• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    觀賞牡丹根腐病病原菌的分離及生防菌篩選的研究*

    2022-12-10 11:45:16李敏魏春秀楊武杰王芳趙靜
    菏澤學(xué)院學(xué)報 2022年5期
    關(guān)鍵詞:生防菌根腐病根際

    李敏,魏春秀,楊武杰,王芳,趙靜

    (1.菏澤學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 菏澤 274015; 2.濱州市農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法支隊(duì), 山東 濱州256600;3.山東省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心,山東 濟(jì)南 250014; 4.山東省聊城市莘縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局, 山東 聊城 252400;5.中國科學(xué)院微生物研究所真菌學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京 100101)

    觀賞牡丹(PaeoniasuffruticosaAndrews),屬于芍藥科芍藥屬,為落葉小灌木,是一種具有觀賞性、食用性和藥用性的植物,廣泛應(yīng)用于消炎、降血糖、抗腫瘤等方面的治療.牡丹的栽培歷史悠久,種植地分布廣泛.隨著種植年限增加,地下某些微生物逐年累積,致使牡丹根部腐爛,造成了油用牡丹的大量減產(chǎn)和觀賞牡丹的大面積死亡,牡丹種植業(yè)無法持續(xù)和延伸[1].牡丹根腐病又稱爛根病,是最嚴(yán)重的土傳病害之一,研究表明在山東菏澤牡丹根腐病的發(fā)病率約20%,嚴(yán)重地塊可達(dá)到40%以上[2].孫文姬[1]、成玉梅[3]等認(rèn)為引起菏澤地區(qū)牡丹根腐病的病原菌主要是茄病鐮刀菌.茄病鐮刀菌屬于瘤座孢科、鐮孢霉屬,營寄生或腐生生存,而吳玉柱[4]等則認(rèn)為茄腐皮鐮孢霉是引起牡丹根腐病的病原菌.這些病原菌使牡丹根部腐爛,葉片失綠萎靡,植株生長緩慢,嚴(yán)重時導(dǎo)致植株枯萎死亡[5],根腐病導(dǎo)致牡丹種植業(yè)經(jīng)濟(jì)虧損嚴(yán)重,并且影響丹皮的產(chǎn)量及藥用價值[6].由此可見,影響牡丹根腐病的病原菌可能不止一種,有可能是多種病原菌相互作用的結(jié)果.目前控制牡丹根腐病的主要措施是采用農(nóng)業(yè)和化學(xué)防治[7-8],但成效甚微.傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)防治雖然低能耗、低污染,但成本高,費(fèi)時費(fèi)力,且見效慢;化學(xué)防治雖在短時間內(nèi)經(jīng)濟(jì)有效,但長期使用易產(chǎn)生抗藥性,造成農(nóng)藥殘留、人畜中毒,影響生態(tài)平衡,使生物多樣性遭到破壞.新蘭[9]在辣椒疫病、李海薇[10]等在棉花枯萎病、王瑤[11]等在禾谷鐮刀菌、Weindling[12]等在大豆炭腐病的防治中均采用生物防治,并取得良好效果,生物防治有利于可持續(xù)發(fā)展.目前生物防治在其他植物根腐病方面有了一定進(jìn)展,張建強(qiáng)[13]等從無病燕麥根際土壤中分離篩選得到一株對燕麥鐮孢菌高效拮抗的細(xì)菌,細(xì)菌對供試病原菌表現(xiàn)出較好的抑菌作用.許樂[14]等從無病丹參根際土壤和植株中分離篩選得到一株高效抑制丹參病原菌生長的菌株,該菌株的粗提物對病原菌具有較強(qiáng)的抑制效果.牡丹的生防菌也有相關(guān)研究,王雪山[15]等從6份牡丹根際土壤樣品中分離得到7株對牡丹根腐病原菌具有良好拮抗作用的細(xì)菌分離物,其抑菌帶寬度在2~5 mm之間,具有較好的抑菌效果.吳玉柱[8]等從無病牡丹根際土壤中分離篩選得到6株抑菌效果較好的菌株.孟國慶[16]等從牡丹根際土壤中分離篩選出2株具有抑制效果的菌株,并鑒定為芽孢桿菌屬,這說明生物防治目前在牡丹病菌防治方面是可行的.由于引起牡丹根腐病的病原菌種類不一定是一種,本研究針對曹州牡丹園精品園區(qū)的部分觀賞牡丹爛根進(jìn)行病原菌分離,分離健康牡丹根際土壤和植株內(nèi)的細(xì)菌,通過平板對峙實(shí)驗(yàn)[17],旨在篩選高效抑制牡丹病原菌的生防菌,為探討生防菌抗性機(jī)理,生物農(nóng)藥和生物肥料的研發(fā)提供理論支持.

