急性髓系白血病患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與病理特征和預(yù)后的關(guān)系

尹薇，王欣

遂寧市中心醫(yī)院血液內(nèi)科，四川 遂寧 629000

白血病是早期造血前體細(xì)胞基因突變和未成熟成髓細(xì)胞增殖不良導(dǎo)致的惡性克隆性疾病。2022年癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)白血病發(fā)病8.8萬例，死亡6.4萬例［1］。急性髓系白血?。ˋML）是成人急性白血病最常見類型，盡管近年來AML診治取得一定進(jìn)展，但長(zhǎng)期生存率仍較低［2］。因此還需進(jìn)一步了解其發(fā)生和進(jìn)展機(jī)制，以促進(jìn)臨床診斷和新療法的開發(fā)。近年研究表明，長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）、微小RNA（miRNA）等非編碼RNA參與AML發(fā)生、發(fā) 展［3-4］。lncRNA小 核 仁RNA宿 主 基 因16（SNHG16）是lncRNA SNHG家族重要成員。研究報(bào)道，lncRNA SNHG16在宮頸癌、腎母細(xì)胞瘤等惡性腫瘤中發(fā)揮致癌作用［5-6］。miR-183-5p是miRNA家族重要成員。研究報(bào)道，miR-183-5p在乳腺癌、結(jié)腸癌等惡性腫瘤中異常水平，與腫瘤進(jìn)展有關(guān)［7-8］。筆者通過StarBase數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，lncRNA SNHG16與miR-183-5p存在靶向結(jié)合位點(diǎn)，但目前關(guān)于lncRNA SNHG16、miR-183-5p在AML患者血漿中水平及與病理特征和預(yù)后的關(guān)系尚未可知。2018年1月—2019年6月，我們通過檢測(cè)AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平，分析二者與病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2018年1月—2019年6月我院收治的93例AML患者為AML組，其中男50例、女43例，年齡18～83（56.85±7.62）歲；血紅蛋白：≥80 g/L者87例、＜80 g/L者6例；白 細(xì) 胞 計(jì) 數(shù)：≥30×109/L者45例、＜30×109/L者48例；血小板計(jì)數(shù)：≥50×109/L者37例、＜50×109/L者56例；骨髓原始細(xì)胞比率：≥70%者55例、＜70%者38例；髓外病變：有15例、無78例；法美英分型：M1型9例、M2型41例、M4型9例、M5型28例、M6型6例；預(yù)后危險(xiǎn)分層［9］：高危11例、中危48例、低危34例。選取同期40例體檢中心查體健康者為對(duì)照組，男23例、女17例，年齡18～77（55.87±7.25）歲；兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2/t分別為0.158、0.690，P均＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為AML，符合《成人急性髓系白血病（非急性早幼粒細(xì)胞白血?。┲袊?guó)診療指南（2017年版）》［10］診斷標(biāo)準(zhǔn)；②初次確診，入院前未接受任何抗腫瘤治療；③臨床資料齊全；④可接受隨訪；⑤患者及家屬知情并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①法美英分型M3型（急性早幼粒細(xì)胞白血?。?；②合并骨髓增生異常綜合征；③合并全身性感染性疾病、自身免疫性疾病、其他部位惡性腫瘤；④年齡＜18歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2018-0129）。

1.2 血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p檢測(cè)收集AML組入院時(shí)和對(duì)照組體檢時(shí)3 mL靜脈血，枸櫞酸鈉抗凝，3 000 r/min離心15 min（離心半徑10 cm），棄血清，留取血漿。采用TRIzol法（北京百奧萊博科技有限公司，編號(hào)：ALH011）提取血漿總RNA，微量分光光度計(jì)（賽默飛世爾科技有限公司，型號(hào)：Nano-Drop）驗(yàn) 證 純 度、濃 度，OD260/OD280為1.8～2.0，TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京智杰方遠(yuǎn)科技有限公司，編號(hào)：RR036A）合成cDNA。以cDNA為模板，采用PCR擴(kuò)增儀（賽默飛世爾科技有限公司，型號(hào)：ABI 9700）按照SYBR?Premix Ex Taq?試劑盒（上海赫果生物科技有限公司，編號(hào)：DRR820A）進(jìn)行擴(kuò)增：lncRNA SNHG16正向引物：5'-GTGCCTCAGGAAGTCTCTTGCC-3'，反向引物5'-ATCCAAACAAGTTATCACACAGCAC-3'；lncRNA SNHG16內(nèi)參GAPDH正向引物：5＇-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'，反 向 引 物5＇-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3'；miR-183-5p正 向 引 物：5＇-GCGGCTATGGCACTGGTAGAA-3'，反向引 物5＇-GTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3'；miR-183-5p內(nèi)參U6正向引物：5＇-CTCGCTTCGGCAGCACA-3＇，反向引物5＇-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3＇；引物設(shè)計(jì)和合成由上海生工生物工程股份有限公司完成。反應(yīng)條件：95℃90 s，95℃30 s、63℃30 s、72℃15 s，循環(huán)40次 后 收 集Ct值，采 用2-ΔΔCT法 計(jì) 算 血 漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p相對(duì)水平。

