• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    血清NK細(xì)胞活化性受體、γ干擾素與非小細(xì)胞肺癌患者病情程度、預(yù)后的相關(guān)性分析*

    2022-12-25 10:05:18李艷光宋翔牛潔婷唐國杰
    關(guān)鍵詞:期組清液標(biāo)志物

    李艷光,宋翔,牛潔婷,唐國杰

    (滄州市中心醫(yī)院 胸外科,河北 滄州 061000)

    非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)在原發(fā)性肺癌中最常見,發(fā)生率約為80%~85%,其中75%左右的患者確診時(shí)已處于中晚期,預(yù)后較差[1]。手術(shù)是目前治療肺癌的主要方式,早期診斷、準(zhǔn)確分期是保障療效的前提。臨床至今尚缺乏檢測NSCLC 敏感性較高的指標(biāo),比較常見的包括癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片 段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)、鱗狀細(xì)胞癌抗原(sguamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag)、糖類抗原125(carbohydrate antigen 125,CA125)等腫瘤標(biāo)志物[2]。研究[3]發(fā)現(xiàn),機(jī)體T 淋巴細(xì)胞參與的免疫應(yīng)答是控制腫瘤生長、殺滅腫瘤細(xì)胞的重要途徑。γ 干擾素(Interferon γ,IFN-γ)是由CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群Th1 分泌,能激活效應(yīng)細(xì)胞,提高自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK cell)、巨噬細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞等活性,通過免疫機(jī)制殺傷腫瘤細(xì)胞[3]?,F(xiàn)代免疫學(xué)研究提出,機(jī)體處于應(yīng)激或感染狀態(tài)下,體內(nèi)一些細(xì)胞受體可產(chǎn)生相關(guān)的分子調(diào)節(jié)免疫功能[4]。NK細(xì)胞活化性受體(NKG2D)是對(duì)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)最有效的受體之一,廣泛表達(dá)于NK 細(xì)胞、γ 細(xì)胞中。有研究指出,NKG2D 可通過免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)T 細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞,從而影響機(jī)體免疫狀態(tài)[5]。目前國內(nèi)外針對(duì)NKG2D、IFN-γ 與NSCLC 相關(guān)性的研究不多。本研究探討血清NKG2D、IFN-γ水平與NSCLC 患者病情程度、預(yù)后的相關(guān)性,旨在尋找更有效、準(zhǔn)確的預(yù)測指標(biāo)。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料

    本研究屬于前瞻性研究,且獲得滄州市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。選取滄州市中心醫(yī) 院2020 年5 月—2021 年5 月收治 的NSCLC 患者150 例為研究對(duì)象,根據(jù)TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ、Ⅱ期組50 例,Ⅲ、Ⅳ期組100 例。Ⅰ、Ⅱ期組男性34 例,女性16 例;年齡39~70 歲,平均(54.69±7.94)歲;病理類型:鱗狀細(xì)胞癌13 例,腺癌21 例,腺鱗癌16 例。Ⅲ、Ⅳ期組男性71 例,女性29 例;年齡38~72 歲,平均(54.87±8.12)歲;病理類型:鱗狀細(xì)胞癌27 例,腺癌43 例,腺鱗癌30 例。兩組患者臨床資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn):符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南(2018 版)》[6]的診斷標(biāo)準(zhǔn),并有明確的病理結(jié)果;均為原發(fā)性肺癌;年齡>18 歲;在初次治療前有血清指標(biāo)檢測結(jié)果;造血功能正常;患者對(duì)本研究知情同意并自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):造血功能異常;心肝腎臟器功能不正常;有嚴(yán)重感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾?。挥谢熁虬邢蛑委熓?。