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 供試土壤和植株

    發(fā)病牡丹植株,無病牡丹植株和牡丹根際土壤由曹州牡丹園提供.

    1.1.2 培養(yǎng)基

    牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、PDA、查氏培養(yǎng)基、生理生化培養(yǎng)基等[18-19].

    1.2 方法

    1.2.1 病原菌的分離、純化與保藏

    將從曹州牡丹園取的發(fā)病牡丹植株的根部置于無菌袋中,帶回微生物實(shí)驗(yàn)室,沖洗表面的泥土和污物,將病根剪成1~2 cm小段或方塊置于0.1%汞溶液中處理15 min,并用無菌水沖洗3次,再置于75%乙醇溶液中處理30 min,用無菌水沖洗3次,無菌條件下接種于PDA平板上,置于26 ℃下培養(yǎng),第2 d開始觀察,待病根上長出菌絲,對其進(jìn)行分離、純化,菌落形態(tài)特征、顯微形態(tài)特征,保藏,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用[20].

    1.2.2 生防菌的分離、純化與保藏

    取無病牡丹植株及其根際土壤,從無病植株分離生防菌的方法同病原菌;土壤中微生物的分離步驟如下:25 g根際土壤置于225 mL無菌生理鹽水中,制成濃度為10-1g/mL的溶液,吸取1 mL置于盛有9 mL生理鹽水的試管內(nèi),稀釋成10-2g/mL,采用同樣方式稀釋至10-6g/mL,吸取適宜稀釋梯度溶液100 mL涂布營養(yǎng)瓊脂平板上,次日觀察并及時挑取細(xì)菌,采用三區(qū)劃線法對菌落進(jìn)行分離、純化和保藏,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用.

    1.2.3 抑菌判斷標(biāo)準(zhǔn)

    (1)不抑制:病原菌生長并覆蓋細(xì)菌.

    (2)一般抑制:病原菌生長遲緩,病原菌與生防菌之間有抑菌圈,且二者之間的距離小于1 cm,不能覆蓋細(xì)菌.

    (3)較強(qiáng)抑制:病原菌生長基本停止,無法向外延伸,病原菌與生防菌之間有明顯抑菌圈,且二者之間的距離大于1 cm,不能覆蓋細(xì)菌.

    1.2.4 生防菌的篩選

    采用對峙實(shí)驗(yàn)篩選生防菌,將活化病原菌接種在查氏平板中,26 ℃下倒置培養(yǎng)2 d,菌落長到約2 cm時,將活化的細(xì)菌點(diǎn)接種在病原菌水平和垂直線上距菌落3 cm處的位置,26 ℃下倒置培養(yǎng)觀察,根據(jù)抑菌的標(biāo)準(zhǔn)判斷抑菌能力大小.

