銀杏葉提取物對(duì)球囊損傷后大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生致再狹窄的影響

徐鵬，馬珂，岳永強(qiáng)

（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腔內(nèi)血管外科，河南 鄭州 450000）

頸動(dòng)脈狹窄是臨床常見(jiàn)的血管類疾病，多發(fā)于60 歲以上人群，以發(fā)病率高、并發(fā)癥多為主要特征，可誘發(fā)腦部缺血、局部神經(jīng)功能一過(guò)性喪失，嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)缺血性腦卒中，危及患者生命[1]。頸動(dòng)脈支架成形術(shù)（carotidarterystenting,CAS）是頸動(dòng)脈狹窄最常用的治療手段，可有效提升血流通暢度，維持大腦血液循環(huán)，但其術(shù)后易發(fā)生血管再狹窄，大大提高了致殘率及病死率[2]。近年來(lái)隨著藥物洗脫支架、激光內(nèi)照射等新興技術(shù)的應(yīng)用，一定程度上降低了CAS 術(shù)后短期再狹窄率，但其安全性及遠(yuǎn)期預(yù)后仍未得到驗(yàn)證，依然是臨床醫(yī)生面臨的重大難題之一。銀杏葉提取物是自中藥銀杏葉中提取的混合物，具有抗氧化、抗炎、抗血小板及神經(jīng)保護(hù)等藥理作用[3]。近年來(lái)有學(xué)者認(rèn)為[4]，銀杏葉提取物可減少小鼠主動(dòng)脈瓣組織鈣沉積，降低其鈣含量，從而減輕華法林誘導(dǎo)的主動(dòng)脈瓣鈣化。然而，目前關(guān)于其對(duì)CAS 術(shù)后再狹窄的緩解作用鮮有報(bào)道，且缺乏對(duì)應(yīng)的機(jī)制研究。大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷模型是模擬CAS 術(shù)后再狹窄的經(jīng)典模型，本研究通過(guò)建立該模型，觀察銀杏葉提取物對(duì)球囊損傷后大鼠頸動(dòng)脈再狹窄的影響，并探討其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

50 只SD 大鼠，SPF 級(jí)，雄性，8 周齡，體質(zhì)量（300±20）g，上海吉輝實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（滬）2017-0012。

1.2 藥物、主要試劑、儀器

銀杏葉提取物（質(zhì)量分?jǐn)?shù)98%）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路激活劑佛波酯（上海滬崢生物科技有限公司）；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、一氧化氮（NO）試劑盒（上海研生實(shí)業(yè)有限公司）；兔抗大鼠增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、NF-κB p65、p-NF-κB p65、胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK1/2）、p-ERK1/2 一抗[艾比瑪特醫(yī)藥科技（上海）有限公司]。GENios 酶標(biāo)儀（瑞士Tecan 公司）；SZ2 顯微鏡（日本Nikon株式會(huì)社）。

1.3 頸總動(dòng)脈球囊損傷模型的建立[5]

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后開(kāi)始復(fù)制模型，禁食禁水12 h，背部皮下注射低分子肝素預(yù)防急性血栓，12 h 后腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)，備皮消毒后沿頸部正中線切開(kāi)皮膚，分離左頸主動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈及頸內(nèi)動(dòng)脈，動(dòng)脈夾夾閉主動(dòng)脈近心端及頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，并于近心端做剪口，將2F球囊導(dǎo)管由剪口處插入頸動(dòng)脈3 cm，球囊給壓4ATM，緩慢泄壓抽動(dòng)導(dǎo)管，重復(fù)3次后撤出球囊，動(dòng)脈夾撤出，觀察到頸主動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈恢復(fù)搏動(dòng)則表明模型復(fù)制成功，后封閉切口。術(shù)后24 h 皮下注射低分子肝素，腹腔注射15 萬(wàn)u/kg青霉素防止感染，每日1次，連續(xù)3 d。

1.4 干預(yù)方式[6-7]

