L-乳酸對(duì)創(chuàng)傷性顱腦損傷后缺氧誘導(dǎo)因子-1α和突觸可塑性相關(guān)蛋白的影響*

趙博，張振，李金英

（1.大連市中心醫(yī)院 麻醉科，遼寧 大連 116023；2.煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院 麻醉科，山東 煙臺(tái) 264000）

創(chuàng)傷性顱腦損傷可引起腦缺氧缺血[1-2]，腦血流不足和缺氧導(dǎo)致葡萄糖能量代謝異常，使軸突完整性和突觸可塑性受損[3-5]。在腦缺血和缺氧期間，缺氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）的表達(dá)上調(diào)，可增加腦組織對(duì)缺氧的耐受性[6]。乳酸是糖酵解的產(chǎn)物，作為腦的能量底物參與線粒體呼吸。有研究證明L-乳酸參與神經(jīng)細(xì)胞的能量代謝過程，在腦內(nèi)L-乳酸可以由星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放，并且在大腦能量需求增加時(shí)作為重要的能源供應(yīng)給鄰近的神經(jīng)元，使神經(jīng)元可以利用乳酸產(chǎn)生三磷酸腺苷[7-9]。另外，除了來源于星形膠質(zhì)細(xì)胞的乳酸參與大腦的代謝，血漿中的乳酸也可能起著重要的作用[10-11]。顱腦損傷后腦內(nèi)乳酸濃度顯著升高，增加的乳酸既可以作為大腦能量來源，也可以作為信號(hào)分子，改善創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠的神經(jīng)功能[6，12-14]。有研究[13，15]表明，中至重度腦損傷患者靜脈輸注高滲乳酸鈉可以改善顱腦損傷后的能量代謝。然而，HIF-1α 和突觸可塑性相關(guān)蛋白是否參與L-乳酸對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用尚不清楚。本研究旨在探討L-乳酸對(duì)顱腦損傷后HIF-1α 及突觸可塑性相關(guān)蛋白——突觸后密度蛋白95（postsynaptic density protein-95,PSD-95）和生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43（growth associated protein-43,GAP-43）表達(dá)的影響，闡明L-乳酸對(duì)顱腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制，為顱腦損傷的治療提供新的潛在靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞

健康成年雄性SD 大鼠27 只，體重250～300 g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK：[遼] 2004-0017，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證號(hào)SYXK：[遼] 2004-0029）。大鼠在SPF 環(huán)境中飼養(yǎng)，室溫（22±1）℃，24 h 晝夜循環(huán)光照，自由進(jìn)食水。神經(jīng)細(xì)胞株P(guān)C12 細(xì)胞系（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司）來源于大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤，培養(yǎng)于37℃、5%二氧化碳孵育箱中，使用10% FBS 的完全高糖DMEM 培養(yǎng)基。

