培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照與多組織對(duì)照在免疫組化染色中一致性的比較

張瑋琦，脫 穎

免疫組化檢測(cè)是病理醫(yī)師做出準(zhǔn)確診斷的重要依據(jù)，需進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制[1]。設(shè)立對(duì)照是免疫組化染色質(zhì)量控制的重要組成部分，目前常用的對(duì)照包括單組織陽性對(duì)照、多組織對(duì)照體系對(duì)照、組織芯片陽性對(duì)照等[2]。然而作為對(duì)照的組織標(biāo)本，由于處理方式不同、固定時(shí)間的差異以及不同患者標(biāo)本蛋白表達(dá)異質(zhì)性等因素的影響，不同批次制作的對(duì)照在檢測(cè)同一抗原時(shí)染色強(qiáng)度可能存在差異，對(duì)質(zhì)量控制產(chǎn)生影響。本文采用體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞制成細(xì)胞蠟塊作為陽性對(duì)照[3]，以檢測(cè)PAX-8抗原為例，比較其與傳統(tǒng)組織對(duì)照在染色強(qiáng)度以及不同批次間一致性的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照可以達(dá)到與組織對(duì)照相似的染色強(qiáng)度，且不同批次間染色一致性優(yōu)于組織對(duì)照，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021年5月～2022年1月中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科存檔的臨床診斷剩余組織，標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定24～48 h。培養(yǎng)細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室提供，該細(xì)胞系為穩(wěn)定傳代的腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞。

1.2 儀器與試劑PAX-8一抗試劑購自福州邁新公司；免疫組化染色采用Leica BONDⅢ全自動(dòng)免疫組化染色儀，行EnVision法染色。

1.3 多組織對(duì)照與培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照的制作多組織對(duì)照選取輸卵管、腎臟及甲狀腺組織，常規(guī)脫水浸蠟后切成小塊包埋成多組織蠟塊；培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照的制作方法為將培養(yǎng)的細(xì)胞消化下來后，用95%乙醇與10%中性緩沖福爾馬林(1 ∶1)混合后固定6 h，800 r/min離心棄上清液。沉淀的細(xì)胞中加入加熱融化的10%瓊脂糖，待其冷卻凝固后將包含細(xì)胞的瓊脂塊常規(guī)脫水、浸蠟、包埋制成細(xì)胞蠟塊。兩種對(duì)照均需做多個(gè)批次，多組織對(duì)照不同批次應(yīng)選用不同患者來源的組織標(biāo)本，培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照不同批次應(yīng)選用不同傳代代數(shù)的細(xì)胞，以便后續(xù)比較兩種對(duì)照不同批次間一致性的差異。

1.4 免疫組化染色將不同批次的多組織對(duì)照與培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照貼于同一玻片上，放入68 ℃恒溫烤箱中烤片1 h，Leica BONDⅢ全自動(dòng)免疫組化儀染色檢測(cè)PAX-8，染色條件為RE2修復(fù)40 min，一抗孵育25 min，二抗孵育8 min，DAB顯色。鏡下比較培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照與多組織對(duì)照的染色強(qiáng)度以及不同批次間染色一致性的差異。

2 結(jié)果

將收集的不同組織標(biāo)本制成10批多組織對(duì)照，將連續(xù)傳代6次的培養(yǎng)細(xì)胞制成6批培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照，在Leica BONDⅢ全自動(dòng)免疫組化儀上進(jìn)行染色，鏡下觀察PAX-8的染色強(qiáng)度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照與多組織對(duì)照均可達(dá)到強(qiáng)陽性的胞核染色，具有相似的染色強(qiáng)度。不同批次對(duì)照之間，培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照的染色表現(xiàn)出極好的一致性，不同批次間染色強(qiáng)度無明顯差異，強(qiáng)陽性胞核染色比例為100%；多組織對(duì)照的染色一致性相對(duì)較差，對(duì)照內(nèi)的各組織在不同批次間呈現(xiàn)出不同程度的染色強(qiáng)度差異，從強(qiáng)陽性到弱陽性不等(圖1)。不同批次的多組織對(duì)照中甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞胞核強(qiáng)陽性染色比例為80%，腎小管上皮細(xì)胞胞核中至強(qiáng)陽性染色比例為70%，輸卵管非纖毛黏液細(xì)胞胞核強(qiáng)陽性染色比例為50%。未達(dá)到上述染色強(qiáng)度的組織，并不適合作為組織對(duì)照(表1)。

表1 兩種對(duì)照不同批次間PAX-8染色強(qiáng)度的比較

3 討論

免疫組化染色步驟繁多，設(shè)立良好的對(duì)照是其結(jié)果準(zhǔn)確的重要保障[4]。目前常用標(biāo)本組織的對(duì)照來源于日常工作中，較易獲取，且具有組織形態(tài)，并能夠滿足日常染色質(zhì)量控制的需求，被廣泛使用。然而，由于組織處理方式的不同、固定時(shí)間差異以及不同患者標(biāo)本的異質(zhì)性等因素的影響，不同批次的對(duì)照間可能存在一定差異，對(duì)免疫組化染色的質(zhì)量控制產(chǎn)生一定影響。

ABCDEFGHIJKL

細(xì)胞培養(yǎng)是腫瘤細(xì)胞的單克隆增殖技術(shù)，細(xì)胞代數(shù)之間存在極好的一致性。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照的制作流程全程可控，其固定液的選擇、固定的時(shí)間等可能會(huì)影響免疫組化染色強(qiáng)度的標(biāo)本處理過程均受到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化的控制，制作的多組織對(duì)照批次間具有極好的一致性，且其染色結(jié)果與傳統(tǒng)組織對(duì)照在染色強(qiáng)度上無明顯差異。

綜上所述，培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)照與組織對(duì)照相比，不同批次間具有更好的一致性，可以使免疫組化結(jié)果的質(zhì)量控制更穩(wěn)定，更適合于免疫組化整體流程的標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化，可以作為組織對(duì)照的有力補(bǔ)充，尤其適用于日常工作中染色結(jié)果不穩(wěn)定項(xiàng)目的質(zhì)量控制，有推廣價(jià)值。