檢測(cè)體系為25 μL，其中樣品量為5 μL。逆轉(zhuǎn)錄后TNF-α與MG-Ags反應(yīng)體系：95℃預(yù)變性5 min，92℃變性60 s，55.0℃退火45 s，共40個(gè)循環(huán)，用(目的基因的吸光度值)/(β-actin 吸光度值)代表TNF-α與MG-Ags的mRNA相對(duì)表達(dá)水平。(3)Western-blot檢測(cè)：將組織樣本研磨后，使用RIPA進(jìn)行裂解、勻漿，3 000 rpm/min離心30 min后棄沉淀，使用考馬斯亮藍(lán)法定量上清液蛋白濃度，以聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后，TBST封閉1 h，加入抗TNF-α抗體與抗MG-Ags抗體，工作濃度都為1：500，4℃過(guò)夜保存，TBST洗滌后，加入二抗(工作濃度1：2000)，TBST洗滌后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光試劑自顯影，記錄與計(jì)算TNF-α與MG-Ags的蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

2 結(jié) 果

2.1TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比 癌灶組TNF-α與MG-Ags的mRNA相對(duì)表達(dá)水平均高于癌旁組(t=9.913、12.482，P<0.05)，癌灶組的TNF-α與MG-Ags 蛋白相對(duì)表達(dá)水平高于癌旁組(t=12.733、9.783，P<0.05)。見表1。

表1 TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比

2.2不同病理特征腦膠質(zhì)瘤組織的TNF-α與MG-Ags 蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比 在癌灶組中，不同臨床分期、組織學(xué)分化、腫瘤轉(zhuǎn)移的TNF-α與MG-Ags蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.933、13.823，10.088、12.742，21.848、17.773，P<0.05)。見表2。

表2 不同病理特征腦膠質(zhì)瘤組織的TNF-α與MG-Ags蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比

2.3診斷價(jià)值分析 ROC曲線顯示TNF-α、MG-Ags與聯(lián)合檢測(cè)診斷腦膠質(zhì)瘤的曲線下面積分別為0.782、0.814和0.867，診斷敏感性分別為86.2%、85.8%、90.2%，特異性分別為80.2%、81.3%、88.6%。

3 討 論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與炎性反應(yīng)關(guān)系密切，其中TNF-α具有促炎作用，在腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]。其中腫瘤體內(nèi)TNF-α來(lái)源并不單一，可由腫瘤細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，也可由二者共同產(chǎn)生。MG-Ags為一種胃腸道腫瘤相關(guān)的一種糖蛋白抗原，當(dāng)正常組織細(xì)胞膜表面糖蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，抗原決定簇可發(fā)生巨大變化，可發(fā)生出現(xiàn)抗原-抗體特異性結(jié)合，為此MG-Ags含量可以反映機(jī)體腫瘤相關(guān)抗原量的表達(dá)水平。MG-Ags對(duì)于診斷胃癌具有較高的敏感性及特異性，但是在診斷其他惡性腫瘤患者中也有所報(bào)道[5]。本文結(jié)果顯示，癌灶組TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白相對(duì)表達(dá)水平均高于癌旁組(P<0.05)，表明腦膠質(zhì)瘤組織中多伴隨有TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白的高表達(dá)。從機(jī)制上分析，TNF-α可調(diào)控血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況[6]。特別是腦膠質(zhì)瘤患者血漿中TNF-α水平升高的患者生存期較短，且與患者的病理特征存在相關(guān)性。MG-Ags當(dāng)前在機(jī)體免疫炎性反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，特別是在惡性腫瘤患者的末期，血清MG-Ags表達(dá)會(huì)發(fā)生較大的波動(dòng)，與患者預(yù)后存在相關(guān)性[7]。

在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的早期過(guò)程，病理性血管生成以及腫瘤細(xì)胞的侵襲性生長(zhǎng)起到了重要作用[8]。本文結(jié)果顯示，不同臨床分期、組織學(xué)分化、腫瘤轉(zhuǎn)移的腦膠質(zhì)瘤組織TNF-α與MG-Ags蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；ROC曲線顯示TNF-α、MG-Ags與聯(lián)合檢測(cè)診斷腦膠質(zhì)瘤的曲線下面積分別為0.782、0.814和0.867，診斷敏感性均>85.0%，特異性均>80.0%。提示TNF-α與MG-Ags在腦膠質(zhì)瘤中可能發(fā)揮促癌作用，也可反映患者的病情狀況。特別是在正常的中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)TNF-α的含量比較低；當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生損傷后，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞可大量產(chǎn)生TNF-α，導(dǎo)致患者的病情惡化[9]。而MG-Ags的高表達(dá)可導(dǎo)致蛋白酶體降解磷酸化雌激素受體能減弱，并使其增殖功能，增加細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性，促進(jìn)血管生成，參與惡性腫瘤的浸潤(rùn)[10]。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤組織中TNF-α、MG-Ags的mRNA與蛋白都呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與患者的病理特征明顯相關(guān)，也可為診斷與預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤的重要分子標(biāo)志物。本研究由于經(jīng)費(fèi)比較低，沒(méi)有納入非膠質(zhì)瘤患者，也沒(méi)有進(jìn)行血清學(xué)分析，將在后續(xù)研究中探討。