    1.2 方法

    1.2.1 儀器與試劑 FACSC Calibur 型流式細(xì)胞儀(美國BD 公司),Centrifuge 5430 高速冷凍離心機(jī)、微量移液器(德國Eppendorf 公司),海爾DW-86L288 型(上海領(lǐng)德儀器有限公司),UniCel DxI 800 Access 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)。鼠免疫球蛋白(Immunoglobulin G,lgG)、鼠抗人抗NKG2D PERCP-CY5.5 抗體、鼠抗人CD3-FITC、鼠抗人CD8-PE-CY7、鼠抗人CD56-PE、細(xì)胞因子刺激劑、細(xì)胞固定破膜劑(美國CST 生物科技有限公司),96 孔酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)板(美國R&D公司),F(xiàn)icoll 淋巴細(xì)胞分離液(北京Solarbio 化學(xué)試劑公司),ELISA 試劑盒(武漢中美科技公司)。

    1.2.2 標(biāo)本采集 取患者入院時(shí)的外周靜脈血4 mL,3 000 r/min 離心15 min,取上清液分裝于1.5 mL 的EP 管中,置入-80℃冰箱冷凍保存待測。

    1.2.3 NKG2D檢測 取樣本加入等體積的磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻移至15 mL 離心管中,加入等體積的Ficoll 淋巴細(xì)胞分離液;20℃、2 400 r/min 離心30 min,輕吸單個(gè)核細(xì)胞層,PBS 液100 r/min 離心10 min,洗滌2 次,棄上清液;用適量PBS 液重懸細(xì)胞,混勻注入新離心(EP)管;加入小鼠IgG 10 μg/mL,40℃孵育30 min,排除假陽性;分別加入20 μL 的NKG2D PERCY-CY5.5 抗 體、CD3-FITC、CD56-PE,4℃避光反應(yīng)30 min,1 000 r/min 離心10 min,棄上清液,PBS 液洗滌2 次,移至流式管;加入4% 0.5 mL 多聚甲醛,采用流式細(xì)胞儀檢測488 nm 波長處NKG2D水平。

    1.2.4 IFN-γ 水平檢測 取樣本EDTA 抗凝處理,混勻,分裝于2 個(gè)流式管中,加入30 μL 的外周血、2 μL 的細(xì)胞因子刺激劑、1 mL 1640 培養(yǎng)基,混勻,37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)4~6 h;1 500 r/min離心3~5 min,棄上清液;加入100 μL 的1640 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞;加入適量CD3-FITC、CD8-PE-CY7,4℃避光孵育30 min;再加入500 μL 的1640 培養(yǎng)基,洗滌2 次,1 500 r/min 離心3~5min,棄上清液;加入100 μL 的1640 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,再加入細(xì)胞固定破膜劑,4℃20 min;加入500 μL 的1×perm/wash buffer 洗滌,1 500 r/min 離心3~5 min,重復(fù)2 次,棄上清液;加入500 μL 的1640 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。采用流式細(xì)胞儀檢測IFN-γ 水平。

    1.2.5 腫瘤標(biāo)志物水平檢測 采用UniCel DxI 800 Access 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測CEA、CA125、CYFRA21-1 水平。

    1.2.6 預(yù)后情況 采用門診復(fù)查、電話隨訪等方式,記錄患者6 個(gè)月內(nèi)的病死率。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比或率(%)表示,比較采用χ2檢驗(yàn);繪制ROC 曲線;相關(guān)性分析用Pearson 法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組患者血清NKG2D、IFN-γ比較

    兩組患者血清NKG2D、IFN-γ 比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期組NKG2D 低于Ⅰ、Ⅱ期組,IFN-γ 水平高于Ⅰ、Ⅱ期組。見表1。

    表1 兩組患者血清NKG2D、IFN-γ比較()

    表1 兩組患者血清NKG2D、IFN-γ比較()

    2.2 兩組患者的腫瘤標(biāo)志物水平比較

    兩組患者的血清CEA、CA125、CYFRA21-1 水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ期組CEA、CA125、CYFRA21-1 高于Ⅰ、Ⅱ期組。見表2。

