多發(fā)性骨髓瘤患者的CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1的表達(dá)水平及臨床意義

劉 翔 胡陶玉

四川省宜賓市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科 644000

多發(fā)性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)是臨床上較為常見(jiàn)的一種惡性血液系統(tǒng)疾病[1-2]，是由于骨髓中的漿細(xì)胞發(fā)生異常增生，使患者血液以及尿液中出現(xiàn)大量的免疫球蛋白，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致患者機(jī)體各個(gè)組織以及器官受到不同程度的損傷，使患者機(jī)體免疫力下降，并發(fā)貧血、嚴(yán)重感染、腎衰竭等各種疾病[3-4]。多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)生于中老年人群體中，男性患者所占比例較大，其病因目前尚未明確，且病情發(fā)展迅速，預(yù)后較差，若不及時(shí)進(jìn)行治療，會(huì)對(duì)患者的生命造成很?chē)?yán)重的威脅[5]。因此多發(fā)性骨髓瘤的早期診斷與治療，對(duì)延長(zhǎng)患者生存期有著極其重要的意義。本文選取我院血液科于2020年8月—2021年3月期間收治的29例多發(fā)性骨髓瘤患者，探究多發(fā)性骨髓瘤患者的CD38+、CD138+漿細(xì)胞表面Notch1的表達(dá)水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院血液科于2020年8月—2021年3月收治的29例多發(fā)性骨髓瘤患者作為研究組，其中男17例，女12例，年齡45～84歲，中位年齡51歲。選取同一時(shí)期內(nèi)于我院進(jìn)行體檢的29例健康人作為對(duì)照組，其中男15例，女14例，年齡42～86歲，中位年齡54歲。兩組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本次研究經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)研究組對(duì)象均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，確診為多發(fā)性骨髓瘤,且均為初次治療患者；(2)所選對(duì)象均無(wú)溝通障礙以及語(yǔ)言表達(dá)障礙，且自愿簽署對(duì)本研究的知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者存在溝通障礙和(或)語(yǔ)言表達(dá)障礙；(2)患伴有其他重大器官性疾病和(或)伴有惡性腫瘤疾病等影響患者病情的穩(wěn)定。

1.2 治療方法 研究組患者均采用硼替佐米聯(lián)合地塞米松進(jìn)行治療。硼替佐米注射液(生產(chǎn)企業(yè)：Janssen-Cilag International N.V.；批準(zhǔn)文號(hào)：H20050308)單次注射劑量為1.3mg/m2，且每周注射2次，連續(xù)注射2周(即在治療的第1、4、8和11天時(shí)進(jìn)行注射)后需要停藥10d(即在治療的第12～21天時(shí)停藥)；地塞米松注射液(生產(chǎn)企業(yè)：成都天臺(tái)山制藥有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：H51020513)8mg進(jìn)行肌肉注射，每天注射1次。21d為1個(gè)治療療程，本次治療共6個(gè)療程。在每個(gè)療程結(jié)束后以及在出院后每2個(gè)月，患者需要進(jìn)行相關(guān)的骨髓檢查，并檢測(cè)患者初期、緩解期以及進(jìn)展期骨髓液中CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notchl的表達(dá)情況。

1.3 檢測(cè)方法 采集兩組對(duì)象的骨髓液于真空肝素抗凝管中，并通過(guò)200目濾網(wǎng)將骨髓液進(jìn)行過(guò)濾備用。各取兩組對(duì)象100μl骨髓液樣本于EP管中，并分別加入15μl的CD45-PerCP抗體、CD38-PE抗體、CDl38-FITC抗體以及Notchl-APC抗體，進(jìn)行充分渦旋混勻，并在4℃環(huán)境中避光靜置15min，15min后在每個(gè)樣本中加入2ml溶血素，再次渦旋混勻后，在室溫避光的條件下靜置10min，以1 500r/min的轉(zhuǎn)數(shù)離心5min，棄去上清液后，加入1ml PBS緩沖液重懸細(xì)胞形成細(xì)胞懸液，再次以1 500r/min的轉(zhuǎn)數(shù)離心5min，此操作重復(fù)2次，目的是對(duì)細(xì)胞樣本進(jìn)行清洗，最后通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組骨髓液樣本中CD38+CD138+漿細(xì)胞和CD38+CD138-漿細(xì)胞表面Notchl的表達(dá)水平[7-8]。

1.4 觀察指標(biāo) (1)比較兩組骨髓樣本中CD38+CD138+漿細(xì)胞和CD38+CD138-漿細(xì)胞表面Notchl的表達(dá)水平。(2)比較研究組患者在不同時(shí)期(包括初期、緩解期、發(fā)展期)CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notchl的表達(dá)情況。不同時(shí)期的定義如下：①初期：患者在首次診斷為多發(fā)性骨髓瘤時(shí)的時(shí)間點(diǎn)；②緩解期：患者在入院接受治療的6個(gè)療程中，接受骨髓穿刺檢查結(jié)果綜合評(píng)價(jià)最佳的時(shí)間點(diǎn)；③進(jìn)展期：患者治療療程結(jié)束出院后病情發(fā)生進(jìn)展的時(shí)間點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)水平比較 研究組患者骨髓液中CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1的表達(dá)率為(62.35±19.64)%，顯著高于研究組CD38+CD138-漿細(xì)胞表面的(40.18±16.65)%、對(duì)照組CD38+CD138+漿細(xì)胞表面的(29.90±7.28)%，以及對(duì)照組CD38+CD138-漿細(xì)胞表面的(33.79±15.22)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)水平比較

