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    外周血T 細(xì)胞亞群和ST2L 在NSCLC 抗PD-1 治療中的變化

    2023-01-06 09:47:44湯建磊李小虹通信作者
    醫(yī)藥前沿 2022年27期
    關(guān)鍵詞:武進(jìn)免疫治療單抗

    許 姣,湯建磊,李小虹(通信作者)

    (1 江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院<徐州醫(yī)科大學(xué)武進(jìn)臨床學(xué)院>呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科 江蘇 常州 213000)

    (2 江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院<徐州醫(yī)科大學(xué)武進(jìn)臨床學(xué)院>重癥監(jiān)護(hù)室 江蘇 常州 213000)

    (3 江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院<徐州醫(yī)科大學(xué)武進(jìn)臨床學(xué)院>醫(yī)學(xué)檢驗科 江蘇 常州 213000)

    肺癌是發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤,2 0 1 8 GLOBOCAN 的數(shù)據(jù)顯示,全球新發(fā)肺癌患者約209 萬例,死亡176 萬例[1],我國肺癌發(fā)病率每年增長26.9%,2015年新診斷肺癌73.3萬例,61萬人死于肺癌[2]。在腫瘤微環(huán)境中,細(xì)胞程序性死亡受體1(PD-1)及其配體PD-L1 結(jié)合開啟腫瘤免疫抑制程序,是免疫調(diào)節(jié)的重要組成部分。T 細(xì)胞是抗腫瘤免疫應(yīng)答中的核心執(zhí)行者,腫瘤細(xì)胞的PD-L1 蛋白與T 細(xì)胞上的PD-1 受體結(jié)合可傳導(dǎo)抑制信號,限制T 細(xì)胞的活化、增殖、細(xì)胞毒性及細(xì)胞因子的分泌,下調(diào)抗腫瘤免疫應(yīng)答,開啟免疫逃逸。以納武利尤單抗、帕博利珠單抗等為代表的PD1 抑制劑成為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的治療新選擇[3-4]。因此,篩選免疫治療的最有效預(yù)測因子的研究亟需進(jìn)一步開展。ST2(生長刺激表達(dá)基因2 蛋白)位于2 號染色體,可編碼ST2L、sST2、ST2V 和ST2LV 蛋白[5-6]。ST2L 主要表達(dá)于Th 細(xì)胞、Treg 細(xì)胞等參與細(xì)胞增殖,而sST2 可能起到負(fù)性作用[7]。本研究者前期研究已證實(shí)NSCLC 癌組織中ST2 基因和ST2 蛋白高表達(dá),且在非小細(xì)胞肺癌中ST2 介導(dǎo)了Th1/Th2 細(xì)胞因子漂移[8]。但目前免疫治療的療效預(yù)測標(biāo)記物尚未明確,腫瘤組織中PD-L1 表達(dá)水平、錯配基因修復(fù)蛋白(MMR)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)、腫瘤組織的突變負(fù)荷(TMB)等都可成為免疫治療療效的預(yù)測指標(biāo),但其預(yù)測能力尚存爭議[9-10]。本研究旨在探討晚期非小細(xì)胞肺癌患者抗PD-1 治療前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、ST2L 水平變化,現(xiàn)報道如下。

    1.資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2020年1 月—2022年1 月江蘇大學(xué)附屬武進(jìn)醫(yī)院行抗PD-1 治療的晚期非小細(xì)胞肺癌患者30 例為肺癌組,選取同期30 名體檢健康者作為對照組。肺癌組男2 2例,女8 例;≥8 0歲7 例,<8 0歲2 3例;吸煙≥600 支/年者20 例,<600 支/年者10 例。對照組中男2 2例,女8 例;≥8 0歲5 例,<8 0歲2 5例;吸煙≥600 支/年者18 例,<600 支/年者12 例。兩組一般資料比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究符合《赫爾辛基宣言》要求。

    納入標(biāo)準(zhǔn):①肺癌組病理組織學(xué)明確診斷為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC);②EGFR、ALK 陰性NSCLC;③ECOG 評分0 ~2 分。排除標(biāo)準(zhǔn):①既往合并嚴(yán)重肝腎功能損害;②患有自身免疫系統(tǒng)疾病。所有患者均接受至少2 周期抗PD-1 治療,并簽署知情同意書。

    1.2 方法

    (1)TIMER(Tumor Immune Estimation Resource)數(shù)據(jù)庫。TIMER 數(shù)據(jù)庫(https://cistrome.shinyapps.io/timer/)分析提示在NSCLC 中ST2 與CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞的相關(guān)性,通過ssGSEA 方法,得到每個樣品中免疫相關(guān)基因集打分(免疫基因集包括免疫細(xì)胞類型、功能和通路)。通過聚類分析,將樣品分為兩組,即高免疫組(Immunity_H)、低免疫組(Immunity_L),然后分析每個免疫組ST2 的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)ST2 可能和免疫治療療效密切相關(guān)。具體步驟:①通過TCGA 數(shù)據(jù)庫(https://portal.gdc.cancer.gov/)下載和整理數(shù)據(jù);②ssGSEA 分析,得到每個樣品免疫打分;③根據(jù)ssGSEA 打分,對樣品分組,得到2 個免疫分組(Immunity_H、Immunity_L);④免疫分組和ST2 的相關(guān)性。(2)治療方法。肺癌組患者均接受PD-1單抗治療,用藥方法:信迪利單抗200 mg/次靜滴,21 d為1 個周期或替雷利珠單抗200 mg/次靜滴,21 d 為1 個周期或卡瑞利珠單抗200 mg/次靜滴,14 d 為1 個周期。