    表2 兩組患者血清腫瘤標(biāo)志物水平比較()

    表2 兩組患者血清腫瘤標(biāo)志物水平比較()

    2.3 NSCLC患者血清NKG2D、IFN-γ與腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性

    Pearson 相關(guān)分析顯示,血清NKG2D 與CEA(r=-0.683)、CA125(r=-0.615)、CYFRA21-1(r=-0.704)均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05);IFN-γ 與CEA(r=0.512)、CA125(r=0.439)、CYFRA21-1(r=0.543)均呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

    表3 NSCLC患者血清NKG2D、IFN-γ與腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)性

    2.4 不同預(yù)后NSCLC患者的血清NKG2D、IFN-γ比較

    150 例NSCLC 患者總病死率為22.67%(34/150)。Ⅲ、Ⅳ期組6 個(gè)月內(nèi)病死率為28.00%(28/100),Ⅰ、Ⅱ期組6 個(gè)月內(nèi)病死率為12.00%(6/50),經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.868,P=0.027)。死亡組與非死亡組血清NKG2D、IFN-γ 比較,經(jīng)t檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),死亡組NKG2D 低于非死亡組,IFN-γ 高于非死亡組。見表4。

    表4 不同預(yù)后NSCLC患者的血清NKG2D、IFN-γ比較()

    表4 不同預(yù)后NSCLC患者的血清NKG2D、IFN-γ比較()

    2.5 血清NKG2D、IFN-γ及兩者聯(lián)合對(duì)NSCLC患者預(yù)后的預(yù)測效能

    ROC 曲線分析結(jié)果顯示,IFN-γ、NKG2D 及兩者聯(lián)合預(yù)測NSCLC 患者預(yù)后的AUC 分別為0.807(95% CI:0.673,0.942)、0.815(95%CI:0.675,0.955)、0.872(95% CI:0.761,0.984),敏感性分別為78.1%(95% CI:0.648,0.892)、82.6%(95% CI:0.713,0.955)、86.5%(95% CI:0.752,0.978),特異性 為51.3%(95% CI:0.443,0.714)、53.6%(95% CI:0.467,0.735)、41.5%(95% CI:0.328,0.616)。見 圖1和表5。

    圖1 血清NKG2D、IFN-γ及兩者聯(lián)合對(duì)NSCLC患者預(yù)后預(yù)測價(jià)值的ROC曲線圖

    表5 血清NKG2D、IFN-γ及兩者聯(lián)合對(duì)NSCLC患者預(yù)后預(yù)測的效能分析

    3 討論

    腫瘤細(xì)胞是一群生長調(diào)控機(jī)制失常且可發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的自身細(xì)胞[7]。T 淋巴細(xì)胞是參與免疫應(yīng)答、抑制腫瘤生長的重要免疫細(xì)胞,根據(jù)T 細(xì)胞受體類型和表面標(biāo)志可分為CD4+和CD8+兩個(gè)亞群。CD4+T 細(xì)胞主要是通過激活并釋放效應(yīng)細(xì)胞,增強(qiáng)清除腫瘤細(xì)胞的能力,在抗原特異性免疫過程中,CD4+T 細(xì)胞釋放的IFN-γ 作用于腫瘤細(xì)胞,可誘導(dǎo)多種抗原呈遞細(xì)胞表達(dá)MHC-I 類分子,提高靶細(xì)胞對(duì)CD8+T 細(xì)胞的敏感性,同時(shí)還能刺激B 細(xì)胞增殖、產(chǎn)生抗體,通過體液免疫途徑抑制腫瘤細(xì)胞復(fù)制[8]。CD4+T 細(xì)胞亞群按照分泌的細(xì)胞因子與介導(dǎo)的功能不同又分為Th1 和Th2 細(xì)胞。Th1 主要分泌IFN-γ、白細(xì)胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-β(TNF-β),Th2 主要分泌IL-4、IL-6、IL-10,分別具有介導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫的作用[9]。NSCLC 表面表達(dá)的腫瘤抗原被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別后,可通過以上免疫機(jī)制產(chǎn)生免疫應(yīng)答,攻擊并抑制腫瘤生長[10]。

