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    石蒜堿靶向激活脊髓AMP活化蛋白激酶通路緩解大鼠關(guān)節(jié)炎痛的機(jī)制研究*

    2023-01-05 03:02:02胡引娣陳春喜王柏軍
    中國(guó)病理生理雜志 2022年12期
    關(guān)鍵詞:石蒜藥組脊髓

    胡引娣,陳春喜,謝 敏,李 岱,王柏軍△

    (1湖北科技學(xué)院醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院,湖北咸寧437100;2湖北科技學(xué)院附屬浠水醫(yī)院,湖北黃岡438802)

    骨關(guān)節(jié)炎是一種以疼痛、關(guān)節(jié)僵硬和關(guān)節(jié)功能障礙為特征的退行性關(guān)節(jié)疾病,全球患病人數(shù)已超過(guò)3.5億。預(yù)計(jì)到2032年,45歲以上人群中骨關(guān)節(jié)炎患病率可增至29.5%[1]。關(guān)節(jié)炎痛在疾病早期階段為間歇性發(fā)生,隨著病程的進(jìn)展逐漸變得頻繁而嚴(yán)重,是導(dǎo)致老年人致殘的主要原因,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2]。目前,常見的治療藥物為對(duì)乙酰氨基酚、非甾體抗炎藥和阿片類藥物。由于這些藥物的限制性療效及副作用,關(guān)節(jié)炎疼痛治療存在很大不足,已成為一個(gè)公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此,關(guān)節(jié)炎疼痛的病理生理機(jī)制及相關(guān)鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)研究具有重要的臨床價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。

    在關(guān)節(jié)炎疼痛的病理進(jìn)程中,軟骨損傷及滑膜炎等激活外周傷害感受器,傳入痛覺(jué)纖維將疼痛信號(hào)從關(guān)節(jié)傳遞至脊髓,在脊髓整合及處理后,痛覺(jué)信號(hào)進(jìn)一步上升至丘腦和大腦皮層,導(dǎo)致中樞敏化并形成病理性疼痛[3]。在一項(xiàng)對(duì)150名關(guān)節(jié)炎患者的調(diào)查報(bào)告中,觀察到35.3%的患者中樞致敏,其特征為神經(jīng)元反應(yīng)增強(qiáng)和神經(jīng)炎癥[4]。脊髓神經(jīng)炎癥被認(rèn)為是中樞致敏的主要因素,其特點(diǎn)是膠質(zhì)細(xì)胞激活及炎癥介質(zhì)產(chǎn)生增加[5]。關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓中星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度增加,白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-6的mRNA和蛋白水平均顯著升高,鞘內(nèi)抑制IL-1受體可改善關(guān)節(jié)病理學(xué)并減輕關(guān)節(jié)疼痛[6]。因此,靶向抑制脊髓神經(jīng)炎癥可作為治療關(guān)節(jié)炎疼痛的一個(gè)有效手段。

    石蒜堿是從石蒜中分離出來(lái)的一種天然生物堿,具有抗腫瘤、抗病毒和抗炎的功效,在病理性疼痛動(dòng)物模型中也表現(xiàn)出抗傷害效應(yīng)。在醋酸和角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠疼痛模型中,石蒜堿給藥表現(xiàn)出抗傷害和抗炎活性[7]。在椎間盤退變大鼠模型中,石蒜堿可抑制促炎因子表達(dá)并發(fā)揮保護(hù)作用[8]。在糖尿病周圍神經(jīng)病變模型中,石蒜堿可激活A(yù)MP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)通路下調(diào)自噬從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[9]。因此,為明確石蒜堿在關(guān)節(jié)炎痛中的作用及病理機(jī)制,我們構(gòu)建了大鼠關(guān)節(jié)炎模型,并進(jìn)行鞘內(nèi)給石蒜堿后檢測(cè)動(dòng)物行為學(xué)、形態(tài)學(xué)及脊髓相關(guān)蛋白表達(dá)的變化,從而為石蒜堿在關(guān)節(jié)炎痛中的治療作用提供參考資料。