1.3 隨訪和分組AML患者出院后通過門診或電話隨訪3年，根據(jù)血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平分為lncRNA SNHG16高水平組（≥1.90，n=47）、lncRNA SNHG16低水平組（＜1.90，n=46）和miR-183-5p高水平組（≥1.03，n=49）、miR-183-5p低水平組（＜1.03，n=44），統(tǒng)計(jì)不同組別患者的生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS28.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料呈正態(tài)分布以±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用F檢驗(yàn)，事后多重比較采用Bonferroni校正；Pearson相關(guān)系數(shù)分析AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平的相關(guān)性；Kaplan-Meier法繪制AML患者生存曲線，組間生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比較AML組、對(duì)照組血漿lncRNA SNHG16相對(duì)表達(dá)量分別為1.90±0.44、1.29±0.23，miR-183-5p相對(duì)表達(dá)量分別為1.03±0.24、1.60±0.31，兩組血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t分別為10.635、10.304，P均＜0.01）。

2.2 AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平的相關(guān)性Pearson相關(guān)性分析顯示，AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.704，P＜0.01）。

2.3 AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與病理特征的關(guān)系A(chǔ)ML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓原始細(xì)胞比率、預(yù)后危險(xiǎn)分層有關(guān)（P均＜0.05）。見表1。

表1 血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與AML患者病理特征的關(guān)系（±s）

表1 血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與AML患者病理特征的關(guān)系（±s）

病理特征性別男 女年齡≥60歲＜60歲血紅蛋白≥80 g/L＜80 g/L白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥30×109/L＜30×109/L血小板計(jì)數(shù)≥50×109/L＜50×109/L骨髓原始細(xì)胞比率≥70%＜70%髓外病變有 無法美英分型M1、M2 M4、M5 M6預(yù)后危險(xiǎn)分層高危中危低危n 50 43 20 73 87 6 45 48 37 56 55 38 15 78 50 37 6 11 48 34 lncRNA SNHG16images/BZ_7_1777_1203_1802_1246.png±s 1.92±0.45 1.88±0.43 1.92±0.37 1.90±0.45 0.90±0.42 1.97±0.64 2.01±0.44 1.80±0.41 1.83±0.36 1.95±0.48 2.00±0.43 1.76±0.40 2.02±0.47 1.88±0.43 1.93±0.43 1.91±0.45 1.67±0.37 2.24±0.57 1.92±0.37 1.76±0.42 t/F 0.454 0.242 0.367 2.396 1.275 2.683 1.119 0.908 13.448 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05 miR-183-5pimages/BZ_7_1777_1203_1802_1246.png±s 1.02±0.24 1.04±0.24 1.02±0.19 1.04±0.25 1.04±0.24 0.97±0.30 0.97±0.18 1.09±0.28 1.07±0.21 1.01±0.25 0.98±0.23 1.12±0.23 0.95±0.24 1.05±0.24 1.04±0.27 1.03±0.19 1.04±0.27 0.76±0.23 1.03±0.18 1.12±0.25 t/F 0.402 0.367 0.624 2.530 1.270 2.874 1.456 0.023 14.790 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05

2.4 AML患者血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與預(yù)后的關(guān)系93例AML患者中位隨訪25個(gè)月，失訪7例，死亡42例，3年總生存率為54.84%（51/93）。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，lncRNASNHG16高水平組3年總生存率40.43%（19/47）低于lncRNA SNHG16低水平組69.57%（32/46）；miR-183-5p高水平組3年總生存率67.35%（33/49）高于miR-183-5p低水平組40.91%（18/44），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2分別為8.895、6.409，P均＜0.05）。

3 討論

AML是造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞中特定細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、表觀遺傳、點(diǎn)突變、遺傳突變等變化轉(zhuǎn)變形成的惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為髓系前體細(xì)胞增殖失控和骨髓衰竭引起的白細(xì)胞增加、血小板減少、貧血［11］。目前，造血干細(xì)胞移植仍然是AML最有效的治療手段，但受限于造血干細(xì)胞來源和經(jīng)濟(jì)條件的影響，未能有效開展［12］。盡管近年來國(guó)際上已有統(tǒng)一的AML系統(tǒng)治療方案，完全緩解率可達(dá)50%～80%，但仍有部分AML患者不能達(dá)到完全緩解或多次復(fù)發(fā)，發(fā)展為復(fù)發(fā)性難治性AML，通常于數(shù)周或數(shù)月內(nèi)死亡［13］。因此，有必要進(jìn)一步探索AML相關(guān)調(diào)控機(jī)制，以改善患者預(yù)后。