    既往國內(nèi)外研究關(guān)于IFN-γ 的研究較多,NK 細(xì)胞、NKT 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等均有產(chǎn)生IFN-γ 的能力,此效應(yīng)細(xì)胞能夠激活多條信號(hào)途徑,其中被廣泛認(rèn)知的有JAK-STAT 途徑[11]。PAN 等[12]研究顯示,IFN-γ-JAK-STAT 信號(hào)通路可促進(jìn)NSCLC 細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。不過IFN-γ 在抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)方面還具有一定爭議性。KANAI 等[13]研究指出,非進(jìn)展期NSCLC 的IFN-γ 水平顯著高于進(jìn)展期NSCLC。本研究結(jié)果顯示,Ⅲ、Ⅳ期組IFN-γ 水平高于Ⅰ、Ⅱ期組,提示血清IFN-γ 水平與NSCLC 患者的分期與病情有關(guān)。其原因可能為:①IFN-γ 可通過激活并增強(qiáng)NK 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T 細(xì)胞等活力,從而調(diào)節(jié)免疫,增強(qiáng)抗腫瘤能力[14];②IFN-γ 可抑制癌基因表達(dá),延緩腫瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程;③IFN-γ 可增強(qiáng)TNF 的分泌、加強(qiáng)MHC-II 類抗原的表達(dá)、上調(diào)TNF 受體進(jìn)而促進(jìn)殺傷性T 細(xì)胞識(shí)別腫瘤細(xì)胞[15];④IFN-γ 還可通過負(fù)性調(diào)控腫瘤相關(guān)纖維細(xì)胞功能,如纖維細(xì)胞中的SMAD 信號(hào)通路,抑制成纖維細(xì)胞牽拉腫瘤細(xì)胞群而導(dǎo)致腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[16]。

    NKG2D 最早被發(fā)現(xiàn)是NK 細(xì)胞表面主要的激活性受體,隨后不斷深入研究發(fā)現(xiàn),NKG2D 還廣泛表達(dá)于γ、δ、T 細(xì)胞等絕大多數(shù)免疫細(xì)胞上,在天然免疫中發(fā)揮著重要作用[17]。本研究結(jié)果顯示,Ⅲ、Ⅳ期組NKG2D 低于Ⅰ、Ⅱ期組,NKG2D 異常降低與NSCLC 患者病情有關(guān)。張靖悅等[18]研究指出,Ⅲ、Ⅳ期NSCLC 患者NKG2D 明顯低于Ⅰ、Ⅱ期患者,與本研究結(jié)論相似。分析原因?yàn)椋孩貼KG2D 可通過固有性免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)T 細(xì)胞、NK 細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞,進(jìn)以影響機(jī)體的免疫功能[19];②NKG2D 可通過與應(yīng)激細(xì)胞表面的配體結(jié)合,傳遞細(xì)胞活化信號(hào),激活效應(yīng)細(xì)胞,發(fā)揮殺害腫瘤細(xì)胞的作用[20];③NKG2D 可與許多配體結(jié)合,如NK 細(xì)胞與其配體MIC-A 結(jié)合,可刺激前者表達(dá)NKG2D,發(fā)揮對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)視作用[21];④NKG2D與配體MIC 可同時(shí)刺激CD3+CD4+與CD3+CD8+NKG2 D 細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)免疫。