1.2 主要試劑和儀器

1.2.1 主要試劑 L-乳酸（批號(hào)：30108518，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），TRZol、TransScript Top Green qPCR SuperMix（北京全式金生物技術(shù)有限公司），全蛋白提取試劑盒KGP250/KGP2100、BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司），兔抗鼠HIF-1α（1∶500）、兔抗鼠PSD-95（1∶1 000）、兔抗鼠GAP-43（1∶1 000）（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），小鼠抗鼠GAPDH 抗體（1∶5 000）、Alexa Fluor 594-conjugated goat anti-rabbit IgG（1∶100）（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），DAPI（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.2.2 主要儀器 自由落體打擊器（北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司），冷凍切片機(jī)LEICACM1850、電子顯微鏡（美國(guó)Leica 公司），超凈工作臺(tái)（北京哈爾儀器制造有限公司），二氧化碳孵育箱（美國(guó)Thermo 公司），基因擴(kuò)增儀ETC811（東勝創(chuàng)新生物科技有限公司），實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（美國(guó)Bio-Rad 公司）。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物模型復(fù)制及給藥 采用隨機(jī)數(shù)字表法將實(shí)驗(yàn)大鼠分為3 組：假手術(shù)組（Sham 組）、創(chuàng)傷性顱腦損傷組（顱腦損傷組）和顱腦損傷+L-乳酸組（顱腦損傷+Lac 組），每組9 只。采用Fenney’s 自由落體打擊模型[14，16]復(fù)制大鼠中度創(chuàng)傷性顱腦損傷模型。大鼠腹腔注射10%水合氯醛400 mg/kg 麻醉后，固定于立體定向框架內(nèi)。在無菌條件下，用牙科鉆于左側(cè)頂骨行開顱術(shù)（后顱3.5 mm，側(cè)顱2.5 mm，直徑5 mm），避免損傷硬腦膜。將一根直徑為4.5 mm、端部扁平的鋼棒（20 g）從25 cm 的高處落在硬腦膜上的活塞上，將腦組織壓縮到大約2 mm的深度，立即更換骨瓣并封閉，縫合頭皮。Sham 組大鼠在相同位置行開顱術(shù)，但不撞擊。顱腦損傷大鼠模型通過可見的肢體痙攣、短暫性呼吸暫停和無意識(shí)來驗(yàn)證是否復(fù)制成功[17]。待模型大鼠清醒后，采用改良大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分（mNSS）[18]從運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)、感覺試驗(yàn)、反射喪失和不正常運(yùn)動(dòng)及癲病、肌陣攣、肌張力障礙4 個(gè)方面進(jìn)行評(píng)分，并確保模型大鼠顱腦損傷程度為中度損傷。參照前期研究[9]，顱腦損傷+Lac 組于顱腦損傷后腹腔注射L-乳酸500 mg/kg，1 次/d，連續(xù)7 d；Sham 組和顱腦損傷組腹腔注射等容量生理鹽水，1 次/d，連續(xù)7 d。

1.3.2 細(xì)胞模型制備及給藥 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為對(duì)照組、機(jī)械劃痕細(xì)胞模型組（MSC 組）和機(jī)械劃痕細(xì)胞+L-乳酸組（MSC+Lac 組）。參照文獻(xiàn)[19]制備中等機(jī)械劃痕細(xì)胞模型。PC12 細(xì)胞接種于6 孔板上，兩孔為一組。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，MSC 組和MSC+Lac組直視下用200 μL 黃色移液管進(jìn)行縱橫切割損傷細(xì)胞，使損傷程度和范圍基本保持一致；參照文獻(xiàn)[19]進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)（時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)和濃度梯度實(shí)驗(yàn)），確定MSC+Lac 組L-乳酸濃度20 mmol/L 為最佳治療濃度，處理時(shí)間20 min 為最佳治療時(shí)間。對(duì)照組細(xì)胞不做切割損傷。對(duì)照組和MSC 組給予相同劑量的0.9%無菌生理鹽水。

1.3.3 大鼠行為學(xué)觀察及評(píng)分 7 d 后，采用mNSS評(píng)分[18]評(píng)估各組大鼠神經(jīng)功能缺損恢復(fù)程度。