    1.2.5 提取液的制備與抑菌篩選

    將篩選的生防菌活化,制成1012個/mL的菌懸液,在無菌條件下吸取1 mL,接種在裝有150 mL LB液體培養(yǎng)基的三角瓶中,在37 ℃,轉(zhuǎn)速為300 r/min的條件下培養(yǎng)24 h,制成發(fā)酵提取液.將6 mol/L HCl加入發(fā)酵液中,調(diào)節(jié)pH至2.0,在4 ℃條件下靜置過夜,10 000 r/min離心20 min,除去上清液,加入3 mL pH為7.2的甲醇攪勻,在4 ℃條件下靜置8 h,在10 000 r/min離心10 min,取其上清液轉(zhuǎn)移到新的無菌離心管中,即為胞外粗提物,用0.22 μm的濾膜過濾除菌,無菌條件下吸取100 μL粗提取物置于無菌濾紙片(直徑為6 mm)上,操作方法同生防菌的篩選.

    1.2.6 生防菌的形態(tài)學(xué)觀察和生理生化實(shí)驗(yàn)

    觀察抑制能力強(qiáng)的生防菌的菌落形態(tài)特征,顯微形態(tài)特征;對其進(jìn)行生理生化實(shí)驗(yàn)(甲基紅實(shí)驗(yàn)、糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)等)了解其理化特性[21].

    2 結(jié)果與分析

    2.1 病原菌的分離、觀察

    從牡丹病株的根部分離純化得到2株病原菌,命名為MDG1和 MDG2(見圖1).牡丹病原菌MDG1菌落呈青綠色,邊緣整齊呈白色,中間厚邊緣薄.主菌絲比較粗,分枝菌絲細(xì)且尖端比較圓潤,孢子形狀不規(guī)則.牡丹病原菌MDG2菌落呈絮狀,邊緣整齊呈白色,中間厚邊緣薄.菌絲特征與MDG1相同,但MDG2孢子形狀呈梭形,生長到一定階段脫落.

    圖1 牡丹根腐病病原菌MDG1、MDG2的菌落、顯微形態(tài)分析圖

    2.2 生防菌的抑菌效果

    2.2.1 病原菌MDG1生防菌的篩選

    由圖2可知,細(xì)菌G22、t12對病原菌MDG1的抑制能力較強(qiáng),使得病原菌絲變纖細(xì),顯著阻止病原菌的生長,病原菌與生防菌之間的距離大于1 cm;細(xì)菌GX4、18、38對病原菌MDG1的抑制能力一般,能使病原菌變纖細(xì),但抑制能力不強(qiáng),有輕微接觸,病原菌與生防菌之間的距離小于1 cm,病原菌仍能生長繁殖;細(xì)菌44、17、12通過快速生長繁殖,以擠占病原菌的生長空間的方式對病原菌MDG1進(jìn)行抑制,能使病原菌變纖細(xì),但抑制能力一般,病原菌與生防菌之間的距離小于1 cm,生長速度緩慢但仍能繼續(xù)生長.

    圖2 病原菌MDGI的對峙實(shí)驗(yàn)圖

    2.2.2 病原菌MDG2生防菌的篩選

    由圖3可知,細(xì)菌37、32對病原菌MDG2的抑制能力較強(qiáng),使得病原菌變纖細(xì),無法向外擴(kuò)展,能夠顯著阻止病原菌的生長,病原菌與生防菌之間的距離大于1 cm;細(xì)菌G42對病原菌MDG2的抑制能力一般抑制,能使病原菌變纖細(xì),但抑制能力不強(qiáng),有輕微接觸,病原菌與生防菌之間的距離小于1 cm,病原菌仍能生長繁殖;細(xì)菌9、41、45、40、WX9通過快速生長繁殖,以擠占病原菌生長空間的方式對病原菌MDG2進(jìn)行抑制,使病原菌變纖細(xì),但抑制能力不強(qiáng),有輕微接觸,病原菌與生防菌之間的距離小于1 cm,病原菌生長緩慢但仍能繼續(xù)生長至與生防菌接觸.細(xì)菌G22、G23、WX8釋放的代謝物對病原菌MDG2進(jìn)行抑制,能使病原菌變纖細(xì),無法向外擴(kuò)展,能夠顯著阻止病原菌的生長,病原菌與生防菌之間的距離大于1 cm.