    材料和方法

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本研究使用40只SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重210~230 g,6~8周齡,均購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證編號(hào)為42000600043734。大鼠自購(gòu)買后飼養(yǎng)在室溫為(22±2)℃且12 h/12 h晝夜交替的環(huán)境中,并為其提供充足的水和食物。本研究中所有實(shí)驗(yàn)程序均符合當(dāng)?shù)睾蛧?guó)際動(dòng)物倫理使用指南的要求,并將使用動(dòng)物的數(shù)量和疼痛降至最低。本研究所涉及的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖北科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1.2 主要試劑PMSF、SDS-PAGE凝膠快速配制試劑盒、完全弗氏佐劑(complete Freund′s adjuvant,CFA)和DMSO均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。脫脂奶粉、加強(qiáng)型RIPA裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒和特超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒均購(gòu)自Biosharp。AMPK激動(dòng)劑AICAR和AMPK抑制劑dorsomorphin購(gòu)自Selleck。石蒜堿購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司。本研究中購(gòu)自武漢愛博泰克生物科技有限公司的Ⅰ抗有cleaved caspase-3和Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)抗體;購(gòu)自江蘇親科生物有限公司的Ⅰ抗有膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、IL-1β、β-actin、p-AMPK、AMPK及caspase-3抗體。本研究購(gòu)自武漢愛博泰克生物科技有限公司的Ⅱ抗有HRP Goat Anti-Rabbit IgG H&L和HRP Goat Anti-Mouse IgG H&L;購(gòu)自艾博抗(上海)貿(mào)易有限公司的熒光Ⅱ抗有山羊抗小鼠IgG H&L(FITC)和山羊抗兔IgG H&L(FITC)。

    2 主要方法

    2.1 動(dòng)物分組及模型建立大鼠適應(yīng)環(huán)境6~7 d后,隨機(jī)分為4組(每組10只):對(duì)照組、模型組、石蒜堿給藥組及AICAR給藥組。構(gòu)建關(guān)節(jié)炎大鼠病理模型:剔除大鼠左后肢注射部位毛發(fā)并用碘伏進(jìn)行皮膚表面消毒,模型組以及給藥組用無(wú)菌微量注射器垂直進(jìn)針于左后肢膝關(guān)節(jié)腔,腔內(nèi)注射完全弗氏佐劑混懸液(每只40 μL)[10]。對(duì)照組大鼠于相同部位皮下注射等體積生理鹽水。關(guān)節(jié)炎大鼠模型構(gòu)建14 d后,進(jìn)行給藥處理:在模型組基礎(chǔ)上,用無(wú)菌微量注射器于L5和L6脊椎棘突間隙垂直進(jìn)針,每只大鼠 鞘 內(nèi) 注 射1 mg/kg石 蒜 堿[7]或AICAR溶 液[11]10 μL;模型組大鼠鞘內(nèi)注射同等體積的DMSO和0.9%氯化鈉混合液(體積比1∶1)。石蒜堿和AICAR分別溶入DMSO中,使用前用0.9%氯化鈉按1∶1稀釋。

    2.2 大鼠自發(fā)性縮足反射次數(shù)記錄以大鼠自發(fā)性縮足(或舔爪)反射次數(shù)評(píng)估大鼠自發(fā)性疼痛。大鼠置于30 cm×30 cm×30 cm玻璃盒中適應(yīng)30 min,觀察并視頻記錄大鼠自發(fā)性縮足(或舔爪)反射次數(shù),每次5 min,共記錄3次,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持環(huán)境安靜[14]。

