離心法和虹吸法制備冷沉淀的質(zhì)量比較

梁澤梅，梁進(jìn)芳，黃飛

云浮市中心血站，廣東云浮 527300

近年來(lái)，冷沉淀凝血因子在臨床中應(yīng)用廣泛，冷沉淀是由新鮮冰凍血漿制備的血液制品。血漿冷沉淀中的Ⅷ因子及纖維蛋白原，可治療輕型甲型血友病、纖維蛋白原缺乏癥、彌散性血管內(nèi)凝血、血管性血友病等患者[1-2]。冷沉淀中的凝血因子Ⅷ易受制備時(shí)間、溫度等多種因素的影響，Ⅷ因子和纖維蛋白原含量與冷沉淀制備過(guò)程有密切關(guān)系，若選擇不合適的制備方法，不能確保冷沉淀的活性，臨床治療效果欠佳[3-4]。只有選擇合適的制備方法，才能最大限度開(kāi)發(fā)利用血液資源、確保冷沉淀的活性，減少損耗，提高血液質(zhì)量，保證臨床輸血的安全性[5]。目前全國(guó)各地血站制備冷沉淀的方法通常有離心法和虹吸法兩種，本研究選取2020年6月—2021年6月云浮市中心血站制備的合格新鮮冰凍血漿60袋（100 mL/袋），比較離心法和虹吸法制備冷沉淀的質(zhì)量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 設(shè)備與試劑

冷凍離心機(jī)（型號(hào)9942）；冰凍血漿解凍箱（KJX-Ⅲ）；血漿速凍機(jī)（SDJ-20）；封管熱合機(jī)（SE250）；電子天平（ES-3101C）；血液分漿夾；微電腦配平儀（WGPPY-IV）；貯血 冰箱[MBR-506D(H)]；-40℃低溫 冰箱（MDF-U5411）；海爾醫(yī)用低溫冰箱（DW-25W300）;全自動(dòng)凝血儀（型號(hào)ACL7000）；以下試劑盒均購(gòu)自[沃芬醫(yī)療（北京）公司]：纖維蛋白原測(cè)定試劑盒，APTT試劑，CaCl2，乏Ⅷ因子血漿。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

用200 mL四聯(lián)血袋（抗凝劑為CPDA-1）采集經(jīng)初篩符合GB18467-2011《獻(xiàn)血者健康檢查要求》規(guī)定的獻(xiàn)血者200 mL全血,且采集時(shí)間≤7 min，在采集后8 h內(nèi)完成血漿分離，并置于血漿速凍機(jī)內(nèi)進(jìn)行速凍，速凍完成后轉(zhuǎn)移至低溫冰箱中保存,進(jìn)行冷沉淀制備前進(jìn)行檢測(cè)，排除不合格的樣本。

1.3 研究對(duì)象

隨機(jī)選取云浮市中心血站制備的合格新鮮冰凍血漿60袋（100 mL/袋），抽簽法隨機(jī)分成A、B兩組，每組30袋（100 mL/袋）。研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理號(hào)：2020A041）。A組采用離心法制備冷沉淀，B組采用虹吸法制備冷沉淀。對(duì)比兩種制備冷沉淀的方法及檢測(cè)結(jié)果，尋求安全、高效的冷沉淀制備方法，確保冷沉淀質(zhì)量安全。

