銀線草化學(xué)成分的研究

韓 悅， 王曉霞， 金新宇， 劉 帥， 劉雪華， 莊鵬宇

(華北理工大學(xué)藥學(xué)院，河北 唐山 063200)

銀線草ChloranthusjaponicusSieb.為金粟蘭科金粟蘭屬植物，又名白毛七、四塊瓦、四葉對，分布在北方地區(qū)，具有活血化瘀、消腫止痛、祛風(fēng)除濕功效，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷等疾病[1-4]，該植物成分主要為萜類及其聚合物，常見類型為孤木烷型、桉葉烷型、釣樟烷型、杜松烷型、吉馬烷型等，另外還有香豆素、黃酮類、酰胺類等，藥理活性主要有抗炎、抗腫瘤、抗病毒、抗菌等方面[5-8]。本實(shí)驗(yàn)對銀線草乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化，得到10個化合物，其中5～7、9為首次從金粟蘭屬植物中分離得到，1～4、8為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。

1 材料

M-600型核磁共振儀(德國Bruker公司)；SB-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(東京EYELA公司)；JASCO-V650紫外分析儀(北京金先鋒光電科技有限公司)；Agilent-1260分析型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；硅藻土(煙臺化學(xué)研究所)；Quiksep制備型高效液相色譜儀、凝膠Sephadex LH-20 (北京慧德易科技有限責(zé)任公司)；硅膠(煙臺新諾化工有限公司)。

銀線草采自陜西省安康市寧陜縣，經(jīng)華北理工大學(xué)藥學(xué)院莊鵬宇副教授鑒定為ChloranthusjaponicusSieb.，標(biāo)本(2016-1)保存于華北理工大學(xué)藥學(xué)院天然藥物研究室。