2.2 研究組不同時(shí)期與對(duì)照組CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)情況比較 研究組患者在初期和進(jìn)展期骨髓液CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)率分別為(62.35±19.64)%、(45.58±10.44)%，均高于研究組緩解期的(39.34±8.23)%和對(duì)照組的(29.90±7.28)%；同時(shí)，研究組患者緩解期骨髓液CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 研究組不同時(shí)期與對(duì)照組CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)情況比較

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤多發(fā)生于中老年人群體中，男性的患病概率高于女性，目前其病因尚未明確。多發(fā)性骨髓瘤患者的生存期較短，且病情發(fā)展迅速，預(yù)后較差，如若不及時(shí)進(jìn)行治療，會(huì)對(duì)患者的生命造成很?chē)?yán)重的威脅?；颊咴诨疾『?，其骨髓液中的漿細(xì)胞會(huì)發(fā)生異常增生，并在周?chē)慕M織和骨骼中浸潤(rùn)[9]，導(dǎo)致部分組織和臟器發(fā)生不同程度的損傷，骨髓的造血功能也受到破壞，使患者的免疫功能低下，并發(fā)貧血、嚴(yán)重感染、腎衰竭等各種疾病，危害患者生命[10-11]。CD38的表達(dá)與細(xì)胞增殖有關(guān)，且檢測(cè)結(jié)果顯示其在漿細(xì)胞表面表達(dá)量較高，是漿細(xì)胞表面的一種特異性標(biāo)記。CD138是細(xì)胞表面的黏附因子，其功能有很多，主要有促進(jìn)細(xì)胞增殖、維持細(xì)胞正常形態(tài)、抑制腫瘤分化等。由于接近100%的多發(fā)性骨髓瘤患者惡性漿細(xì)胞CD138表達(dá)為陽(yáng)性，并且在正常粒細(xì)胞中，CD138表達(dá)為陰性，因此將CD138作為惡性漿細(xì)胞的特異性指標(biāo)[12]。

近幾年來(lái)有研究結(jié)果表明，漿細(xì)胞表面Notch1的表達(dá)與多發(fā)性骨髓瘤有著密不可分的關(guān)系[13]。Notch受體目前一共有4種，在與其他細(xì)胞表面的配體結(jié)合后就會(huì)被激活，與細(xì)胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子相互作用后對(duì)目的基因進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而影響細(xì)胞的增殖和凋亡。抑制骨髓細(xì)胞表面Notch1基因表達(dá)后，會(huì)下調(diào)Hes1蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)PTEN抑癌基因表達(dá)的上調(diào)，同時(shí)使Bcl-2的表達(dá)下調(diào)。Bcl-2是一種抗凋亡蛋白，因此會(huì)有效抑制癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[14]。本文探究了多發(fā)性骨髓瘤患者的CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1的表達(dá)水平及其臨床意義。

研究組骨髓液中CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1的表達(dá)率為(62.35±19.64)%，顯著高于研究組CD38+CD138-漿細(xì)胞表面的(40.18±16.65)%、對(duì)照組CD38+CD138+漿細(xì)胞表面的(29.90±7.28)%，以及對(duì)照組CD38+CD138-漿細(xì)胞表面的(33.79±15.22)%(P<0.05)。結(jié)果說(shuō)明Notch1在MM患者的CD38+CD138+漿細(xì)胞表面高度表達(dá)。同時(shí)研究組患者在初期和進(jìn)展期骨髓液CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)率分別為(62.35±19.64)%、(45.58±10.44)%，均高于研究組緩解期的(39.34±8.23)%和對(duì)照組的(29.90±7.28)%(P<0.05)。結(jié)果表明，Notch1的表達(dá)量與患者的疾病發(fā)展以及預(yù)后情況有著密切的關(guān)系，呈現(xiàn)病情越嚴(yán)重Notch1的表達(dá)量越高的趨勢(shì)。這一研究結(jié)果的發(fā)現(xiàn)為多發(fā)性骨髓瘤疾病的發(fā)生發(fā)展、治療療效以及預(yù)后情況的監(jiān)測(cè)提供了一個(gè)新的方向。

綜上所述，在多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓液中CD38+CD138+漿細(xì)胞表面Notch1表達(dá)較高，并且患者的治療效果越好，Notch1表達(dá)量越低，在多發(fā)性骨髓瘤的檢測(cè)、進(jìn)展、治療和預(yù)后中發(fā)揮極其重要的意義。