1.3.4 Western blotting檢測(cè)大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α、PSD-95 和GAP-43 蛋白的相對(duì)表達(dá)量 行為學(xué)觀察結(jié)束后，每組隨機(jī)取3 只大鼠麻醉后斷頭處死，取其損傷側(cè)皮層及海馬組織。將各組腦組織裂解提取總蛋白，用BCA 標(biāo)準(zhǔn)蛋白定量法測(cè)定蛋白濃度，置入-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩２捎肧DS-PAGE 凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜。使用5%脫脂奶粉封閉2 h，洗膜后分別加入兔抗鼠HIF-1α（1∶500）、兔抗鼠PSD-95（1∶1 000）、GAP-43（1∶1 000）及小鼠抗鼠GAPDH 抗體（1∶5 000），4℃孵育過夜。然后，加入山羊抗兔或山羊抗鼠IgG 二抗（1∶10 000），室溫孵育2 h。洗膜后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影，使用Image J 軟件分析各條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參GAPDH 條帶灰度值的比值反映目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.5 Western blotting 檢測(cè)PC12 細(xì)胞中HIF-1α、PSD-95 和GAP-43 蛋白的相對(duì)表達(dá)量 將各組細(xì)胞裂解提取總蛋白，用BCA 標(biāo)準(zhǔn)蛋白定量法測(cè)定蛋白濃度，置入-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。采用SDSPAGE 凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜。使用5%脫脂奶粉封閉2 h，洗膜后分別加入兔抗鼠HIF-1α（1∶500）、兔抗鼠PSD-95（1∶1 000）、GAP-43（1∶1 000）及小鼠抗鼠GAPDH 抗體（1∶5 000），4℃孵育過夜。然后，加入山羊抗兔或山羊抗鼠IgG 二抗（1∶10 000），室溫孵育2 h。洗膜后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影，使用Image J 軟件分析各條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參GAPDH 條帶灰度值的比值反映目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.6 qRT-PCR 檢測(cè)損傷側(cè)皮層HIF-1α mRNA相對(duì)表達(dá)量 行為學(xué)觀察結(jié)束后，每組隨機(jī)取3 只大鼠麻醉后斷頭處死，取損傷側(cè)皮層組織。用TRIZol 試劑提取總RNA，測(cè)定RNA 純度和濃度?？俁NA 用TranScript Top Green qPCR Kit 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，合成的cDNA 立即用于定量PCR。HIF-1α 正向引物：5'-TCTAGTGAACAGGATGGAATGGAG-3'，長(zhǎng)度24 bp；反向引物：5'-TCGTAACTGGTCAGCTGT GGTAA-3'，長(zhǎng)度：23 bp。GAPDH 正向引物：5'-ATG CCGCCTGGAGAAACC-3'，長(zhǎng)度18 bp；反向引物：5'-GCATCAAAGGTGGAAGAATGG-3'，長(zhǎng) 度：21 bp。擴(kuò)增條件：第一步94℃30 s；第二步94℃5 s、55℃15 s、72℃10 s，40 個(gè)循環(huán)；第三步添加熔解曲線，進(jìn)行qRT-PCR，得到Ct 值。以GAPDH 為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算大鼠損傷側(cè)皮層HIF-1α mRNA 的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.7 免疫熒光染色檢測(cè)大鼠損傷側(cè)皮質(zhì)和海馬PSD-95 的熒光強(qiáng)度 行為學(xué)觀察結(jié)束后，每組隨機(jī)取3 只大鼠麻醉后，4%多聚甲醛經(jīng)心臟灌注，斷頭取腦，4%多聚甲醛固定，蔗糖梯度脫水，濃度依次是10%、20%、30%、30%，使用OCT 包埋劑將脫水完全的腦組織放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用冷凍切片機(jī)將包埋好的腦組織切成10 μm 厚的切片，放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。將冷凍組織切片取出，37℃烘箱烘片后，使用4%多聚甲醛固定，使用0.2% Triton X-100 通透，滴加3% BSA-PBS 封閉。敷一抗，兔抗PSD-95（1∶100），敷二抗，Alexa Fluor 594-conjugated goat anti-rabbit IgG（1∶100）。細(xì)胞核使用DAPI 染色，熒光顯微鏡下觀察。Image J 軟件分析損傷側(cè)皮質(zhì)和海馬CA1 區(qū)PSD-95的平均光密度值（靶蛋白的光密度值/受試大腦區(qū)域的總面積），統(tǒng)計(jì)PSD-95 熒光強(qiáng)度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較采用方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠mNSS評(píng)分的比較

Sham 組mNSS 評(píng)分為（0.67±0.71），顱腦損傷組mNSS 評(píng)分為（8.00±1.58），顱腦損傷+Lac 組mNSS 評(píng)分為（4.89±0.78）。3 組大鼠mNSS 評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，與Sham 組比較，顱腦損傷組mNSS 評(píng)分升高（P<0.01），與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組mNSS 評(píng)分降低（P<0.01）。

2.2 3 組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α 蛋白、mRNA相對(duì)表達(dá)量比較