2 提取與分離

將干燥銀線草粉碎，在75%乙醇中浸泡24 h，加熱回流提取2次，每次4 h，減壓干燥得1.5 kg浸膏，甲醇復(fù)溶后吸附于等量硅藻土中至完全干燥，依次采用石油醚、乙酸乙酯、甲醇洗脫，減壓濃縮得各相應(yīng)部位浸膏。取乙酸乙酯部位500 g，經(jīng)硅膠柱、石油醚-乙酸乙酯 (30∶1～1∶1)柱，TLC檢測合并相同部分，得15個流分Fr.A～Fr.O。Fr.E (120.8 g)經(jīng)硅膠柱(二氯甲烷-甲醇，100∶0～0∶100)，合并相同組分，得12個流分Fr.E1～Fr.E12，F(xiàn)r.E3 (2.3 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱 (甲醇-水，65∶35)，得5個流分Fr.E3A～Fr.E3D，F(xiàn)r.E3B (200 mg) 經(jīng)HPLC (乙腈-水，60∶40，λ=210、230 nm)，得化合物1(10 mg,tR=23.0 min)、2(15 mg,tR=38.0 min)、3(18 mg,tR=65.0 min)；Fr.E3C (500 mg)經(jīng)硅膠柱(石油醚-乙酸乙酯，10∶1～1∶1)，TLC檢測合并相同部分，得4個流分Fr.E3C1～Fr.E3C4，F(xiàn)r.E3C1 (60 mg) 經(jīng)HPLC (乙腈-水，1∶1，λ=230、254 nm)，得化合物5(5 mg,tR=15.0 min)、6(9 mg,tR=28.0 min)、7(6 mg,tR=52.0 min)；Fr.E3C2 (90 mg)經(jīng)HPLC (甲醇-水，55∶45，λ=210、254 nm)，得化合物8(17 mg,tR=35.0 min)、9(18 mg,tR=52.0 min)；Fr.E3D(900 mg)經(jīng)硅膠柱(石油醚-丙酮，20∶1～1∶1)，合并相同部分，得5個流分Fr.E3D1～Fr.E3D5，F(xiàn)r.E3D2 (40 mg)經(jīng)HPLC (乙腈-水，45∶55，λ=210、 230 nm)，得化合物4(3 mg,tR=35.0 min)、10(6 mg,tR=58.0 min)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MSm/z：265.1[M+H]+，分子式C15H20O4。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz)δ: 5.10 (1H, brs, H-14)，4.93 (1H, d,J=10.5 Hz, H-6β)，4.76 (1H, brs, H-14)，2.40 (1H, brd,J=12.5 Hz, H-3β)，2.28 (1H, d,J=14.0 Hz, H-9β)，2.10 (1H, d,J=10.5 Hz, H-3α)，2.06 (3H, s, CH3-13)，1.96 (1H, dt,J=7.5，12.5 Hz, H-3α)，1.68 (2H, m, H-2α, 2β)，1.59 (1H, brd,J=13.0 Hz, H-1β)，1.56 (1H, d,J=14.0 Hz, H-9α)，1.27 (1H, dt,J=7.0, 13.0 Hz, H-lα)，1.05 (3H, s, 15-CH3)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δ: 41.4 (C-1)，23.1 (C-2)，37.1 (C-3)，146.0 (C-4)，60.0 (C-5)，67.4 (C-6)，159.1 (C-7)，103.4 (C-8)，50.6 (C-9)，37.0 (C-10)，123.6 (C-11)，172.1 (C-12)，9.1 (C-13)，107.4 (C-14)，18.2 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道一致，故鑒定為長尾粗木葉內(nèi)酯A。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z：289.2[M+Na]+，分子式C15H22O4。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz)δ: 1.03 (1H, m, H-1α)，1.38 (1H, m, H-1β)，1.79 (1H, m, H-2)，1.28 (1H, m, H-3α)，1.57 (1H, m, H-3β)，0.98 (1H, m, H-5)，2.29 (1H, m, H-6α)，2.67 (1H, dd,J=2.3, 13.2 Hz, H-6β)，1.25 (1H, m, H-9α)，1.95 (1H, m, H-9β)，1.71 (3H, s, 13-CH3)，1.22 (3H, s, 14-CH3)，1.14 (3H, s, 15-CH3)，4.02 (1H, s, 4-OH)，7.05 (1H, s, 8-OH)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 40.6 (C-1)，17.5 (C-2)，41.6 (C-3)，71.0 (C-4)，54.3 (C-5)，22.0 (C-6)，162.9 (C-7)，105.5 (C-8)，53.9 (C-9)，34.8 (C-10)，119.8 (C-11)，171.8 (C-12)，7.8 (C-13)，19.3 (C-14)，30.2 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道一致，故鑒定為4β,8β-dihydroxy-5α(H)-eudesm7(11)-en-8,12-olide。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z：163.1[M+H]+，分子式C9H8O3，1H-NMR (CDCl3，600 MHz)δ: 7.59 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7)，7.42 (2H, d,J=8.6 Hz, H-2, 6)，6.79 (2H, d,J=8.6 Hz, H-3, 5)，6.27 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8)，其中δ: 7.59 (1H, d,J=15.9 Hz)，6.27 (1H, d,J=15.6 Hz)為2個反式雙鍵質(zhì)子信號；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 127.3 (C-1)，131.2 (C-2，6)，116.8 (C-3，5)，161.2 (C-4)，146.7 (C-7)，115.6 (C-8)，171.2 (9-COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道一致，故鑒定為反式對羥基桂皮酸。