    2.3 50%縮足閾值(paw withdrawal threshold,PWT)檢測(cè)以大鼠50% PWT評(píng)估大鼠機(jī)械痛敏情況。大鼠放在透明有機(jī)玻璃盒內(nèi)適應(yīng)環(huán)境30 min,用0.4~26 g的von Frey纖維垂直剌激大鼠后足底正中部,刺激時(shí)間持續(xù)≤5 s,連續(xù)刺激時(shí)需間隔2~3 min。若出現(xiàn)舔足或抬足等行為則視為陽(yáng)性反應(yīng),反之則視為陰性反應(yīng)。若出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng),則用相鄰較低一級(jí)力度的von Frey纖維再次刺激;若出現(xiàn)陰性反應(yīng),則用相鄰較高一級(jí)力度再次刺激,測(cè)6次,并記錄。根據(jù)公式50%PWT(g)=10(Xf+Kδ)/10 000來(lái)計(jì)算各組大鼠縮足閾值(Xf為測(cè)試中使用的最后一個(gè)von Frey纖維的階數(shù);K為痛覺(jué)閾矯正系數(shù);δ為相鄰不同纖維刺激之間的差異[15])。

    2.4 轉(zhuǎn)棒運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)以轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離來(lái)評(píng)估大鼠運(yùn)動(dòng)能力的變化。實(shí)驗(yàn)開始前將大鼠放在轉(zhuǎn)棒儀器上以每分鐘4圈的速度適應(yīng)10 min,間隔休息30 min,重復(fù)3次。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)以每分鐘10圈的速度運(yùn)動(dòng)10 s,勻加速10 s,以每分鐘15圈的速度運(yùn)動(dòng)30 s,勻加速10 s,以每分鐘20圈的速度運(yùn)動(dòng)9 min[16]。記錄大鼠運(yùn)動(dòng)的距離和在轉(zhuǎn)棒上停留的時(shí)間。

    2.5 分子對(duì)接PDB數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.rcsb.org/)下載AMPK蛋白結(jié)構(gòu)(ID為4EAI);Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)下載石蒜堿二維結(jié)構(gòu);Autodock_vina對(duì)接AMPK和石蒜堿;OpenBabel(v2.3.1)39分離文件,添加氫鍵并分配可旋轉(zhuǎn)鍵和電荷;PDBQT進(jìn)一步對(duì)接;PyMOL可視化對(duì)接結(jié)果[17]。

    2.6 Western blot檢測(cè)脊髓組織蛋白質(zhì)表達(dá)各組行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后,每組隨機(jī)各取5只大鼠并給予過(guò)量戊巴比妥鈉(150 mg/kg)處死,分離腰段脊髓;在含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液中裂解;在冰上進(jìn)行組織勻漿,勻漿后冰上靜置裂解20 min;收集組織勻漿液于離心管中,4℃、13 523×g條件下離心15 min后取上清;加入組織上清1/3體積的4×上樣緩沖液,沸水浴加熱10 min變性;BCA蛋白分析試劑盒檢測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)濃度;SDS-PAGE分離等質(zhì)量的蛋白質(zhì)樣品后電轉(zhuǎn)移至PVDF膜;脫脂奶粉溶液室溫下封閉1 h;TBS-T洗膜3次,每次5 min,4℃條件下加入Ⅰ抗(1∶1 000)孵育過(guò)夜;TBS-T洗膜3次,每次5 min,加入Ⅱ抗(1∶10 000)室溫孵育1 h,再用TBS-T洗膜3次,每次10 min;特超敏ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒顯色,用LAS500凝膠成像系統(tǒng)掃描觀察PVDF膜;ImageJ軟件分析條帶灰度值。

    2.7 免疫熒光法檢測(cè)大鼠脊髓組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)和定位每組隨機(jī)各取5只大鼠給予50 mg/kg戊巴比妥鈉深度麻醉后,用4%多聚甲醛經(jīng)心臟灌流固定,分離脊髓;脫水;石蠟包埋,切成4 μm厚的石蠟組織切片;脫蠟;抗原修復(fù)20 min;PBS漂洗3次,每次10 min,3%過(guò)氧化氫孵化10 min;PBS漂洗3次,每次10 min,免疫熒光封閉液封閉1 h;免疫熒光Ⅰ抗(1∶100)孵育過(guò)夜;PBS清洗3次,每次10 min,熒光素標(biāo)記的Ⅱ抗(1∶1 000)孵育1 h;PBS清洗3次,每次10 min,加免疫熒光抗淬滅劑,封片,于熒光顯微鏡下觀察并拍片,ImageJ軟件分析熒光強(qiáng)度值。