表觀遺傳學(xué)是生命科學(xué)研究熱點(diǎn)之一。近年越來越多研究證實(shí)，表觀遺傳學(xué)能通過影響組織學(xué)中多種致癌與抑癌基因途徑和免疫系統(tǒng)參與白血病發(fā)生、發(fā)展［14］。非編碼RNA在表觀遺傳學(xué)調(diào)控中發(fā)揮重要作用。lncRNA是一類轉(zhuǎn)錄本＞200個(gè)核苷酸的非編碼RNA，能通過直接或海綿miRNA間接調(diào)節(jié)調(diào)控基因水平［15］。lncRNA SNHG16定位于人17號(hào)染色體長(zhǎng)臂25.1，最初由YU等［16］在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)，并證實(shí)其參與促進(jìn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲。因此，近年來諸多學(xué)者致力于研究其在不同腫瘤中的作用。XIAO等［17］研究報(bào)道，lncRNA SNHG16在骨肉瘤中高表達(dá)，通過miR-1285-3p促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和抑制凋亡。XU等［18］研究報(bào)道，lncRNA SNHG16在胰腺癌中高水平，通過調(diào)控miR-302b-3p/溶質(zhì)載體家族22成員4軸促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移。本研究結(jié)果顯示，AML患者血漿lncRNA SNHG16水平顯著上調(diào)，提示lncRNA SNHG16高水平可能與AML發(fā)生有關(guān)，其高水平機(jī)制可能與lncRNA SNHG16被癌基因激活而大量轉(zhuǎn)錄有關(guān)［17-18］。另外，AML患者血漿lncRNA SNHG16水平與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓原始細(xì)胞比率、預(yù)后危險(xiǎn)分層有關(guān)，提示lncRNA SNHG16高水平參與AML發(fā)展，其機(jī)制可能與lncRNA SNHG16能調(diào)控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有關(guān)。腫瘤發(fā)生、發(fā)展涉及多條信號(hào)通路激活或失活，PI3K/Akt信號(hào)通路異常激活可改變AML細(xì)胞周期，促進(jìn)AML細(xì)胞增殖、遷移、存活和耐藥［19］。lncRNA SNHG16水平上調(diào)能通過降低第10號(hào)染色體上缺失的磷酸酶和緊張素同源物活性，促進(jìn)PI3K/Akt信號(hào)通路激活，進(jìn)而促進(jìn)AML細(xì)胞增殖和遷移［20］。

miRNA是一類長(zhǎng)度18～25個(gè)核苷酸的非編碼RNA，通過與mRNA的3'-非翻譯區(qū)結(jié)合而降解或抑制其翻譯而參與基因調(diào)控［21］。miR-183-5p定位于人7號(hào)染色體長(zhǎng)臂23.2，水平高度保守，作為視網(wǎng)膜高度水平特異性miRNA，既往研究多報(bào)道其與眼科疾病有關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，miR-183-5p亦參與癌癥過程［22］。HU等［23］研究報(bào)道，miR-183-5p在膀胱癌中低水平，能靶向調(diào)控多核糖核苷酸核苷轉(zhuǎn)移酶1，促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞凋亡。MO等［24］研究報(bào)道，miR-183-5p在肺腺癌中高水平，能靶向河馬/Yes相關(guān)蛋白信號(hào)通路，促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和血管生成。上述研究提示，miR-183-5p在不同惡性腫瘤中發(fā)揮不同作用。本研究結(jié)果顯示，AML患者血漿miR-183-5p水平顯著下調(diào)，與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓原始細(xì)胞比率、預(yù)后危險(xiǎn)分層有關(guān)，提示miR-183-5p低水平參與AML發(fā)生、發(fā)展。miR-183-5p在AML中低水平可能與啟動(dòng)子甲基化有關(guān)［23］。隨著miR-183-5p水平下調(diào)，通過ErbB2相互作用，蛋白激活PI3K/Akt等信號(hào)通路增強(qiáng)AML細(xì)胞增殖和分化能力，促進(jìn)AML進(jìn)展［25］。本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，AML患者血漿lncRNA SNHG16與miR-183-5p水平呈負(fù)相關(guān)，提示lncRNA SNHG16與miR-183-5p可能共同參與AML發(fā)生、發(fā)展，但尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。本研究通過隨訪和繪制不同血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平AML患者生存曲線發(fā)現(xiàn)，lncRNA SNHG16高水平和miR-183-5p低水平的AML患者3年總生存率低于lncRNA SNHG16低水平與miR-183-5p高水平患者，說明血漿lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平與AML患者預(yù)后密切相關(guān)，可能成為AML患者預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)。

綜上所述，AML患者血漿lncRNA SNHG16高水平和miR-183-5p低水平與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、骨髓原始細(xì)胞比率、預(yù)后危險(xiǎn)分層和預(yù)后有關(guān)。但本研究結(jié)果還需多中心研究證實(shí)，并需進(jìn)一步延長(zhǎng)隨訪時(shí)間分析二者與AML患者長(zhǎng)期預(yù)后的關(guān)系。