40 只大鼠復(fù)制模型，剔除中途死亡10 只，成功30 只，隨機(jī)數(shù)字法分為模型組、銀杏葉組、銀杏葉+佛波酯組，每組各10 只。另取10 只大鼠僅僅分離左頸外動(dòng)脈并結(jié)扎，設(shè)為假手術(shù)組。銀杏葉+佛波酯組灌胃銀杏葉提取物生理鹽水溶液（含銀杏葉提取物100 mg/kg），2 h 后皮下注射佛波酯（1 μg/只）；銀杏葉組灌胃銀杏葉提取物生理鹽水溶液（含銀杏葉提取物100 mg/kg），皮下注射等量生理鹽水；假手術(shù)組、模型組灌胃等量生理鹽水，皮下注射等量生理鹽水。每日1 次，干預(yù)14 d。干預(yù)期間測(cè)量體質(zhì)量并觀察大鼠飲水、精神狀態(tài)及毛發(fā)等一般情況。

1.5 組織取材

末次干預(yù)次日，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，采集腹主動(dòng)脈血，低溫離心機(jī)分離出血清，置于4 ℃冰箱冷藏保存；取血后脊椎脫臼處死大鼠，剝離左頸動(dòng)脈，切取球囊損傷段，分成2份，一份投入4%（φ）多聚甲醛中固定24 h，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋，病理切片機(jī)切為4 μm 厚度切片用于免疫組化染色及HE 染色，另一份置于-80 ℃冰箱冷凍保存，用于組織蛋白檢測(cè)。

1.6 檢測(cè)血清炎癥因子水平

取冷藏保存的腹主動(dòng)脈血清，經(jīng)ELISA 法檢測(cè)血清炎癥因子TNF-α、IL-6 水平，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作實(shí)驗(yàn)步驟，經(jīng)酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)570 nm位置吸光度（A）值，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算TNF-α、IL-6濃度。

1.7 檢測(cè)血清MCP-1、NO水平

取冷藏保存的腹主動(dòng)脈血清，經(jīng)ELISA 法檢測(cè)血清MCP-1、NO 水平，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作實(shí)驗(yàn)步驟，經(jīng)酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)450 nm 位置吸光度（A）值，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算MCP-1、NO濃度。

1.8 免疫組化法檢測(cè)頸動(dòng)脈血管PCNA陽(yáng)性表達(dá)

取頸主動(dòng)脈組織切片，脫蠟至水后滴加檸檬酸鹽緩沖液，微波加熱修復(fù)抗原，冷卻后PBS 沖洗，滴加3%H2O2避光保存20 min，PBS 沖洗，加入山羊血清常溫孵育20 min，吸棄血清，加入兔抗大鼠PCNA一抗（1∶300），移至黑暗濕盒內(nèi)冰箱冷藏過(guò)夜，PBS沖洗，加入二抗，37 ℃孵育1 h，PBS 沖洗后滴加DAB 顯色液，蒸餾水沖洗后，滴入中性樹(shù)膠封片，置于顯微鏡下觀察PCNA 陽(yáng)性表達(dá)。棕色細(xì)胞即為PCNA 陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率=棕色細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞總數(shù)×100%。隨機(jī)選取5 個(gè)不相鄰均勻視野計(jì)數(shù)，取其均值。

1.9 HE染色觀察頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生及管腔狹窄程度

取頸主動(dòng)脈組織切片，脫蠟至水后，蒸餾水沖洗，投至蘇木素溶液染色5 min，蒸餾水沖洗，滴加1%鹽酸酒精分化，碳酸氫鈉溶液漂洗，伊紅液二次染色2 min，常規(guī)脫水、透明后，中性樹(shù)脂封片，光鏡下觀察頸總動(dòng)脈組織橫切面病理變化并拍照記錄，經(jīng)Image J 軟件測(cè)量外膜內(nèi)區(qū)、內(nèi)膜內(nèi)區(qū)及管腔面積，計(jì)算內(nèi)膜增生率=（內(nèi)膜內(nèi)區(qū)面積-管腔面積）/（外膜內(nèi)區(qū)面積-內(nèi)膜內(nèi)區(qū)面積）×100%，管腔狹窄指數(shù)=管腔面積/內(nèi)膜內(nèi)區(qū)面積。