    2.8 細(xì)胞培養(yǎng)及給藥處理將C6大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞(廣州吉尼歐生物科技有限公司)培養(yǎng)于含有10%胎牛血清、50 U/mL青霉素和50 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中,分為對(duì)照組、石蒜堿給藥組、石蒜堿和dorsomorphin共同給藥組,置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。石蒜堿給藥組給予1 μmol/L石蒜堿[12],石蒜堿和dorsomorphin共同給藥組分別給與1 μmol/L石蒜堿和1 μmol/L dorsomorphin[13]。藥物處理24 h后用胰蛋白酶消化細(xì)胞并收集用于Western blot。

    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 石蒜堿鞘內(nèi)給藥可顯著改善動(dòng)物行為學(xué)

    如表1所示,與對(duì)照組相比,模型組大鼠50%縮足閾值顯著降低(P<0.05),自發(fā)性縮足次數(shù)顯著增加(P<0.05);同時(shí)在轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)中的停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離均顯著下降(P<0.05)。鞘內(nèi)注射石蒜堿后,與模型組大鼠相比,石蒜堿給藥組大鼠50%縮足閾值顯著升高(P<0.05),自發(fā)縮足次數(shù)顯著減少(P<0.05),轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離顯著增加(P<0.05)。

    表1 石蒜堿對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠行為學(xué)的影響Table 1.Effect of lycorine on the behaviors of model rats(Mean±SD.n=10)

    2 鞘內(nèi)注射石蒜堿顯著降低大鼠脊髓炎癥

    與對(duì)照組相比,免疫熒光結(jié)果顯示,模型組大鼠脊髓背角中IL-1β熒光強(qiáng)度顯著增加(P<0.05)。Western blot顯示,模型組大鼠脊髓組織中IL-1β表達(dá)量顯著增加(P<0.05)。與模型組相比,石蒜堿給藥組大鼠脊髓IL-1β熒光強(qiáng)度降低,表達(dá)量也顯著下調(diào)(P<0.05)。見圖1。

    Figure 1.Effect of lycorine on spinal cord inflammation in arthritic rats.A:representative fluorescence images of IL-1β in spinal dorsal horn(scale bar=20 μm);B:relative fluorescence intensity of IL-1β in spinal dorsal horn;C:representative Western blot bands and relative gray values of IL-1β in spinal cord.Mean±SD.n=5.*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs model group.圖1石蒜堿對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓炎癥的影響

    3 鞘內(nèi)注射石蒜堿抑制大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞激活

    與對(duì)照組相比,免疫熒光結(jié)果顯示模型組大鼠脊髓背角處星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP熒光強(qiáng)度顯著增加(P<0.05);Western blot顯示模型組大鼠脊髓組織中GFAP表達(dá)量顯著增加(P<0.05)。與模型組相比,石蒜堿給藥組大鼠脊髓GFAP熒光強(qiáng)度降低,表達(dá)量也下調(diào)(P<0.05)。見圖2。

    4 鞘內(nèi)注射石蒜堿靶向激活大鼠脊髓AMPK

    分子對(duì)接結(jié)果顯示,石蒜堿可分別與AMPK第45位賴氨酸和第138位的精氨酸形成形成1個(gè)共價(jià)鍵和1個(gè)離子鍵,鍵長(zhǎng)分別為1.7?和2.5?,見圖3。免疫熒光和Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,模型組大鼠脊髓p-AMPK熒光強(qiáng)度和表達(dá)量均顯著降低(P<0.05);與模型組相比,石蒜堿給藥組大鼠脊髓p-AMPK熒光強(qiáng)度和表達(dá)量均顯著增加(P<0.05),見圖4。

