肉牛魏氏梭菌病的診斷與防控

王麗娟

遼寧職業(yè)學(xué)院，遼寧 鐵嶺 112099

牛魏氏梭菌病又稱(chēng)牛猝死癥，由魏氏梭菌在一定條件下感染引起的多種家畜共患的急性傳染病，臨床上以發(fā)病急、病程短、死亡快、死亡率高，消化道和實(shí)質(zhì)性器官?lài)?yán)重出血為典型特征，嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

各種應(yīng)激因素是誘發(fā)牛魏氏梭菌病的主要原因。當(dāng)牛群受到應(yīng)激，如氣候、飼養(yǎng)環(huán)境突然改變或者突然更換飼料，導(dǎo)致牛體抵抗力下降，反芻減少甚至停止，瘤胃微生態(tài)平衡被破壞，造成胃腸道菌群失調(diào)，食物在胃內(nèi)過(guò)度發(fā)酵產(chǎn)酸，引起正常的酸堿度失去平衡，沒(méi)有消化的淀粉顆粒飼料通過(guò)真胃進(jìn)入小腸，致使進(jìn)入腸道中的魏氏梭菌快速繁殖并產(chǎn)生大量的毒素，經(jīng)過(guò)機(jī)體吸收進(jìn)入血液，出現(xiàn)全身毒血癥，造成臟器衰竭，往往來(lái)不及治療即突然死亡，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)重大經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。

1 發(fā)病情況

遼寧省鐵嶺市某肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)，一共飼養(yǎng)西門(mén)塔爾育肥公牛5 000 頭，于2019 年10 月4 日早晨突然發(fā)現(xiàn)死亡2 頭，1 頭正在發(fā)病，表現(xiàn)腹部膨大，肌肉震顫，口鼻流出紅色泡沫液體，約2 h 也發(fā)生死亡。據(jù)駐場(chǎng)獸醫(yī)敘述，夜里巡視時(shí)牛群正常，早上巡查時(shí)才發(fā)現(xiàn)上述病例，可推斷死亡時(shí)間在下半夜或者凌晨。同時(shí)獸醫(yī)介紹，牛場(chǎng)近幾年內(nèi)在7-8 月暴雨過(guò)后、天氣悶熱季節(jié)曾發(fā)生過(guò)幾起類(lèi)似牛只突然死亡的情況。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該牛場(chǎng)共有10 棟舍，每棟500 頭，體重大約500 kg，飼養(yǎng)密度較大，糞便不能及時(shí)清理，圈舍環(huán)境衛(wèi)生較差，晝夜溫差大，一直按照標(biāo)準(zhǔn)采用稻草喂牛，自動(dòng)料線飼喂全價(jià)飼料，平均每頭牛每天采食9 kg 左右。臨床檢查，同群牛只體溫、呼吸均正常。

2 臨床癥狀

死亡2 頭牛，均在17 月齡左右，膘情好，1 頭橫躺在飼槽邊，1 頭橫躺在墻邊，頭頸呈角弓反張，腹部膨脹，口鼻流出紅色泡沫狀液體，舌頭脫出口外，肛門(mén)外翻[3]。發(fā)病牛，表現(xiàn)呼吸急促，反芻停止，腹部膨大，肌肉震顫、抽搐，眼球突出，口鼻流出紅色泡沫液體，四肢運(yùn)動(dòng)失調(diào)，不能站立，臥倒，體溫38.9 ℃，心跳加快，100 次/min 以上，心率不齊，肺部有明顯濕啰音，注射磺胺類(lèi)藥物，但未能緩解。

3 剖檢病理變化

剖檢病死牛，發(fā)現(xiàn)全身實(shí)質(zhì)器官出血、淤血現(xiàn)象。主要表現(xiàn)腹腔和胸腔內(nèi)有大量的暗紅色液體；肺部嚴(yán)重氣腫、充血，肺間質(zhì)變寬，氣管和支氣管內(nèi)均有大量泡沫狀白色黏液；心臟擴(kuò)張、質(zhì)地柔軟，心臟內(nèi)外膜有出血，心肌表面有樹(shù)枝樣出血，心包積液；肝臟腫大、質(zhì)地脆弱，淤血呈黑紫色；膽囊腫大、膽汁充盈；脾臟嚴(yán)重淤血腫大、質(zhì)地較脆且易碎；腎臟輕微腫大，腎被膜易剝離，廣泛性充血出血；膀胱無(wú)尿；小腸、盲腸充滿(mǎn)氣體，腸壁薄，腸壁外觀呈暗紅色，小腸黏膜嚴(yán)重充血、出血、黏膜脫落；皺胃黏膜有潰瘍、出血；腸系膜淋巴結(jié)腫大、出血。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 涂片染色鏡檢