3 組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α 蛋白和mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，與Sham 組比較，顱腦損傷組損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α 蛋白和mRNA 相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05）；與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α 蛋白和mRNA 相對(duì)表達(dá)量增加（P<0.05）。見圖1和表1。

表1 3組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α蛋白和mRNA表達(dá)比較（n=9，）

表1 3組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中HIF-1α蛋白和mRNA表達(dá)比較（n=9，）

注：①與Sham組比較，P<0.05；②與顱腦損傷組比較，P<0.05。

2.3 3組細(xì)胞中HIF-1α蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

3 組細(xì)胞中HIF-1α 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，與對(duì)照組比較，MSC 組HIF-1α 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05）；與MSC 組比較，MSC+Lac組HIF-1α 蛋白相對(duì)表達(dá)量增加（P<0.05）。見圖1和表2。

表2 3組細(xì)胞中HIF-1α蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

表2 3組細(xì)胞中HIF-1α蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與MSC組比較，P<0.05。

圖1 HIF-1α蛋白表達(dá)

2.4 3 組大鼠突觸可塑性相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量和免疫熒光強(qiáng)度比較

3 組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中PSD-95 和GAP-43 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，與Sham 組比較，顱腦損傷組PSD-95 和GAP-43 蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P<0.01）；與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組PSD95 和GAP43 蛋白相對(duì)表達(dá)量增加（P<0.05）。見圖2、3 和表3。

圖2 3組大鼠損傷側(cè)皮層中PSD-95和GAP-43蛋白的表達(dá)

圖3 3組大鼠損傷側(cè)海馬中PSD-95和GAP-43蛋白的表達(dá)

表3 3組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中PSD95和GAP43蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

表3 3組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中PSD95和GAP43蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

注：①與Sham組比較，P<0.05；②與顱腦損傷組比較，P<0.05。

3 組大鼠損傷側(cè)皮層和海馬中CA1 區(qū)PSD-95熒光強(qiáng)度比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，與Sham 組比較，顱腦損傷組PSD-95 熒光強(qiáng)度降低（P<0.05）；與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組PSD-95 熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（P<0.05）。見圖4 和表4。

表4 3組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中PSD-95熒光強(qiáng)度比較（n=9，）

表4 3組大鼠損傷側(cè)皮層、海馬中PSD-95熒光強(qiáng)度比較（n=9，）

注：①與Sham組比較，P<0.05；②與顱腦損傷組比較，P<0.05。

圖4 PSD-95免疫熒光圖（×200）

2.5 3組細(xì)胞突觸可塑性相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

3 組細(xì)胞的PSD95 和GAP43 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，與對(duì)照組比較，MSC 組PSD95 和GAP43 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P<0.05），與MSC 組比較，MSC+Lac 組PSD-95 和GAP-43 蛋白相對(duì)表達(dá)量增加（P<0.05）。見圖5 和表5。

圖5 3組細(xì)胞中PSD-95和GAP-43蛋白的表達(dá)

表5 3組細(xì)胞的PSD95和GAP43蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

表5 3組細(xì)胞的PSD95和GAP43蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與MSC組比較，P<0.05。

3 討論

Fenney’s 自由落體打擊模型是通過去顱骨手術(shù)，將打擊力量作用于完整的硬腦膜引起皮質(zhì)局灶性腦損傷[16，20]。這些損傷是在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)直接由挫傷皮層處發(fā)生的損傷和壞死腔引起的[16]。本研究采用mNSS 評(píng)分評(píng)估大鼠神經(jīng)功能缺損情況，確保模型大鼠損傷程度為中度損傷。本研究結(jié)果表明，與Sham 組比較，顱腦損傷組大鼠的mNSS 評(píng)分增高，提示顱腦損傷動(dòng)物模型復(fù)制成功。在前期實(shí)驗(yàn)[14]中給予乳酸預(yù)適應(yīng)后能改善顱腦損傷大鼠的神經(jīng)功能，故本研究參照前期實(shí)驗(yàn)的大鼠給藥劑量和方法，選用乳酸持續(xù)治療7 d，進(jìn)一步驗(yàn)證在顱腦損傷后持續(xù)L-乳酸治療的效果及機(jī)制。