化合物4：淡黃色粉末，ESI-MSm/z：739.2[M+Na]+，分子式C39H40O3。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δ: 1.97 (1H, ddd,J=8.5, 6.0, 4.0 Hz, H-1)，0.58 (1H, ddd,J=8.5, 6.3, 6.0 Hz, H-2α)，1.09 (1H, m, H-2β)，2.23(1H, m, H-3)，3.77 (1H, d,J=9.0 Hz, H-9)，1.57 (3H, s, 13-CH3)，0.74 (3H, s, 14-CH3)，6.27 (1H, d,J=4.5 Hz，H-15α)，1.88 (1H, ddd,J=9.0, 8.0, 4.0 Hz, H-1′)，0.54 (1H, ddd,J=9.0, 7.0, 5.0 Hz, H-2′α)，1.03 (1H, ddd,J=5.5, 5.0, 3.0 Hz, H-2′β)，1.35 (1H, ddd,J=9.0, 7.5, 3.5 Hz, H-3′)，2.21 (1H, m, H-5′)，2.62 (1H, m, H-6′α)，2.72 (1H, dd,J=17.0, 12.0 Hz, H-6′β)，2.57 (1H, s, H-9′)，4.46 (1H, m, H-13′α)，5.25 (1H, d, H-13′β)，0.86 (3H, s, 14′-CH3)，3.64 (1H, d,J= 12.0 Hz, H-15′α)，4.88 (1H, d,J=12.0 Hz, H-15′β)，6.48 (1H, t,J=6.0 Hz, H-c)，4.94 (1H, dd,J=15.0, 6.0 Hz, H-d)，4.50 (1H, m, H-d)，1.76 (3H, s, e-CH3)，2.57 (1H, m, H-g)，2.56 (1H, m, H-g)，2.60 (1H, m, H-h)，2.47 (1H, m, H-h)，7.39 (1H, m, 8-OH)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 27.9 (C-1)，10.7 (C-2)，23.3 (C-3)，137.4 (C-4)，155.5 (C-5)，114.7 (C-6)，153.8 (C-7)，104.5 (C-8)，75.7 (C-9)，48.8 (C-10)，122.2 (C-11)，171.9 (C-12)，9.9 (C-13)，15.5 (C-14)，120.8 (C-15)，24.8 (C-1′)，13.7 (C-2′)，28.7 (C-3′)，75.4 (C-4′)，58.6 (C-5′)，22.6 (C-6′)，175.3 (C-7′)，55.7 (C-8′)，47.6 (C-10′)，121.3 (C-11′)，171.5 (C-12′)，53.8 (C-13′)，24.7 (C-14′)，72.5 (C-15′)，166.4 (C-a)，127.8 (C-b)，136.2 (C-c)，61.0 (C-d)，12.5 (C-e)，171.6 (C-f)，28.6 (C-g)，28.4 (C-h)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道一致，故鑒定為chloramultiols K。

化合物5：淡黃色粉末，ESI-MSm/z：285.2[M+H]+，分子式C16H12O5。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz)δ: 6.69 (1H, s, H-3)，6.64 (1H, s, H-8)，7.90 (2H, m, H-2′,6′)，4.05 (3H, s, 6-OCH3)，7.53 (3H, m, H-3′, 4′, 5′)，13.00 (1H, brs, 5-OH)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 164.2 (C-2)，105.3 (C-3)，183.1 (C-4)，153.3 (C-5)，131.9 (C-6)，152.1 (C-7)，93.5 (C-8)，131.3 (C-9)，105.9 (C-10)，60.9 (C-11)，130.4 (C-1′)，126.3 (C-2′, 4′, 6′)，129.1 (C-3′, 5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道一致，故鑒定為5,7-二羥基-6-甲氧基黃酮。

化合物6：白色粉末，ESI-MSm/z：334.1[M+Na]+，分子式C19H21NO3。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz)δ: 7.56 (1H, d,J=15.6 Hz)，7.37～7.20 (5H, m)，7.10～7.05 (1H, m)，7.03～6.97 (1H, m)，6.85(1H, d,J=8.3 Hz)，6.18 (1H, d,J=15.6 Hz)，5.63-5.50 (1H, brs)，3.90 (6H, s)，3.67 (2H, d,J=6.7, 6.7 Hz)，2.89 (2H, t,J=6.7 Hz)，其中7.56 (1H,d,J=15.6 Hz)、6.18 (d,J=15.6 Hz) 為2個反式雙鍵質(zhì)子信號；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 140.8 (C-1)，118.6 (C-2)，166.2 (C-3)，40.8 (C-4)，35.7 (C-5)，126.5 (C-1′)，109.8 (C-2′)，149.1 (C-3′)，150.5 (C-4′)，111.1 (C-5′)，121.9 (C-6′)，138.9 (C-a)，127.8 (C-b)，128.8 (C-c)，126.6 (C-d)，128.7 (C-e)，127.8 (C-f)，56.0 (C-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道一致，故鑒定為 (E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-N-phenylethylacrylamide。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm/z：191.2[M+H]+，分子式C12H14O2。1H-NMR (CDCl3，600 MHz)δ: 2.88 (1H, dt,J=17.8, 5.8 Hz, H-2eq)，2.70 (1H, ddd,J=17.8, 10.0, 5.8 Hz, H-2ax)，2.23 (1H, m, H-3eq)，2.33 (1H, m, H-3ax)，7.62 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5)，7.45 (1H, dd,J=7.6, 2.0 Hz, H-6)，7.79 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8)，1.58 (3H, s, 4-CH3)，2.39 (3H, s, 7-CH3)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 198.1 (C-1)，35.4 (C-2)，38.4 (C-3)，67.6 (C-4)，124.6 (C-5)，135.2 (C-6)，138.9 (C-7)，127.2 (C-8)，146.0 (C-4a)，130.4 (C-8a)，29.8 (C-11)，20.9 (C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道一致，故鑒定為4-hydroxy-4,7-dimethyl-1-tetralone。

