5歲以下腹瀉患兒副溶血性弧菌感染調(diào)查分析

孫晶晶，龔四堂，陳冠樺，劉瑞桃，耿嵐嵐，黃玲，張順先

1廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市婦女兒童醫(yī)療中心消化科，廣州 510623；2廣州市兒童醫(yī)院消化科；3增城市婦幼保健院消化科；4上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院臨床研究中心

腹瀉是引起全球5歲以下兒童死亡的第二大疾病，僅次于下呼吸道感染性疾?。?］。2015年，全球50.9萬名1～5歲兒童死于腹瀉，由腹瀉引起的死亡人數(shù)占此年齡段死亡人數(shù)的8.6%［2］。腹瀉是由多種病原、多因素引起的腸道傳染性疾病，主要病原體包括輪狀病毒A、諾如病毒GⅡ、致腹瀉型大腸桿菌、志賀桿菌、沙門菌、空腸彎曲菌、艱難梭菌、腺病毒、星狀病毒、副溶血性弧菌（VP）等。其中VP是引起兒童急性腹瀉的主要細(xì)菌性病原體之一，遼寧省VP總體檢出率為4.37%［3］，上海市成人中VP檢出率為5.22%［4］。VP感染性腹瀉主要在成人中研究較多，而在兒童中卻鮮有報(bào)道。本研究通過分層抽樣選取了2020年1月—12月就診的822例患兒為研究對象，回顧分析5歲以下腹瀉患兒VP感染情況，探討其感染特征，旨在為VP感染引起的細(xì)菌性腹瀉防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2020年1月—12月于廣州市兒童醫(yī)院、廣州市婦嬰醫(yī)院、廣州市婦女兒童醫(yī)療中心、廣州市增城區(qū)婦幼保健院任何一家醫(yī)院就診的5歲以下急性腹瀉患兒495例（腹瀉組）。腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］：24 h內(nèi)腹瀉次數(shù)≥3次伴糞便形態(tài)異常（血樣便、水樣便、黏液樣便和蛋花樣便等）。選擇同一時(shí)期，于上述任何一家醫(yī)院就診的非腹瀉患兒（近14 d內(nèi)無腹瀉表現(xiàn)）327例作為非腹瀉組。本研究通過廣州市婦女兒童醫(yī)療中心倫理審查委員會(huì)評審（No.2017111501），同時(shí)通過中國臨床試驗(yàn)注冊中心審核（ChiCTR-ROC-17013620）?；純杭覍倬橥獠⒑炇鹬橥鈺?/p>

1.2 樣本采集使用醫(yī)院提供的一次性無菌塑料杯采集符合入選標(biāo)準(zhǔn)的患兒糞便樣本，挑取3 g或3 mL糞便裝入15 mL無菌離心管中，4℃保存，于24 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室檢測。患兒的基本信息采用結(jié)構(gòu)化問卷調(diào)查完成。問卷填寫不完整或拒絕參加本次研究的被排除。

1.3 VP檢測挑取黃豆大小或0.5 mL糞便樣本，接種至40 g/L氯化鈉蛋白胨水中培養(yǎng)18～24 h。隨后接種至硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（TCBS）中37℃培養(yǎng)16～18 h。使用一次性無菌吸頭挑選圓形、半透明、表面光滑、直徑2～3 mm的綠色菌落10～12個(gè)，接種至科瑪嘉顯色培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)16～18 h。挑取顯色為紅色的可疑菌落到無菌濾紙上，滴入氧化酶，10 s內(nèi)顯色為紫紅色者，視為高度可疑的副溶血性弧菌。然后將該菌接種至營養(yǎng)瓊脂上37℃培養(yǎng)16～18 h。用無菌棉簽挑取菌落到生理鹽水中，將比濁度調(diào)至0.5，使用VITEK 2革蘭陰性菌鑒定卡在梅里埃VITEK 2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)上進(jìn)行鑒定，37℃18～24 h后判定結(jié)果。最后將所有陽性菌株保存在含20%甘油肉湯培養(yǎng)基中，并于-80℃冷凍保存。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)軟件。定量資料呈偏態(tài)分布以M（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher's確切概率法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腹瀉組與非腹瀉組基本特征比較腹瀉組男236例、女259例，非腹瀉組男149例、女178例，兩組性別比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.352，P＞0.05）。822例患兒年齡中位數(shù)為24個(gè)月（95%CI：23～26），腹瀉組年齡中位數(shù)為17個(gè)月（95%CI：16～19），非腹瀉組年齡中位數(shù)為32個(gè)月（95%CI：10～49），腹瀉組年齡低于非腹瀉組（Z=-5.803，P＜0.05）。