    CEA、CA125、CYFRA21-1 是臨床比較常見的腫瘤標(biāo)志物,通常用于評(píng)估腫瘤的療效及預(yù)后判斷中。Pearson 相關(guān)性顯示,以上3 項(xiàng)指標(biāo)與NKG2D 呈負(fù)相關(guān),與IFN-γ 呈正相關(guān),兩者對(duì)評(píng)估NSCLC 患者病情程度具有一定價(jià)值。LEE 等[22]研究指出,NSCLC 患者血清IFN-γ 水平較高,可有效預(yù)測NSCLC 的無進(jìn)展生存期。OKITA 等[23]研究顯示,NKG2D 配體表達(dá)水平可以預(yù)測NSCLC 患者的臨床病理學(xué)特征和預(yù)后。本研究ROC 曲線顯示,IFN-γ、NKG2D 及兩者聯(lián)合預(yù)測NSCLC 患者預(yù)后的AUC 分別為0.807、0.815 和0.872,具有較高預(yù)測效能。由此可見,檢測NKG2D、IFN-γ 能夠更好地了解NSCLC的發(fā)生發(fā)展,為預(yù)后提供參考依據(jù)。

    綜上所述,血清NKG2D、IFN-γ 與NSCLC 患者病情程度與腫瘤標(biāo)志物水平有關(guān),且兩者聯(lián)合檢測可有效預(yù)測患者早期預(yù)后。