    圖3 病原菌MDG2的對峙實(shí)驗(yàn)圖

    2.3 生防菌提取液的抑菌效果

    2.3.1 病原菌MDG1的生防菌發(fā)酵液的篩選

    圖4 病原菌MDG1的液體抑制圖

    由圖4可知,WX3、32的發(fā)酵液對病原菌MDG1的抑制能力較強(qiáng),能使病原菌變纖細(xì),無法向外擴(kuò)展,病原菌生長不能覆蓋濾紙片,病原菌與濾紙片之間有明顯的抑菌圈,說明發(fā)酵液中某種或多種成分具有抑菌作用.

    圖5 病原菌MDG2的液體抑制圖

    2.3.2 病原菌MDG2的生防菌發(fā)酵液的篩選

    由圖5可知,G49、WX8的發(fā)酵液對病原菌MDG2的抑制能力較強(qiáng),使病原菌變纖細(xì),無法向外擴(kuò)展,病原菌生長不能覆蓋濾紙片,病原菌與濾紙片之間有明顯的抑菌圈,說明發(fā)酵液中具有一種或多種抑菌成分,WX8的發(fā)酵液中含抑菌成分或種類較少,生長后期不具有抑制功能.

    2.4 生防菌的分離、純化與形態(tài)學(xué)觀察

    2.4.1 生防菌的分離、純化

    由圖6可知,G22為較小的淡黃色圓形菌落,表面濕潤有光澤,44、WX8、40、41、WX9、t12這6株生防菌表面干燥有褶皺,邊緣不平整呈鋸齒狀,菌落較大,無突起.其中t12、44、40、WX9、41呈淡黃色,WX8較其顏色略淡,呈乳白色.18、G42這2株為淡黃色不規(guī)則形菌落,表面干燥有褶皺,邊緣不整齊呈鋸齒狀.G49、9、45這3株生防菌菌落較大,呈淡黃色,表面濕潤,且有光澤.G23、32這2株生防菌菌落較大,呈白色,形狀不規(guī)則,表面濕潤,且不光滑有褶皺,邊緣不整齊呈鋸齒狀.WX3菌落較小,呈白色,圓形,表面濕潤,且有光澤.

    圖6 生防菌菌落圖

    圖7 革蘭氏染色圖片

    2.4.2 生防菌的形態(tài)學(xué)觀察

    通過革蘭氏染色觀察發(fā)現(xiàn),如圖7所示,G22近似球形或橢圓形,為革蘭氏陰性菌;G49近似球形或橢圓形,為革蘭氏陽性菌;12、WX3、t12、17、44、38、GX4、18、32、G42、38、40、9、45、WX9、WX8、37這17株生防菌近似桿狀或棒狀,菌體大多平直細(xì)長,兩端圓潤或尖銳,為革蘭氏陽性菌,41、G23這2株近似短桿狀,兩端尖銳,為革蘭氏陰性菌.

    表1 生防菌的生理生化結(jié)果

    2.5 生防菌生理生化實(shí)驗(yàn)鑒定

    由表1可知,抑制觀賞牡丹病原菌的生防菌共21株,生防菌均能分解明膠呈陽性;G22能夠利用乳糖產(chǎn)酸變黃,乳糖發(fā)酵呈陽性;GX4、WX8、40、G23這4株生防菌不能利用葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣為陰性,其余生防菌均為陽性;38、WX8、9、32這4株生防菌不能分解淀粉呈陰性,其余生防菌均為陽性;G22、18、12、32、G23、G49這6株生防菌滴加甲基紅試劑使培養(yǎng)基變黃為陰性,其余生防菌均為陽性;18、t12、38、37、43、WX8、45、G42、WX9這9株生防菌使培養(yǎng)基變成深藍(lán)色,說明這9株生防菌能夠利用檸檬酸鹽生長,使pH變?yōu)閴A性且顏色變化為陽性,其余生防菌均為陰性;GX4、18、44、17、12、t12、38、41、WX3、45、32、40、G23、G49這14株生防菌滴加吲哚試劑后呈粉紅色,說明這14株生防菌含有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚,與吲哚試劑內(nèi)的對二甲基氨基苯甲醛作用形成紅色為陽性,其余為陰性.