2.2 VP與腹瀉的關(guān)系腹瀉組VP檢出率為5.9%（29/495），非腹瀉組為1.5%（5/327），腹瀉組VP檢出率高于非 腹 瀉 組（χ2=9.309，P＜0.05，OR=4.008，95%CI：1.535～10.463）。其中腹瀉組1歲以下患兒VP檢出率為3.0%（5/165），非腹瀉組為1.0%（1/98），兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.114，P＞0.05，OR=3.031，95%CI：0.349～26.332）。腹瀉組1歲以上患兒VP檢出率為7.3%（24/330），非腹瀉組為1.7%（4/229），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.676，P＜0.05，OR=4.412，95%CI：1.510～12.893）。

2.3 腹瀉患兒VP感染的流行特征住院和門診腹瀉患兒VP檢出情況：VP檢出率門診腹瀉患兒為7.0%（27/383），住院腹瀉患兒為1.8%（2/112），差異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義（χ2=4.354，P＜0.05，OR=4.17，95%CI：0.977～17.857）。性別分布：腹瀉組VP在女性患兒中檢出率為6.2%（16/259），男性患兒檢出率為5.5%（13/236），腹瀉患兒VP檢出率女性高于男性，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.100，P＞0.05，OR=0.885，95%CI：0.417～1.882）。年齡分布：VP檢出率在＜2歲腹瀉組中檢出率為4.2%（14/330），＞2歲檢出率為9.1%（15/165），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.688，P＜0.05，OR=2.257，95%CI：1.062～4.797）。季節(jié)分布：VP檢出率在腹瀉患兒中有明顯的季節(jié)分布趨勢（χ2=13.982，P＜0.05），秋季（7—9月）檢出率最高（13.1%，13/99），冬季（10—12月）檢出率最低（2.3%，2/87）。

2.4 腹瀉患兒VP感染的臨床特征因＜1歲患兒不能描述其是否有腹痛表現(xiàn)，因此未能將腹痛臨床癥狀納入本次統(tǒng)計(jì)。VP感染陽性患兒29例，VP感染陰性患兒466例，VP感染陽性腹瀉患兒與VP感染陰性患兒相比，發(fā)熱、脫水、抽搐、貧血、酸中毒發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。嘔吐發(fā)生率更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。血便和黏液便發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），而水樣便發(fā)生率高于VP感染陰性患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。腹瀉患兒VP陽性者腹瀉時(shí)間（2 d，95%CI：2～3）與VP陰性者（3d，95%CI：3～4）相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.325，P＜0.05）。

表1 腹瀉患兒VP感染基本特征比較

3 討論

VP臨床表現(xiàn)以腹痛、嘔吐和水樣便為主［6］，本研究結(jié)果與華南地區(qū)VP感染的臨床特征基本一致［7］。VP的檢出率有明顯地域特征，即不同地區(qū)檢出率不完全一致。研究顯示，蘇丹喀土穆州急性腹瀉兒童中VP檢出率為0.9%［8］，我國北京地區(qū)0～5歲腹瀉兒童VP的檢出率為0.4%［9］，而我國其他非沿海地區(qū)如云南和甘肅的腹瀉兒童中幾乎未檢測出VP［10-11］。本研究中腹瀉患兒VP的檢出率為5.9%，高于其他地區(qū)，這可能與當(dāng)?shù)鼐用竦娘嬍沉?xí)慣有關(guān)。廣州地區(qū)居民有進(jìn)食海產(chǎn)品的習(xí)慣，有研究發(fā)現(xiàn)，廣州市海產(chǎn)品VP的檢出率高達(dá)70%［12］，而非沿海地區(qū)居民不常進(jìn)食海產(chǎn)品，同時(shí)水源為淡水，不利于VP的生長，因此感染率相對較低。