    猜你喜歡
    期組清液標(biāo)志物
    清液回配對(duì)酒精發(fā)酵的影響研究
    釀酒科技(2023年10期)2023-11-23 11:09:42
    重癥流行性出血熱患者PBMC 中Fas/FasL 表達(dá)及免疫機(jī)制研究*
    低水平HBsAg患者纖維化分期特征及其與血小板的相關(guān)性分析
    肝臟(2021年9期)2021-10-19 07:14:44
    豆清液不同超濾組分體外抗氧化活性研究
    成纖維細(xì)胞生長因子-23與慢性腎臟病患者礦物質(zhì)代謝紊亂的相關(guān)性研究
    建筑施工廢棄泥漿環(huán)保型分離技術(shù)的研究與探討
    名城繪(2019年4期)2019-10-21 05:09:13
    膿毒癥早期診斷標(biāo)志物的回顧及研究進(jìn)展
    冠狀動(dòng)脈疾病的生物學(xué)標(biāo)志物
    乳酸菌及其相應(yīng)的上清液對(duì)凡納濱對(duì)蝦存活率、生長性能、免疫反應(yīng)和抗病性的影響
    飼料博覽(2015年12期)2015-04-04 04:28:36
    腫瘤標(biāo)志物在消化系統(tǒng)腫瘤早期診斷中的應(yīng)用
    国产成人影院久久av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日本五十路高清| 欧美人与善性xxx| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产真人三级小视频在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 七月丁香在线播放| 午夜福利影视在线免费观看| tube8黄色片| 亚洲国产日韩一区二区| 超色免费av| 一级毛片电影观看| 国产视频一区二区在线看| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲av日韩在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 黄色a级毛片大全视频| 一级黄片播放器| 一区二区日韩欧美中文字幕| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 免费看不卡的av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 色综合欧美亚洲国产小说| av电影中文网址| 亚洲国产精品国产精品| 香蕉丝袜av| 亚洲国产av影院在线观看| 高清不卡的av网站| 嫩草影视91久久| 热99久久久久精品小说推荐| 久久精品人人爽人人爽视色| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 男女国产视频网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| xxxhd国产人妻xxx| 国产成人精品久久二区二区免费| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲精品国产区一区二| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 日本91视频免费播放| 精品视频人人做人人爽| 一二三四社区在线视频社区8| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲人成电影观看| 欧美日韩视频精品一区| 中文字幕av电影在线播放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 多毛熟女@视频| 2018国产大陆天天弄谢| 各种免费的搞黄视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 中文字幕人妻熟女乱码| 一级毛片 在线播放| 精品欧美一区二区三区在线| 久久久精品94久久精品| av国产精品久久久久影院| 午夜91福利影院| 午夜激情av网站| 日韩一区二区三区影片| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人精品在线电影| 狂野欧美激情性xxxx| 99国产精品一区二区三区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 日韩av在线免费看完整版不卡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 免费在线观看完整版高清| 亚洲五月婷婷丁香| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 九草在线视频观看| 亚洲免费av在线视频| av电影中文网址| 搡老岳熟女国产| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人三级做爰电影| 97人妻天天添夜夜摸| 免费看不卡的av| 91国产中文字幕| 青青草视频在线视频观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人一区二区在线| 日本vs欧美在线观看视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 日本91视频免费播放| 大话2 男鬼变身卡| 中国国产av一级| 久久精品久久久久久久性| 亚洲精品美女久久av网站| av福利片在线| 日本欧美国产在线视频| 尾随美女入室| 国产成人91sexporn| 午夜福利影视在线免费观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩一本色道免费dvd| 久久ye,这里只有精品| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美黄色片欧美黄色片| 99热网站在线观看| 午夜激情av网站| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一本大道久久a久久精品| 国产又爽黄色视频| 国产精品偷伦视频观看了| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品久久午夜乱码| 丁香六月天网| 18在线观看网站| 我的亚洲天堂| 成人国产一区最新在线观看 | 秋霞在线观看毛片| 亚洲av电影在线进入| 十分钟在线观看高清视频www| 女性被躁到高潮视频| 两个人免费观看高清视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99九九在线精品视频| 欧美在线黄色| 亚洲熟女精品中文字幕| 丝袜美足系列| 成人午夜精彩视频在线观看| 操出白浆在线播放| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产主播在线观看一区二区 | 精品人妻1区二区| 国产成人精品久久二区二区91| 搡老乐熟女国产| 黄色 视频免费看| 色网站视频免费| 亚洲综合色网址| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 午夜福利,免费看| 国产麻豆69| 在现免费观看毛片| 91精品三级在线观看| 国产成人av教育| 老司机深夜福利视频在线观看 | 1024视频免费在线观看| 青青草视频在线视频观看| 久久精品国产a三级三级三级| 日本a在线网址| 伦理电影免费视频| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 青青草视频在线视频观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产成人精品无人区| 国产高清国产精品国产三级| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一区二区三区精品91| 午夜日韩欧美国产| 亚洲视频免费观看视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品福利观看| 九草在线视频观看| 国产片内射在线| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美精品人与动牲交sv欧美| netflix在线观看网站| 在线观看免费视频网站a站| 中文欧美无线码| 一本久久精品| 久久久久精品人妻al黑| 高清av免费在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久99一区二区三区| 丰满迷人的少妇在线观看| 99久久人妻综合| av网站免费在线观看视频| 