    3 結(jié)論

    (1)本實(shí)驗(yàn)通過菌落形態(tài),顯微形態(tài)觀察,初步確定引起曹州牡丹園牡丹根部腐爛的病原菌為MDG1、MDG2.

    (2)從無病牡丹土壤和植株內(nèi)分離、純化細(xì)菌136株,以牡丹根腐病病原菌為靶目標(biāo),分離到21株具有較強(qiáng)抑菌能力的細(xì)菌,對病原菌MDG1抑制能力較強(qiáng)的有8株細(xì)菌(G22、GX4、18、44、17、12、t12、38)和32、WX32株菌株發(fā)酵液;對病原菌MDG2抑制能力較強(qiáng)的有11株細(xì)菌(37、41、WX8、G22、9、45、G42、32、40、G23、WX9)和G49、WX82株菌株發(fā)酵液,G22對于兩種病原菌都有抑制作用,WX8的菌體和發(fā)酵液對于病原菌MDG2都有抑制作用.

    對抑制性強(qiáng)的生防菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和生理生化實(shí)驗(yàn),為探究生防菌及其代謝物對牡丹病原菌抑制機(jī)理提供理論基礎(chǔ),為開發(fā)生物菌肥提供理論支撐.

    猜你喜歡
    生防菌根腐病根際
    番茄萎蔫膨果慢 當(dāng)心根腐病
    新型生防菌組合防治煙草青枯病田間藥效評價
    根際微生物對植物與土壤交互調(diào)控的研究進(jìn)展
    茴香根腐病 防治有辦法
    飼用南瓜根腐病的發(fā)生原因及防治措施
    黃花蒿葉水提物對三七根際尖孢鐮刀菌生長的抑制作用
    促植物生長根際細(xì)菌HG28-5對黃瓜苗期生長及根際土壤微生態(tài)的影響
    中國蔬菜(2016年8期)2017-01-15 14:23:38
    玉米莖腐病生防菌的篩選鑒定及最佳培養(yǎng)條件研究
    番茄根腐病的發(fā)生與防治
    上海蔬菜(2016年5期)2016-02-28 13:18:10
    生防菌XM—10對黃瓜枯萎病菌的拮抗機(jī)理
    svipshipincom国产片| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品一区二区精品视频观看| 手机成人av网站| 手机成人av网站| 国产精品久久久久久精品古装| 99国产极品粉嫩在线观看| 99久久人妻综合| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 老司机亚洲免费影院| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品欧美亚洲77777| 久久久久视频综合| 在线观看日韩欧美| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲欧美激情综合另类| 中文字幕色久视频| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品永久免费网站| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一级黄色大片毛片| 国产精品久久久久成人av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲成人免费电影在线观看| 999精品在线视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲全国av大片| ponron亚洲| 国产一区在线观看成人免费| 亚洲成人国产一区在线观看| 深夜精品福利| 大香蕉久久网| 久久久久国内视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 人成视频在线观看免费观看| 久久精品国产a三级三级三级| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 捣出白浆h1v1| 欧美在线一区亚洲| 18禁黄网站禁片午夜丰满| bbb黄色大片| 成人手机av| 中文欧美无线码| 久久精品成人免费网站| 超色免费av| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲精品国产一区二区精华液| 99国产精品一区二区三区| 亚洲专区中文字幕在线| 美女午夜性视频免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产欧美日韩精品亚洲av| 交换朋友夫妻互换小说| 免费观看a级毛片全部| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲成人免费电影在线观看| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美在线黄色| 男女床上黄色一级片免费看| 成在线人永久免费视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 欧美最黄视频在线播放免费 | 999久久久国产精品视频| 久久久国产成人免费| 国产色视频综合| 国产成人av教育| 极品少妇高潮喷水抽搐| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 日本wwww免费看| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲欧美激情在线| 亚洲男人天堂网一区| 黄片大片在线免费观看| 国产成人免费无遮挡视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲久久久国产精品| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久人妻av系列| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| av在线播放免费不卡| 男女下面插进去视频免费观看| 成人三级做爰电影| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一进一出好大好爽视频| 久久香蕉激情| 一本综合久久免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 老鸭窝网址在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 97人妻天天添夜夜摸| avwww免费| 国产精品 国内视频| 国产精品欧美亚洲77777| 水蜜桃什么品种好| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久精品国产综合久久久| av中文乱码字幕在线| 