采取病死牛的心血、肺臟、肝臟和脾臟、腸黏膜及內(nèi)容物等組織進(jìn)行切片，分別進(jìn)行瑞氏染色、美蘭染色和革蘭氏染色，油鏡下檢查。發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽(yáng)性菌，多為單個(gè)存在，少數(shù)成對(duì)存在，兩端鈍圓、粗大直桿菌，有莢膜，部分菌體有偏端芽孢或中央芽孢，無(wú)鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)，符合魏氏梭菌菌體形態(tài)特征[4]。

4.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定

將上述病料分別接種于普通瓊脂平板、血液瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板上和皰肉培養(yǎng)基中，放置37 ℃溫箱厭氧法培養(yǎng)24～48 h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，麥康凱瓊脂平板上無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；普通瓊脂平板上菌落呈表面光滑、邊緣整齊、不透明、灰白色的菌落，有些菌落中間有突起，外周有放射狀條紋，邊緣呈鋸齒狀；血液瓊脂平板上明顯見(jiàn)到內(nèi)環(huán)透明、外環(huán)淡綠的雙層溶血環(huán)灰白色較大菌落，邊緣呈鋸齒狀；在皰肉培養(yǎng)基中肉渣不被消化，有時(shí)呈肉紅色。挑取上述典型菌落進(jìn)行涂片，經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢，也可見(jiàn)到革蘭氏陽(yáng)性、兩端鈍圓的粗大直桿菌，單個(gè)或成對(duì)存在。

將血液瓊脂平板上的典型菌落接種牛乳培養(yǎng)基（液體表面覆蓋石蠟或凡士林）中，37 ℃溫箱厭氧培養(yǎng)8～10 h 觀察結(jié)果。在牛乳培養(yǎng)基中牛乳凝固，并產(chǎn)生氣體，使凝固的牛乳呈多孔海綿狀碎塊，出現(xiàn)典型的“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象[4]。

4.3 生化試驗(yàn)

取分離純化的典型菌落分別接種糖發(fā)酵管、硫化氫反應(yīng)管及其他生化鑒定管中，置于37 ℃溫箱厭氧法培養(yǎng)24～72 h。該分離菌株能分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、果糖產(chǎn)酸且產(chǎn)氣，不發(fā)酵甘露醇、山梨醇和水楊苷；MR 試驗(yàn)陰性，V-P 試驗(yàn)陽(yáng)性，吲哚試驗(yàn)陰性，硫化氫試驗(yàn)陽(yáng)性，明膠液化試驗(yàn)陽(yáng)性，硝酸鹽利用試驗(yàn)陽(yáng)性。

4.4 動(dòng)物試驗(yàn)

選擇4 只2 月齡的健康家兔隨機(jī)分成2 組備用。采取病牛腸內(nèi)容物進(jìn)行毒素檢查。方法是取回腸內(nèi)容物，加適量滅菌生理鹽水稀釋?zhuān)?jīng)4 000 r/min離心沉淀15 min，取上清液用一次性濾器過(guò)濾后分裝在無(wú)菌帶蓋的試管中分成2 組，第1 組上清液不加熱，第2 組上清液60 ℃加熱30 min 處理完待用。分別取2 mL 靜脈注射健康的家兔體內(nèi)，每組上清液分別注射2 只家兔進(jìn)行觀察。結(jié)果第2 組2 只家兔一直健活，而第1 組2 只家兔于注射后12～24 h內(nèi)死亡，說(shuō)明有毒素存在[3-5]。

將死亡的家兔置于37 ℃溫箱中4～5 h，剖檢時(shí)見(jiàn)兔腹圍明顯增大，肝臟腫脹呈泡沫狀，肝臟質(zhì)地脆弱呈泥狀，腸道內(nèi)有大量氣體，腸黏膜出血嚴(yán)重。采集死亡家兔的病變組織進(jìn)行觸片、染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)革蘭氏陽(yáng)性的大桿菌與牛病料觸片上的細(xì)菌形態(tài)一致。

5 診 斷

該病的診斷應(yīng)從發(fā)病特點(diǎn)、典型的臨床癥狀及特征性的剖檢病理變化做出初步診斷，確診必須結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷。如根據(jù)氣候驟變、飼養(yǎng)環(huán)境改變或者突然更換飼料等應(yīng)激因素刺激引起病牛突然死亡、腹部膨大、肌肉震顫、口鼻流出紅色泡沫液體，消化道和實(shí)質(zhì)性器官出血等典型特征，即可作出初步診斷，但確診必須采取病變組織作涂片染色鏡檢，觀察到革蘭氏陽(yáng)性粗大桿菌并有莢膜，呈偏端或中央芽孢，并作分離培養(yǎng)，有雙層溶血環(huán)，特別是在牛乳培養(yǎng)基中引起牛乳“洶涌發(fā)酵”，可用于本菌的快速診斷。