1.4 方法

1.4.1 離心法制備冷沉淀A組將30袋合格新鮮冰凍血漿于前一晚取出，放置4±2℃冰箱中過(guò)夜融化（約14 h）。當(dāng)血漿基本融化時(shí)，取出血漿，在4±2℃的大容量冷凍離心機(jī)重離心,按設(shè)定好的離心程序（3 880 r/min、8 min、4±2℃）進(jìn)行離心。離心完成后，輕輕取出血袋，將血袋放于分漿夾上，松開(kāi)管道夾，將上層血漿利用分漿夾的壓力和虹吸原理轉(zhuǎn)移至空袋中，然后將剩余的40～50 mL血漿與沉淀物進(jìn)行混合，制備成冷沉淀，宜在制備后1 h內(nèi)完成速凍，速凍后將其快速置于低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 虹吸法制備冷沉淀B組將30袋合格新鮮冰凍血漿取出，放置4±2℃冰凍血漿解凍箱中，取一空袋，懸掛于解凍箱外，位置要低于血漿袋，松開(kāi)血袋夾，融化的冰凍血漿通過(guò)虹吸原理逐漸流入空袋，當(dāng)融化至剩余40～50 mL血漿與沉淀物時(shí)，閉合導(dǎo)管，停止虹吸,將剩余血漿與沉淀物進(jìn)行混合，制備成冷沉淀,宜在制備后1 h內(nèi)完成速凍，速凍后將其快速置于低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.3 標(biāo)本檢測(cè) 分別從A、B兩組共60袋冷沉淀中留取樣本，用全自動(dòng)凝血儀檢測(cè)兩種方法制備的冷沉淀的Ⅷ因子濃度和纖維蛋白原濃度，電子天平稱量血袋重量，計(jì)算容量。含量=濃度×容量。

1.4.4 質(zhì)量合格標(biāo)準(zhǔn) 參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》，來(lái)源于200 mL全血：纖維蛋白原含量≥75 mg，Ⅷ因子含量≥40 IU。

1.5 觀察指標(biāo)

①兩種方法制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原含量。

②兩種方法制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原合格率。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（）表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比（%）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原含量比較

B組Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量均高于A組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.143、2.832，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原含量比較(xˉ±s)Table 1 Comparison of factorⅧand fibrinogen content of cold precipitation prepared in two groups(xˉ±s)

2.2 兩組制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原合格率比較

兩組制備冷沉淀的Ⅷ因子和纖維蛋白原含量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，合格率均為100%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

隨著臨床輸血管理的加強(qiáng)，冷沉淀凝血因子的需求逐漸上升，對(duì)冷沉淀的質(zhì)量、輸血的安全性也越來(lái)越重視[6]。冷沉淀凝血因子是一種廣泛用于止血、治療凝血功能障礙疾病的重要血液制品，其有效成分包括凝血因子Ⅷ、纖維蛋白原、纖維結(jié)合蛋白等，適用于缺乏Ⅷ因子及纖維蛋白原而出血不止、血管性血友病等患者，也可用于惡性腫瘤術(shù)后出血、嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、彌散性血管內(nèi)凝血等患者的替代治療，促進(jìn)創(chuàng)傷燒傷愈合，防止傷口感染，阻止彌散性血管內(nèi)凝血擴(kuò)展[7-9]。冷沉淀中的凝血因子Ⅷ較不穩(wěn)定、半衰期較短、活性易喪失，在制備過(guò)程中對(duì)時(shí)間、溫度等多種因素的要求較高，易發(fā)生變性、沉淀，不能確保冷沉淀的活性，臨床治療效果欠佳[10]。目前，制備冷沉淀的方法通常有離心法和虹吸法兩種，離心法操作過(guò)程中人為影響因素相對(duì)多一些，操作過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，而虹吸法操作簡(jiǎn)單，不僅人為影響因素比較少，且所需儀器少，更為經(jīng)濟(jì)，因此，采用虹吸法制備冷沉淀更便捷。冷沉淀的質(zhì)量影響著治療效果，血站應(yīng)選擇科學(xué)、安全、高效的冷沉淀制備方法，確保血液制品質(zhì)量安全，對(duì)治療效果有重要臨床意義[11]。本研究分別采用離心法和虹吸法制備冷沉淀,采用全自動(dòng)凝血儀檢測(cè)兩種方法制備的冷沉淀,比較兩組的檢測(cè)結(jié)果，從而選擇更優(yōu)的制備方法。