日韩欧美免费精品| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产亚洲一区二区精品| 男女床上黄色一级片免费看| 99热网站在线观看| 国产精品国产高清国产av | 美女 人体艺术 gogo| 亚洲国产欧美网| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人系列免费观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品1区2区在线观看. | 国产高清视频在线播放一区| 亚洲专区中文字幕在线| 午夜福利视频在线观看免费| 一进一出好大好爽视频| 国产深夜福利视频在线观看| 大陆偷拍与自拍| 亚洲人成77777在线视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 成年女人毛片免费观看观看9 | 老熟妇仑乱视频hdxx| av在线播放免费不卡| 国产三级黄色录像| 国产熟女午夜一区二区三区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 91老司机精品| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 天天影视国产精品| 国产一区二区激情短视频| 1024视频免费在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久久人人人人人| 久久久精品免费免费高清| 成人免费观看视频高清| 日韩欧美免费精品| 成人黄色视频免费在线看| 国产麻豆69| 国产成人av激情在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜福利乱码中文字幕| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲熟女毛片儿| 国产精品免费一区二区三区在线 | 精品久久久久久久久久免费视频 | 国产片内射在线| av不卡在线播放| 国产在线一区二区三区精| 欧美激情 高清一区二区三区| 夜夜爽天天搞| 1024香蕉在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲五月婷婷丁香| 91老司机精品| 亚洲精品在线美女| 国产亚洲精品一区二区www | 9热在线视频观看99| av网站在线播放免费| 欧美久久黑人一区二区| 成人精品一区二区免费| 香蕉国产在线看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 男人操女人黄网站| 亚洲精品国产一区二区精华液| 91精品国产国语对白视频| 美女福利国产在线| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜福利乱码中文字幕| 最近最新免费中文字幕在线| 大码成人一级视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 中文字幕制服av| 亚洲,欧美精品.| 久久精品成人免费网站| 大片电影免费在线观看免费| 在线国产一区二区在线| 日韩中文字幕欧美一区二区| avwww免费| 日韩欧美免费精品| 久99久视频精品免费| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产乱人伦免费视频| 91字幕亚洲| 俄罗斯特黄特色一大片| 性少妇av在线| 我的亚洲天堂| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 免费不卡黄色视频| 一级毛片女人18水好多| 在线观看66精品国产| 一级a爱片免费观看的视频| videosex国产| 成年人黄色毛片网站| av天堂久久9| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品福利永久在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产成人精品在线电影| 99精品久久久久人妻精品| 一级毛片女人18水好多| 日韩中文字幕欧美一区二区| 在线免费观看的www视频| 日韩大码丰满熟妇| 久久ye,这里只有精品| 国产精品1区2区在线观看. | 成年人免费黄色播放视频| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲成人手机| 韩国精品一区二区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 午夜日韩欧美国产| 免费黄频网站在线观看国产| 又大又爽又粗| 怎么达到女性高潮| 国产日韩欧美亚洲二区| 天堂√8在线中文| 后天国语完整版免费观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲男人天堂网一区| 精品国产一区二区久久| 免费观看精品视频网站| 日韩免费av在线播放| 国产午夜精品久久久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| av不卡在线播放| 国产野战对白在线观看| 免费观看人在逋| 美女 人体艺术 gogo| 久久久国产一区二区| 成人18禁在线播放| 黑人猛操日本美女一级片| x7x7x7水蜜桃| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 中文亚洲av片在线观看爽 | 久久久久精品人妻al黑| 国产淫语在线视频| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲视频免费观看视频| 欧美在线黄色| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 在线观看免费视频网站a站| 精品国产美女av久久久久小说| av在线播放免费不卡| 久久狼人影院| 成年动漫av网址| 日韩三级视频一区二区三区| av有码第一页| 色94色欧美一区二区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲av欧美aⅴ国产| 男女之事视频高清在线观看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日韩三级视频一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人影院久久av| 日韩人妻精品一区2区三区| 1024视频免费在线观看| 