久久久久久久精品精品| 丝袜喷水一区| 十八禁人妻一区二区| 99久久综合免费| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产精品99久久99久久久不卡| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日韩一本色道免费dvd| 国产1区2区3区精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 一区二区三区精品91| 久久精品国产综合久久久| 两个人免费观看高清视频| 日韩伦理黄色片| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久热这里只有精品99| 18禁黄网站禁片午夜丰满| a级毛片黄视频| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 人妻一区二区av| 七月丁香在线播放| 三上悠亚av全集在线观看| 男女免费视频国产| 午夜91福利影院| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 狂野欧美激情性bbbbbb| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 精品视频人人做人人爽| 在线av久久热| 久久人人97超碰香蕉20202| 满18在线观看网站| 午夜91福利影院| 亚洲,欧美精品.| 在线av久久热| 老熟女久久久| 日本午夜av视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美日韩视频精品一区| 少妇 在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久青草综合色| 精品一区二区三卡| 成人国产av品久久久| 久久影院123| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 99国产精品一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 午夜视频精品福利| 久久九九热精品免费| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 看免费成人av毛片| 青春草亚洲视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 美女主播在线视频| 免费看av在线观看网站| 十八禁人妻一区二区| av不卡在线播放| 大香蕉久久网| 久久青草综合色| 80岁老熟妇乱子伦牲交| av网站在线播放免费| www.自偷自拍.com| 国产精品偷伦视频观看了| 久久久久网色| 国产伦人伦偷精品视频| 色播在线永久视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 青青草视频在线视频观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 性色av一级| 亚洲av欧美aⅴ国产| 丰满少妇做爰视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | h视频一区二区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| a级毛片黄视频| 色网站视频免费| 脱女人内裤的视频| 人妻一区二区av| √禁漫天堂资源中文www| 丁香六月天网| 七月丁香在线播放| 国产在线一区二区三区精| 后天国语完整版免费观看| 欧美日韩av久久| 久久中文字幕一级| 91九色精品人成在线观看| 久久久久精品人妻al黑| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| avwww免费| 首页视频小说图片口味搜索 | 成人三级做爰电影| 91成人精品电影| 最黄视频免费看| 国产精品国产三级国产专区5o| 在线看a的网站| av国产久精品久网站免费入址| 久久久久精品人妻al黑| xxxhd国产人妻xxx| 国产欧美日韩精品亚洲av| av天堂久久9| 美女午夜性视频免费| 两人在一起打扑克的视频| 免费在线观看影片大全网站 | 老司机影院成人| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产1区2区3区精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 中国国产av一级| 久久亚洲精品不卡| √禁漫天堂资源中文www| 国产日韩欧美在线精品| 91麻豆av在线| 少妇精品久久久久久久| 日韩制服骚丝袜av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 性少妇av在线| 亚洲伊人色综图| 69精品国产乱码久久久| 热re99久久精品国产66热6| 色精品久久人妻99蜜桃| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久精品成人免费网站| 久热爱精品视频在线9| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 老司机深夜福利视频在线观看 | 一本色道久久久久久精品综合| 久久久久久久国产电影| 免费观看a级毛片全部| 一级黄色大片毛片| 色精品久久人妻99蜜桃| 一级黄片播放器| a级毛片在线看网站| 曰老女人黄片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 色婷婷久久久亚洲欧美| 交换朋友夫妻互换小说| 国产精品久久久久久精品电影小说| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲中文av在线| 亚洲色图综合在线观看| 五月开心婷婷网| 一级毛片女人18水好多 | 最近手机中文字幕大全| 香蕉丝袜av| 一本久久精品| 男女免费视频国产| a 毛片基地| 天天操日日干夜夜撸| 超碰成人久久| 欧美在线一区亚洲| 黄色视频在线播放观看不卡| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲专区国产一区二区| 大香蕉久久成人网| 另类精品久久| av福利片在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 亚洲天堂av无毛| 久热爱精品视频在线9| 久久免费观看电影| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 中文字幕制服av| 嫁个100分男人电影在线观看 | av福利片在线| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲欧洲国产日韩| av天堂在线播放| 亚洲av男天堂| 日本欧美视频一区| 国产成人啪精品午夜网站| 日韩精品免费视频一区二区三区| 激情五月婷婷亚洲| 国产一卡二卡三卡精品| 天堂8中文在线网| 人妻一区二区av| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利,免费看| 黄片播放在线免费| 欧美日本中文国产一区发布| 午夜免费鲁丝| 国产免费现黄频在线看| 最近手机中文字幕大全| 国产成人精品久久二区二区91| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产熟女午夜一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 老司机午夜十八禁免费视频| 91成人精品电影| 少妇的丰满在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 成人三级做爰电影| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产精品一区二区在线观看99| 丝袜美足系列| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产视频一区二区在线看| 91国产中文字幕| 老司机靠b影院| 国产国语露脸激情在线看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产成人欧美在线观看 | 色视频在线一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 好男人视频免费观看在线| 亚洲九九香蕉| 精品福利观看| 成年人黄色毛片网站| 中文字幕制服av| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲国产精品国产精品| av网站在线播放免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| 