本研究結(jié)果顯示，B組制備的冷沉淀中Ⅷ因子含量（79.68±25.28）IU、纖維蛋白原含量（206.47±59.78）mg均高于A組（P＜0.05），均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)；在李庚娣等[12]的研究中，虹吸法制備冷沉淀中的Ⅷ因子含量（80.0±29.3）IU、纖維蛋白原含量（131.6±34.8）mg高于離心法（P＜0.05），與本研究所得結(jié)果基本一致。表明與離心法相比較，采用虹吸法制備的冷沉淀Ⅷ因子、纖維蛋白原含量更高。分析原因在于A組采用離心法制備冷沉淀，首先將原料血漿提前一晚置于4±2℃冰箱中過(guò)夜融化（約14 h），當(dāng)血漿基本融化時(shí)，取出血漿，進(jìn)行重離心，然后將上層血漿移至另一空袋中，剩余的40～50 mL血漿和沉淀物進(jìn)行混合，即為冷沉淀[13]。由于冰箱中溫度不穩(wěn)定，且不易控制溫度，血漿融化的速度不一致，易引起凝血因子活性降低，且回收率下降。此外，將原料血漿置于冰箱內(nèi)融化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，易發(fā)生纖維蛋白析出，導(dǎo)致冷沉淀量減少，影響Ⅷ因子的活性，且對(duì)操作者的技術(shù)要求較高[14]。因此，采用離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子與纖維蛋白原含量降低，凝血因子Ⅷ回收率降低，致使冷沉淀合格率降低。虹吸法采用4±2℃冰凍血漿解凍箱融化血漿，血漿融化后通過(guò)虹吸作用流入懸掛于解凍箱外的空袋中，剩下40～50 mL血漿與沉淀物進(jìn)行混合，制備成冷沉淀。采用冰凍血漿解凍箱可準(zhǔn)確控制解凍箱溫度保持在4±2℃，使原料血漿融化溫度和速度保持一致，可以保證良好的融化環(huán)境[15]。有研究指出，冰凍血漿在1 h內(nèi)融化，制備的冷沉淀質(zhì)量最為理想，在提取冷沉淀的過(guò)程中時(shí)間越短越好[16]。因此，與離心法相比較，虹吸法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量與纖維蛋白原含量較高，Ⅷ因子和纖維蛋白原的回收率較高，冷沉淀合格率相對(duì)較高。在冷沉淀的質(zhì)量控制上，離心法比虹吸法的人為影響因素多，且操作過(guò)程比較復(fù)雜，而虹吸法步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，受外界因素影響較小，所需儀器少且對(duì)操作者的要求較低[17]。

兩組制備的Ⅷ因子和纖維蛋白原含量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，合格率均為100%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；表明兩種冷沉淀制備方法的合格率均較高。但是B組制備冷沉淀的融化時(shí)間短于A組的融化時(shí)間，凝血因子Ⅷ與纖維蛋白原較不穩(wěn)定，在冷沉淀制備過(guò)程中受融化時(shí)間、溫度的影響較大，因此在制備冷沉淀時(shí)，應(yīng)選擇人為因素影響較小的方法，確保冷沉淀質(zhì)量，以達(dá)到較好的臨床治療效果。A組采用離心法制備冷沉淀，將原料血漿置于4±2℃冰箱中過(guò)夜融化（約14 h），不易控制溫度，融化時(shí)間較長(zhǎng)，易導(dǎo)致纖維蛋白析出，影響Ⅷ因子的活性，凝血因子Ⅷ與纖維蛋白原回收率降低[18]。虹吸法采用冰凍血漿解凍箱融化血漿，可準(zhǔn)確控制溫度在4±2℃，融化環(huán)境較好。本研究的局限性在于采集的樣本量較少，后續(xù)還會(huì)對(duì)更多樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，且對(duì)冷沉淀制備工藝進(jìn)行完善和創(chuàng)新，以期獲得更為理想的制備工藝。

綜上所述，兩種制備冷沉淀凝血因子的方法均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但與離心法相比，采用虹吸法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量更高、更安全高效，對(duì)提升臨床治療效果有重要應(yīng)用價(jià)值，建議血站進(jìn)一步應(yīng)用推廣。