香蕉国产在线看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久久视频综合| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 18禁国产床啪视频网站| 成人黄色视频免费在线看| 窝窝影院91人妻| 老司机靠b影院| 亚洲精品在线美女| 亚洲少妇的诱惑av| 久久狼人影院| 91精品三级在线观看| 在线看a的网站| 制服诱惑二区| 操出白浆在线播放| 91大片在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久99一区二区三区| 成人18禁在线播放| 亚洲全国av大片| 91av网站免费观看| aaaaa片日本免费| av不卡在线播放| 精品视频人人做人人爽| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品无人区乱码1区二区| 精品久久久久久久久久免费视频 | 免费观看a级毛片全部| 黑人操中国人逼视频| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲成a人片在线一区二区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| www.999成人在线观看| 成人国语在线视频| 亚洲五月色婷婷综合| 超碰97精品在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产视频一区二区在线看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲精品乱久久久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产男女超爽视频在线观看| 久9热在线精品视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产淫语在线视频| 午夜精品在线福利| 亚洲色图综合在线观看| www.自偷自拍.com| 啪啪无遮挡十八禁网站| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品免费一区二区三区在线 | 真人做人爱边吃奶动态| 国产高清激情床上av| 中文欧美无线码| 久久国产精品人妻蜜桃| 嫩草影视91久久| 露出奶头的视频| 在线观看日韩欧美| 欧美精品av麻豆av| 丰满饥渴人妻一区二区三| av有码第一页| 亚洲欧美激情综合另类| 水蜜桃什么品种好| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 午夜两性在线视频| 亚洲久久久国产精品| 久久九九热精品免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 人妻久久中文字幕网| 一级毛片高清免费大全| 老司机靠b影院| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 日韩欧美在线二视频 | 99国产精品一区二区蜜桃av | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 1024视频免费在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 精品高清国产在线一区| 丁香欧美五月| 天天操日日干夜夜撸| 一级毛片精品| 欧美亚洲日本最大视频资源| 女性生殖器流出的白浆| 免费不卡黄色视频| 国产av一区二区精品久久| 男女下面插进去视频免费观看| 精品久久久久久久久久免费视频 | 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产淫语在线视频| 99riav亚洲国产免费| 国产片内射在线| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 中文字幕人妻丝袜制服| 伦理电影免费视频| 三上悠亚av全集在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 美女午夜性视频免费| 国产黄色免费在线视频| 黄色a级毛片大全视频| 无遮挡黄片免费观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 99re6热这里在线精品视频| 国产97色在线日韩免费| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 男女下面插进去视频免费观看| 黑人猛操日本美女一级片| 成人av一区二区三区在线看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产国语露脸激情在线看| 成人永久免费在线观看视频| 国产野战对白在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 大片电影免费在线观看免费| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久久久久久久免费视频了| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 在线国产一区二区在线| 韩国精品一区二区三区| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美中文综合在线视频| 国产精品久久久久成人av| 丰满的人妻完整版| 一级作爱视频免费观看| 美女国产高潮福利片在线看| 99国产精品免费福利视频| 久久性视频一级片| 成人永久免费在线观看视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产成人精品久久二区二区91| 日日夜夜操网爽| 欧美av亚洲av综合av国产av| 三级毛片av免费| 999久久久精品免费观看国产| 男女之事视频高清在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品国产av在线观看| 极品人妻少妇av视频| 午夜激情av网站| 99精国产麻豆久久婷婷| 黄色a级毛片大全视频| 天堂√8在线中文| 亚洲成人手机| 国产成人精品无人区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 两性夫妻黄色片| 91字幕亚洲| 亚洲一区高清亚洲精品| 人妻久久中文字幕网| 欧美日韩视频精品一区| 久久国产精品影院| 日本a在线网址| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产不卡av网站在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产一区有黄有色的免费视频| 