取腸內(nèi)容物做動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行毒素檢查是有效的微生物診斷方法，即可確診為肉?；加形菏纤缶?。若要確定毒素的類(lèi)型，需進(jìn)一步做毒素中和保護(hù)試驗(yàn)。目前，已采用多重PCR 等分子生物學(xué)方法用于毒素基因的檢測(cè)，快速方便。

6 防控措施

6.1 消滅傳染源

將3 頭病死牛的尸體及其病料送到無(wú)害化處理廠統(tǒng)一銷(xiāo)毀處理，消滅傳染源，避免疫病擴(kuò)散。

6.2 切斷傳播途徑

及時(shí)清理污染的糞便、草料并進(jìn)行焚燒處理；對(duì)水槽、料槽用20%漂白粉水溶液進(jìn)行消毒；對(duì)牛欄、器具每天早晚用0.3%過(guò)氧乙酸、聚維酮碘溶液加500 倍水進(jìn)行交換消毒；對(duì)牛舍的地面、墻壁及周?chē)h(huán)境用4%熱燒堿溶液、20%漂白粉等交替進(jìn)行全面消毒，1 次/d，連用1 周。之后牛舍地面、通道鋪撒生石灰粉，進(jìn)行吸濕除潮、抑菌消毒處理。

6.3 保護(hù)易感牛群

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，做好牛舍保溫，在飲水中投放恩諾沙星可溶性粉，按每升水1 g 劑量，連續(xù)投放3 d，以防止同群牛感染病菌；在飼料中適當(dāng)加入微生態(tài)制劑來(lái)促進(jìn)反芻和采食，調(diào)節(jié)胃腸道菌群，抑制有害菌群的繁殖。同時(shí)，全群健康牛使用魏氏梭菌多價(jià)疫苗緊急免疫接種，提高牛的抗病能力[3]。

7 討 論

7.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

根據(jù)肉牛的生長(zhǎng)階段，飼喂優(yōu)質(zhì)的全價(jià)配合飼料，更換飼料時(shí)禁止突然更換，應(yīng)逐漸調(diào)整；避免擁擠，降低牛舍飼養(yǎng)密度。

7.2 做好衛(wèi)生消毒

魏氏梭菌的繁殖體使用一般消毒藥均可殺死，但芽孢的抵抗力較強(qiáng)。因此，病死牛尸體及其分泌物、排泄物等一律焚燒或者深埋，做無(wú)害化處理；及時(shí)清理舍內(nèi)糞便、不潔墊料及霉變飼料，保持牛舍清潔、干燥；保證飼料和飲水清潔；場(chǎng)地、設(shè)施及用具等要定期使用漂白粉、石灰水、氫氧化鈉等消毒藥進(jìn)行全面消毒，消毒藥要定期更換，保證消毒效果，防止病原從消化道入侵是預(yù)防該病的關(guān)鍵措施[6]。

7.3 保證舍溫恒定

在悶熱季節(jié)，及時(shí)開(kāi)窗通風(fēng)換氣、舍內(nèi)防暑降溫，保持涼爽，避免牛煩躁、牛群間擁擠、斗毆等；天氣驟變季節(jié)，及時(shí)關(guān)窗防寒保暖，既要通風(fēng)換氣，又要保持環(huán)境溫度穩(wěn)定，防止晝夜溫差過(guò)大造成應(yīng)激。

7.4 免疫防治

在東北地區(qū)，暴雨及晝夜溫差大的高發(fā)季節(jié)以及易發(fā)病的地區(qū)，應(yīng)該對(duì)易感牛群提前接種與當(dāng)?shù)胤蛛x株相同血清型制備的疫苗或者魏氏梭菌多價(jià)疫苗，使動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，抵抗魏氏梭菌的侵襲。對(duì)于發(fā)病的牛只，及早使用抗牛魏氏梭菌高免血清或者治愈病牛血清進(jìn)行緊急治療，有一定的療效。

7.5 藥物防治

隔離病牛，及時(shí)采用鎮(zhèn)靜、解毒、強(qiáng)心補(bǔ)液、調(diào)理胃腸等對(duì)癥治療，改善癥狀以控制死亡；同舍牛只緊急藥物預(yù)防。發(fā)病牛及時(shí)采取病料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確定致病菌，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)篩選出敏感藥物。預(yù)防劑量按照治療量的一半給藥，一般不超過(guò)3 d，否則對(duì)牛生長(zhǎng)不利[7]。