    5 鞘內(nèi)注射石蒜堿阻斷大鼠脊髓Bax/caspase-3信號(hào)

    與對(duì)照組相比,免疫熒光結(jié)果顯示,模型組大鼠脊髓背角中炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)因子caspase-3熒光強(qiáng)度顯著增加(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,模型組大鼠脊髓組織中cleaved caspase-3表達(dá)量顯著增加(P<0.05)。與模型組相比,石蒜堿給藥組大鼠脊髓caspase-3熒光強(qiáng)度降低(P<0.05),cleaved caspase-3表達(dá)量也下調(diào)(P<0.05)。進(jìn)而,我們檢測(cè)了Bax蛋白表達(dá)變化。結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,模型組大鼠脊髓組織中Bax蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)(P<0.05);而經(jīng)石蒜堿給藥后,Bax表達(dá)顯著降低(P<0.05)。見圖5。

    6 鞘內(nèi)注射AICAR激活A(yù)MPK緩解大鼠痛覺(jué)行為

    與模型組大鼠相比,AICAR給藥組大鼠50%縮足閾值顯著升高(P<0.05),自發(fā)縮足次數(shù)顯著減少(P<0.05),轉(zhuǎn)棒停留時(shí)間和運(yùn)動(dòng)距離均顯著增加(P<0.05)。同時(shí),AICAR給藥組大鼠脊髓背角處p-AMPK表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。見表1和圖6。

    Figure 2.Effect of lycorine on spinal astrocytic activation in arthritic rats.A:representative fluorescence images of GFAP(scale bar=20 μm);B:relative fluorescence intensity of GFAP in spinal dorsal horn;C:representative Western blot bands and relative gray values of GFAP in spinal dorsal horn.Mean±SD.n=5.*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs model group.圖2石蒜堿對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

    Figure 3.Diagram of the interaction between lycorine and AMPK.Green color presents lycorine,blue color presents AMPK,and red color presents the residues of AMPK binding with lycorine.圖3石蒜堿和AMPK相互作用示意圖

    7 dorsomorphin阻斷石蒜堿對(duì)AMPK磷酸化的上調(diào)作用

    在C6細(xì)胞水平,與對(duì)照組相比,石蒜堿給藥可顯著上調(diào)p-AMPK水平(P<0.05);而石蒜堿和dorsomorphin共同給藥處理后,與石蒜堿給藥組相比,p-AMPK水平顯著下調(diào)(P<0.05),見圖7。

    討 論

    我們研究顯示石蒜堿可結(jié)合AMPK并緩解關(guān)節(jié)炎痛。AMPK是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,與各種類型的疼痛有關(guān)。AMPK第172位蘇氨酸的磷酸化可導(dǎo)致AMPK活性增加1 000倍。二甲雙胍和白藜蘆醇均可激活A(yù)MPK第172位蘇氨酸磷酸化并在炎癥痛、神經(jīng)損傷、糖尿病性神經(jīng)疼痛以及腫瘤痛中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[18]。在炎癥痛模型大鼠中,AMPK特異性激動(dòng)劑AICAR給藥可抑制促炎因子IL-1β表達(dá)并緩解炎癥痛,而AMPK抑制劑dorsomorphin和shRNA處理逆轉(zhuǎn)了AICAR的鎮(zhèn)痛作用[19]。小檗堿可增加AMPK第172位蘇氨酸磷酸化并減輕關(guān)節(jié)炎痛,而在AMPK敲除小鼠中不發(fā)揮作用[20]。同時(shí),研究報(bào)道,在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中,石蒜堿可促進(jìn)AMPK-Y172磷酸化進(jìn)而促進(jìn)自噬并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[21]。在糖尿病周圍神經(jīng)病變模型小鼠中,石蒜堿給藥激活A(yù)PMK通路并促進(jìn)細(xì)胞自噬改善周圍神經(jīng)功能[9]。在本研究中,顯示石蒜堿和AICAR均可激活A(yù)MPK-Y172磷酸化并緩解關(guān)節(jié)炎大鼠疼痛行為學(xué)。因此,我們推測(cè),石蒜堿可成為一種緩解關(guān)節(jié)炎疼痛的潛在藥物。