本研究制備機(jī)械劃痕細(xì)胞模型，能有效地模仿腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞的病理變化[21]。有研究證明，大腦皮層神經(jīng)元損傷后30 min，大鼠存活率明顯下降，乳酸脫氫酶明顯增加[22]，使用15～30 mmol/L L-乳酸能保護(hù)缺血大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞[23]。本研究使用PC12 細(xì)胞系制備中度損傷的機(jī)械劃痕細(xì)胞模型，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定損傷時(shí)間為20 min，L-乳酸濃度為20 mmol/L，處理時(shí)間20 min。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，損傷20 min 后MSC 組HIF-1α蛋白相對(duì)表達(dá)量降低；與MSC 組比較，經(jīng)20 mmol/L L-乳酸處 理20 min 后，HIF-1α 蛋白相 對(duì)表達(dá) 量增加。

大量研究[24-28]表明，外源性給予乳酸對(duì)腦缺血和創(chuàng)傷性腦損傷有保護(hù)作用。持續(xù)靜脈輸注L-乳酸鈉對(duì)嚴(yán)重創(chuàng)傷性腦損傷患者有益[13]；在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，L-乳酸預(yù)處理可減輕創(chuàng)傷性腦損傷[14]。本研究結(jié)果表明，與Sham 組比較，顱腦損傷組大鼠的mNSS評(píng)分升高；與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組大鼠的mNSS 評(píng)分降低，提示L-乳酸持續(xù)治療7 d后可改善顱腦損傷大鼠的神經(jīng)功能缺損程度。

HIF-1 是一種異二聚體，由HIF-1β 和HIF-1α組成[29]。研究表明，HIF-1α 可改善缺氧缺血損傷[30-31]。HIF-1α 在顱腦損傷早期表達(dá)上調(diào)[6]，本研究結(jié)果表明，HIF-1α 在腦損傷后第7 天時(shí)表達(dá)降低，可能是由于顱腦損傷后7 d 大鼠處于失代償狀態(tài)導(dǎo)致HIF-1α 表達(dá)降低。本研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與Sham 組比較，顱腦損傷組HIF-1α 表達(dá)降低；與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組HIF-1α表達(dá)增加。本研究的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，MSC 組HIF-1α 表達(dá)降低；與MSC 組比較，MSC+Lac 組HIF-1α 表達(dá)增加。以上結(jié)果提示HIF-1α 參與創(chuàng)傷性腦損傷的發(fā)生，L-乳酸減輕腦損傷的機(jī)制與促進(jìn)HIF-1α 蛋白和mRNA 表達(dá)有關(guān)。

突觸可塑性在創(chuàng)傷性腦損傷中嚴(yán)重受損[31]，可塑性相關(guān)蛋白PSD-95 和GAP-43 減少[31-33]，L-乳酸預(yù)處理可促進(jìn)PSD-95 和GAP-43 表達(dá)[14]。有研究表明，激活HIF 信號(hào)通路，可促進(jìn)抑郁大鼠海馬神經(jīng)發(fā)生和突觸可塑性增加[34]。本研究結(jié)果進(jìn)一步表明，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，與Sham 組比較，顱腦損傷組PSD-95 和GAP-43 表達(dá)降低；與顱腦損傷組比較，顱腦損傷+Lac 組PSD-95 和GAP-43 表達(dá)增加。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組比較，MSC 組PSD-95 和GAP-43表達(dá)降低；與MSC 組比較，MSC+Lac 組PSD-95 和GAP-43 表達(dá)增加。以上結(jié)果均提示L-乳酸通過激活HIF-1α 進(jìn)而促進(jìn)PSD-95 和GAP-43 表達(dá)，對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷神經(jīng)具有保護(hù)作用。

綜上所述，L-乳酸通過上調(diào)HIF-1α 表達(dá)進(jìn)而增加突觸可塑性相關(guān)蛋白（PSD-95、GAP-43）的表達(dá)來減輕大鼠創(chuàng)傷性腦損傷。