VP是一種嗜鹽性細(xì)菌，主要來自海產(chǎn)品，如海魚、蝦、蟹、貝殼，同時(shí)畜禽肉、咸菜等均發(fā)現(xiàn)有VP存在。本研究發(fā)現(xiàn)，2歲以上腹瀉患兒VP檢出率較2歲以下腹瀉患兒更高，這與兒童的生長活動(dòng)相符。2歲以上兒童的飲食中輔食種類多樣化，外出游玩、就餐及活動(dòng)范圍更廣，進(jìn)食海產(chǎn)品的頻率較高；同時(shí)，部分居民為了追求海產(chǎn)品的鮮嫩口感，進(jìn)食烹飪時(shí)間較短、未完全熟透的食物，感染機(jī)率較大。另外，該年齡段兒童可能尚未形成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，自律性差，易接觸受污染的水源，更易被感染。

VP檢出集中在夏秋季，這可能與氣候因素有關(guān)，夏秋季天氣炎熱，水溫較高，有利于VP的生長和繁殖，食物易受細(xì)菌污染；同時(shí)，海產(chǎn)品大量上市，增加了感染機(jī)率。冬季是VP檢出率最低時(shí)期，而此時(shí)以兒童病毒性腹瀉為主［13］。

VP檢出率在門診（7%）腹瀉患兒中高于住院（1.8%）腹瀉兒童，這可能與VP感染引起的臨床癥狀相對較輕有關(guān)，一般在門診就能治愈；同時(shí)，也與家長重視兒童健康有關(guān)，在兒童腹瀉的早期階段及時(shí)就醫(yī)治療，使感染在疾病初期階段就得到有效控制。

本研究發(fā)現(xiàn)，非腹瀉患兒仍可檢出VP，可能原因：一是患兒已感染VP，但處于疾病的潛伏期，尚未表現(xiàn)出臨床癥狀。研究顯示，VP感染致病的潛伏期為12～24 h［14］。二是患兒感染的VP數(shù)量較少，不足以引起臨床癥狀。文獻(xiàn)報(bào)道，tdh和trh基因編碼的直接溶血素和直接溶血相關(guān)霉素是VP主要的臨床致病因子［15］，患兒VP毒力基因攜帶情況不同，致病力不同。因此，VP陽性的非腹瀉患兒，其VP毒力基因攜帶情況及大便VP陽性持續(xù)時(shí)間等將是我們后續(xù)研究的重點(diǎn)。

VP感染相關(guān)腹瀉通常為自限性疾病，病程約為3 d［14］。本研究中VP陽性者腹瀉持續(xù)時(shí)間多為2 d且較VP陰性者腹瀉時(shí)間更短，考慮為此次VP陽性樣本量較少所致。VP感染一般不主張應(yīng)用抗生素治療，但對于有嚴(yán)重脫水、免疫缺陷的患兒，應(yīng)根據(jù)糞便培養(yǎng)和藥物敏感性結(jié)果［16］，使用相應(yīng)的抗生素進(jìn)行及時(shí)救治。另外，VP被認(rèn)為是一種食源性病原體，其相關(guān)腹瀉以散發(fā)為主，但在全球如亞洲、非洲、美洲等地區(qū)也可引起爆發(fā)性流行［17］，故應(yīng)加強(qiáng)對VP的監(jiān)測，特別是在幼兒園、托兒所等場所，以防爆發(fā)流行。

綜上所述，廣州地區(qū)5歲以下腹瀉患兒存在VP感染，有明顯的季節(jié)分布特征，秋季高發(fā)，臨床以嘔吐、水樣便為主要表現(xiàn)。