    Figure 4.Effect of lycorine on spinal AMPK activation of rats.A:representative fluorescence images of p-AMPK(scale bar=20 μm);B:relative fluorescence intensity of p-AMPK in spinal dorsal horn;C:representative Western blot bands and relative gray values of p-AMPK in spinal cord.Mean±SD.n=5.*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs model group.圖4石蒜堿對(duì)大鼠脊髓AMPK活性的影響

    Figure 5.Effect of lycorine on Bax/caspase-3 signaling of spinal cord in rats.A:representative fluorescence images of caspase-3(scale bar=20 μm);B:relative fluorescence intensity of caspase-3 in spinal dorsal horn;C:representative Western blot bands and relative gray values of Bax and cleaved caspase-3 in spinal cord.Mean±SD.n=5.*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs model group.圖5石蒜堿對(duì)大鼠脊髓Bax/caspase-3信號(hào)的影響

    Figure 6.Effect of AICAR on spinal AMPK in arthritic rats.Mean±SD.n=5.*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs model group.圖6 AICAR對(duì)關(guān)節(jié)炎大鼠脊髓AMPK的影響

    Figure 7.Dorsomorphin blocked the up-regulation of AMPK phosphorylation by lycorine at cellular level.Mean±SD.n=5.*P<0.05 vs control group;#P<0.05 vs lycorine group.圖7在細(xì)胞水平dorsomorphin阻斷石蒜堿對(duì)AMPK磷酸化的上調(diào)作用

    石蒜堿可激活A(yù)MPK降低脊髓炎癥。AMPK作為一種能量傳感激酶,是一個(gè)抗炎的作用靶點(diǎn)[22]。在動(dòng)脈粥樣硬化模型中顯示,AMPK激活可降低NFκB途徑的激活及IL-1β的釋放[23]。在慢性疼痛模型中,AMPK激活可降低IL-1β表達(dá)同時(shí)抑制炎性疼痛[24]。在腫瘤模型中,二甲雙胍可激活A(yù)MPK,增強(qiáng)Bax信號(hào),促進(jìn)細(xì)胞凋亡[25]。Bax信號(hào)可促進(jìn)caspase-3介導(dǎo)的IL-1β表達(dá)[26]。在肝癌細(xì)胞中,小檗堿給藥激活A(yù)MPK,增加Bax/Bcl-2的比例,激活caspase-3和9,從而抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)[27]。在順鉑誘導(dǎo)的腎損傷模型中,AMPK抑制劑dorsomorphin及siRNA處理可抑制APMK磷酸化、Bax表達(dá)、caspase3激活和細(xì)胞凋亡[28]。在阿爾茨海默疾病中顯示,caspase-3可介導(dǎo)GFAP的裂解并激活星形膠質(zhì)細(xì)胞[29]。在本研究中觀察到,石蒜堿給藥可激活A(yù)MPK、降低脊髓Bax表達(dá)、抑制caspase-3和膠質(zhì)細(xì)胞活化從而抑制脊髓炎癥反應(yīng)。因此,上述結(jié)果表明,石蒜堿可降低脊髓炎癥從而緩解大鼠骨關(guān)節(jié)炎痛。

    綜上所述,石蒜堿靶向激活A(yù)MPK通路抑制脊髓炎癥從而緩解實(shí)驗(yàn)性大鼠關(guān)節(jié)炎痛。該研究為石蒜堿作為關(guān)節(jié)炎鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)提供參考資料。

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