三级毛片av免费| 国产99白浆流出| 成人免费观看视频高清| 欧美久久黑人一区二区| 两个人免费观看高清视频| 大码成人一级视频| 色在线成人网| 亚洲免费av在线视频| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精华一区二区三区| 免费日韩欧美在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| svipshipincom国产片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美日韩成人在线一区二区| 超碰成人久久| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 脱女人内裤的视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美国产精品一级二级三级| 一级a爱片免费观看的视频| 黄色片一级片一级黄色片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 夜夜爽天天搞| 曰老女人黄片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 757午夜福利合集在线观看| 久久国产精品大桥未久av| 真人做人爱边吃奶动态| 色94色欧美一区二区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 青草久久国产| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲精品美女久久av网站| 日韩免费高清中文字幕av| 一级,二级,三级黄色视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产一卡二卡三卡精品| 真人做人爱边吃奶动态| 天天操日日干夜夜撸| 不卡一级毛片| 亚洲精品乱久久久久久| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲欧美一区二区三区久久| 午夜福利在线观看吧| 999精品在线视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久亚洲精品不卡| 久久 成人 亚洲| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 免费不卡黄色视频| 亚洲视频免费观看视频| 99久久99久久久精品蜜桃| av超薄肉色丝袜交足视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 丝袜人妻中文字幕| 曰老女人黄片| 久久亚洲精品不卡| 一夜夜www| 美国免费a级毛片| 亚洲人成77777在线视频| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日日夜夜操网爽| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美日韩精品网址| 国产国语露脸激情在线看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美久久黑人一区二区| 欧美日韩乱码在线| 妹子高潮喷水视频| 国产单亲对白刺激| 人妻一区二区av| 日韩免费高清中文字幕av| 桃红色精品国产亚洲av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产激情久久老熟女| 亚洲av美国av| 男男h啪啪无遮挡| 丝袜美腿诱惑在线| 老司机亚洲免费影院| 亚洲五月天丁香| 妹子高潮喷水视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 成人av一区二区三区在线看| 久9热在线精品视频| 好男人电影高清在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲美女黄片视频| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲伊人色综图| 亚洲免费av在线视频| 啦啦啦免费观看视频1| 久久热在线av| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 999久久久精品免费观看国产| 成年女人毛片免费观看观看9 | 中文欧美无线码| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 91av网站免费观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 99国产精品一区二区三区| 欧美日韩视频精品一区| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 一级毛片高清免费大全| 又大又爽又粗| 欧美av亚洲av综合av国产av| 脱女人内裤的视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 黄色视频,在线免费观看| 激情在线观看视频在线高清 | 国产成人免费无遮挡视频| 丝瓜视频免费看黄片| 日本wwww免费看| 国产男靠女视频免费网站| 中出人妻视频一区二区| 一区福利在线观看| av一本久久久久| 国产欧美日韩一区二区三| svipshipincom国产片| 午夜免费观看网址| 中文字幕av电影在线播放| 黄色视频,在线免费观看| 不卡av一区二区三区| cao死你这个sao货| 国产亚洲av高清不卡| 在线观看免费午夜福利视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 午夜福利乱码中文字幕| 精品久久久久久久久久免费视频 | 国产亚洲一区二区精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 午夜精品在线福利| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久久精品人妻al黑| 99国产精品99久久久久| 香蕉丝袜av| 国产精品免费视频内射| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 午夜免费成人在线视频| 一级片'在线观看视频| 1024香蕉在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲综合色网址| 亚洲av美国av| 久久久国产成人免费| 丁香欧美五月| 两个人看的免费小视频| 国产精品一区二区在线观看99| 美女国产高潮福利片在线看| 青草久久国产|