    1.3 觀察指標(biāo)

    檢測外周血CD4+、CD8+、ST2L 對照組、肺癌組患者在第1 次抗PD-1 治療前及抗PD-1 治療2,4周期后,空腹抽取外周血5 m L,EDTA 抗凝管,嚴(yán)禁冷藏用,SemiBio 細(xì)胞免疫芯片檢測CD4+、CD8+;離心取細(xì)胞,BSP005 提取膜蛋白,凍存于-20 ℃。按照ELISA 操作步驟,檢測ST2L。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

    使用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。符合正態(tài)分布的計量資料采用(± s)表示,多組間比較行t檢驗;若不符合正態(tài)分布,采用中位數(shù)和四分位數(shù)[M(Q1,Q3)]表示,多組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗;計數(shù)資料用頻數(shù)(n)和百分率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2.結(jié)果

    2.1 TIMER 數(shù)據(jù)庫分析ST2 與CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞浸潤相關(guān)

    TIMER 數(shù)據(jù)庫顯示ST2 和CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞浸潤呈正相關(guān)(P<0.05),見圖1。

    圖1 ST2 和CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞浸潤相關(guān)性分析

    2.2 通過ssGSEA(single sample GSEA)發(fā)現(xiàn)ST2可能和免疫治療療效相關(guān)

    通過ssGSEA(single sample GSEA)方法,發(fā)現(xiàn)ST2可能和免疫治療療效密切相關(guān)(P<0.05,0.001,0.01,0.05“***”,“**”,“*”),見圖2。

    圖2 ST2 與免疫治療療效相關(guān)性分析

    2.3 各組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群比較

    肺癌組抗PD-1 治療前后外周血CD4+細(xì)胞水平、CD4+/CD8+均低于對照組,而CD8+細(xì)胞水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);抗PD-1 治療后外周血CD4+細(xì)胞水平、CD4+/CD8+較治療前有升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);治療前后,CD8+細(xì)胞水平變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

    表1 各組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群比較( ± s,個/微升)

    表1 各組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群比較( ± s,個/微升)

    注:肺癌組抗PD1 治療前后兩組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+與對照組比較,aP <0.05;肺癌組抗PD1 治療后CD4+、CD4+/CD8+與抗PD1 治療前比較,bP <0.05。

    組別 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+肺癌組治療前 400.63±48.14a 808.33±200.8a 0.52±0.13a肺癌組治療后 539.93±169.09ab 720.67±131.17a 0.80±0.40ab對照組 998.33±428.85 612.67±247.93 1.61±0.47

    2.4 各組外周血ST2L 的表達(dá)

    與對照組相比,抗PD-1 治療前后NSCLC 外周血低表達(dá)ST2L,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且抗PD-1治療后NSCLC 外周血ST2L 表達(dá)量較治療前有明顯增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見圖3。

    圖3 各組外周血ST2L 的表達(dá)

    3.討論

    有效的免疫反應(yīng)需要腫瘤細(xì)胞和T 細(xì)胞的刺激信號和免疫抑制相互作用維持T 細(xì)胞激活狀態(tài)啟動殺腫瘤細(xì)胞過程[11]。重塑并激活腫瘤微環(huán)境中的免疫作用,逆轉(zhuǎn)T 細(xì)胞耗竭,增強(qiáng)免疫細(xì)胞殺死腫瘤細(xì)胞的能力是目前PD-1/PD-L1 抑制劑抗腫瘤的作用基礎(chǔ)。本實(shí)驗研究表明NSCLC 外周血CD4+細(xì)胞水平、CD4+/CD8+均顯著低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示NSCLC 患者存在免疫功能抑制。抗PD-1 治療后NSCLC 外周血CD4+細(xì)胞水平、CD4+/CD8+較抗PD-1 治療前有顯著增加,提示抗PD-1 治療后NSCLC 免疫抑制有所改善(如表1)。本研究通過生物信息學(xué)方法分析,發(fā)現(xiàn)ST2 與CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞浸潤相關(guān)。與健康人群比較,NSCLC 外周血低表達(dá)ST2L,抗PD-1 治療后外周血ST2L 表達(dá)量明顯增多,提示ST2L 的表達(dá)與PD1 治療相關(guān),進(jìn)一步證實(shí)了ssGSEA(single sample GSEA)方法發(fā)現(xiàn)的ST2 可能和免疫治療療效相關(guān)。

    NSCLC 外周血低表達(dá)ST2L 與前期實(shí)驗結(jié)果不一致,分析可能原因為:①前期實(shí)驗檢測的為ST2 基因,本實(shí)驗僅檢測了T 細(xì)胞表面的ST2L,推測NSCLC 患者免疫功能低下且大部分T 細(xì)胞被募集至肺癌病灶中發(fā)揮抗腫瘤作用,需要進(jìn)一步實(shí)驗驗證。②本樣本量較小,需要擴(kuò)大樣本進(jìn)一步驗證??筆D-1 治療后NSCLC 外周血ST2L較治療前增多,結(jié)合抗PD-1 治療后NSCLC 外周血CD4+細(xì)胞水平升高,推測表達(dá)于Th 細(xì)胞表面的ST2L 可能作為非小細(xì)胞肺癌免疫療效預(yù)測標(biāo)志物,需要進(jìn)一步展開研究。

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