化合物8：白色粉末，ESI-MSm/z：139.1[M+H]+，分子式C7H6O3。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz)δ: 7.92 (1H,J=8.7 Hz, H-2)，6.92 (1H, d,J=8.7 Hz, H-3)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz)δ: 121.8 (C-1)，131.8 (C-2, 6)，115.1 (C-3, 5)，161.6 (C-4)，166.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道一致，故鑒定為對羥基苯甲酸。

化合物9：白色粉末，ESI-MSm/z：183.1[M-H]-，分子式C10H16O3。1H-NMR (C5D5N, 600 MHz)δ: 7.10 (1H, t,J=2.5 Hz, H-2)，2.31 (1H, m, H-3)，2.00 (2H, m, H-3, 6)，1.54 (1H, m, H-4)，1.27 (1H, m, H-6), 2.45(1H, m, H-7)，2.11 (1H, m, H-7)，1.18 (3H, m, 8-CH3)，1.17 (1H, m, 9-CH3)；13C-NMR (C5D5N, 150 MHz)δ: 131.5 (C-1)，141.0 (C-2)，28.5 (C-3)，45.5 (C-4)，72.9 (C-5)，24.6 (C-6)，26.4 (C-7)，27.0 (C-8)，26.4 (C-9)，171.0 (10-COOH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報道一致，故鑒定為paeoveitols B。

化合物10：白色粉末，ESI-MSm/z：263.2[M+H]+，分子式C15H18O4。1H-NMR (CDCl3, 600 MHz) δ: 1.73 (1H, m, H-1)，0.76 (1H, m, H-2α)，0.97 (1H, m, H-2β)，1.56 (1H, m, H-3)，2.71 (1H, dd,J=3.5, 14.6 Hz, H-5)，2.46 (1H, m, H-6α)，2.86 (1H, dd,J=3.3, 17.0 Hz, H-6β)，6.29 (3H, s, H-9)，1.89 (3H, m, 13-CH3)，1.01 (3H, m, 14-CH3)，3.59 (1H, d,J=11.1 Hz, H-15α)，3.67 (1H, d,J=11.1 Hz, H-15β)；13C-NMR (CDCl3, 150 MHz) δ: 26.7 (C-1)，12.4 (C-2)，29.3 (C-3)，79.6 (C-4)，66.3 (C-5)，21.2 (C-6)，150.1 (C-7)，150.4 (C-8)，121.6 (C-9)，41.3 (C-10)，122.7 (C-11)，171.1 (C-12)，8.5 (C-13)，22.5 (C-14)，65.0 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報道一致，故鑒定為銀線草內(nèi)酯E。

4 討論

本研究利用色譜手段從銀線草乙酸乙酯部位分離鑒定10個化合物，其中化合物5～7、9為首次從金粟蘭屬植物中分離得到，1～4、8為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)，并且4具有顯著的抗炎活性[10]，豐富了該植物化學(xué)成分的研究，可用于其藥理活性篩選。