青青草视频在线视频观看| 黄色视频不卡| 丰满少妇做爰视频| 人成视频在线观看免费观看| 韩国高清视频一区二区三区| 观看av在线不卡| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 精品久久蜜臀av无| 国产av一区二区精品久久| 久久热在线av| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲国产最新在线播放| 欧美精品一区二区大全| 亚洲中文字幕日韩| 视频区图区小说| 日本91视频免费播放| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久天堂一区二区三区四区| 久久久久久久久免费视频了| 美女高潮到喷水免费观看| 一级毛片我不卡| 国产免费福利视频在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 视频在线观看一区二区三区| 蜜桃国产av成人99| 少妇人妻久久综合中文| 欧美97在线视频| 成人影院久久| 久久久国产精品麻豆| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 老汉色∧v一级毛片| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费少妇av软件| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美黑人欧美精品刺激| 大片免费播放器 马上看| 日本a在线网址| 一级黄片播放器| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 午夜久久久在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美乱码精品一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 妹子高潮喷水视频| 国产成人91sexporn| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 在线观看国产h片| 日本黄色日本黄色录像| 国产免费一区二区三区四区乱码| 大话2 男鬼变身卡| 啦啦啦啦在线视频资源| 日本vs欧美在线观看视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产精品一区二区免费欧美 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 青春草视频在线免费观看| 国产精品一区二区在线不卡| 久久女婷五月综合色啪小说| 午夜激情av网站| 免费观看a级毛片全部| 丁香六月天网| 国产精品一区二区在线不卡| 午夜福利在线免费观看网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲天堂av无毛| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 久久免费观看电影| 亚洲专区中文字幕在线| 一边亲一边摸免费视频| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品久久久久成人av| 中国美女看黄片| 久久人人97超碰香蕉20202| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲久久久国产精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产爽快片一区二区三区| av网站在线播放免费| 91精品三级在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 又大又爽又粗| 国产在线一区二区三区精| 欧美国产精品一级二级三级| 美女高潮到喷水免费观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日本av免费视频播放| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久影院123| 大陆偷拍与自拍| 一级黄片播放器| 国产麻豆69| 考比视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 国产黄色免费在线视频| 97在线人人人人妻| 久久影院123| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品第二区| 亚洲国产av影院在线观看| 考比视频在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 男女高潮啪啪啪动态图| videosex国产| 又紧又爽又黄一区二区| 99热网站在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 99久久综合免费| 麻豆av在线久日| 91字幕亚洲| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产一区二区激情短视频 | 另类亚洲欧美激情| 亚洲成人手机| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产深夜福利视频在线观看| 免费av中文字幕在线| 国产免费现黄频在线看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 色婷婷av一区二区三区视频| 蜜桃在线观看..| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品成人在线| 亚洲第一av免费看| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 男女午夜视频在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 久热这里只有精品99| 精品少妇内射三级| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲黑人精品在线| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产精品一区二区在线不卡| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 久久久国产一区二区| 五月开心婷婷网| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 最新在线观看一区二区三区 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产日韩欧美在线精品| 高清不卡的av网站| 男女边摸边吃奶| videos熟女内射| 久久综合国产亚洲精品| 大型av网站在线播放| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产在线免费精品| 一级黄片播放器| 中文字幕色久视频| 亚洲中文av在线| 日韩一区二区三区影片| 91麻豆av在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 丝袜脚勾引网站| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品二区激情视频| 丝袜脚勾引网站| 桃花免费在线播放| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 日韩伦理黄色片| 免费看不卡的av| 99国产精品一区二区三区| 女警被强在线播放| 1024香蕉在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 女人精品久久久久毛片| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲精品第二区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 99国产精品免费福利视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日本av免费视频播放| 丁香六月天网| 国产高清videossex| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 老司机靠b影院| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 男女床上黄色一级片免费看| 色播在线永久视频|