1.10 Western blot法檢測(cè)頸總動(dòng)脈組織NF-κB p65、p-NF-κB p65、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)

取冷凍保存的頸總動(dòng)脈組織，剪碎后放入研磨器充分研磨，PBS勻漿，加入預(yù)冷RIPA裂解液，注入離心管內(nèi)，低溫離心10 min（10 000 r/min，r=15 cm），取其上清，BCA 法測(cè)定總蛋白并定量。取40 μg 待測(cè)樣本，混合5×SDS 上樣緩沖液，金屬浴沸騰變性蛋白，電泳分離后轉(zhuǎn)至PVDF 膜，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，加入兔抗大鼠NF-κB p65、p-NF-κB p65、ERK1/2、p-ERK1/2 一抗（1∶500），4 ℃冰箱冷藏過(guò)夜，TBST 洗膜，加入二抗，室溫孵育2 h，TBST 洗膜，混合ECL 發(fā)光液，曝光、顯影，經(jīng)成像分析儀掃描并分析蛋白條帶灰度值，以GAPDH 為內(nèi)參蛋白，分析NF-κB p65、p-NF-κB p65、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)水平，并計(jì)算p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，多樣本資料比較采用單因素方差分析，LSD-t進(jìn)行兩兩比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況

假手術(shù)組大鼠體質(zhì)量穩(wěn)定，飲水量正常，精神佳且毛發(fā)光亮；模型組大鼠體質(zhì)量明顯降低，飲水量減少，精神不佳且毛發(fā)雜亂無(wú)光；銀杏葉+佛波酯組大鼠體質(zhì)量降低，飲水量正常，精神一般，毛發(fā)整齊暗淡，銀杏葉組大鼠一般情況較銀杏葉+佛波酯組改善更佳。

2.2 大鼠血清TNF-α、IL-6水平

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清TNF-α、IL-6水平升高（P<0.05）；與模型組比較，銀杏葉組大鼠血清TNF-α、IL-6水平降低（P<0.05）；與銀杏葉組比較，銀杏葉+佛波酯組大鼠血清TNF-α、IL-6 水平升高（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清TNF-α、IL-6水平比較Table 1 Comparison of serum TNF-α and IL-6 levels of rats in each group(±s,n=10)ρ/（ng·L-1）

表1 各組大鼠血清TNF-α、IL-6水平比較Table 1 Comparison of serum TNF-α and IL-6 levels of rats in each group(±s,n=10)ρ/（ng·L-1）

與假手術(shù)組比較：*P<0.05；與模型組比較：#P<0.05；與銀杏葉組比較：@P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組銀杏葉組銀杏葉+佛波酯組TNF-α 66.77±8.01 223.56±23.35*94.04±11.06#147.61±12.77@IL-6 54.42±6.38 168.46±18.17*73.76±8.06#131.26±17.27@

2.3 大鼠血清MCP-1、NO水平

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清MCP-1 水平升高，NO 水平降低（P<0.05）；與模型組比較，銀杏葉組大鼠血清MCP-1 水平降低，NO 水平升高（P<0.05）；與銀杏葉組比較，銀杏葉+佛波酯組大鼠血清MCP-1水平升高，NO水平降低（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清MCP-1、NO水平比較Table 2 Comparison of serum MCP-1 and NO levels of rats in each group(±s,n=10)

表2 各組大鼠血清MCP-1、NO水平比較Table 2 Comparison of serum MCP-1 and NO levels of rats in each group(±s,n=10)

與假手術(shù)組比較：*P<0.05；與模型組比較：#P<0.05；與銀杏葉組比較：@P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組銀杏葉組銀杏葉+佛波酯組ρ（MCP-1）/（pg·mL-1）41.57±5.58 116.55±12.56*47.57±5.39#70.07±8.85@c（NO）/（μmol·L-1）23.45±2.42 5.17±0.49*19.60±1.34#10.30±1.24@

2.4 大鼠頸動(dòng)脈血管PCNA陽(yáng)性率

免疫組化染色顯示，假手術(shù)組PCNA表達(dá)較少，模型組PCNA表達(dá)顯著增加，相較于模型組，銀杏葉組及銀杏葉+佛波酯組PCNA 表達(dá)有所減少。假手術(shù)組、模型組、銀杏葉組、銀杏葉+佛波酯組頸動(dòng)脈血管PCNA 陽(yáng)性率分別為（6.81±0.84）%、（58.36±7.49）%、（20.99±2.43）%、（31.78±4.18）%。與假手術(shù)組比較，模型組PCNA 陽(yáng)性率升高（P<0.05）；與模型組比較，銀杏葉組PCNA 陽(yáng)性率降低（P<0.05）；與銀杏葉組比較，銀杏葉+佛波酯組大鼠血清PCNA陽(yáng)性率升高（P<0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 頸動(dòng)脈血管PCNA陽(yáng)性細(xì)胞（免疫組化染色，400×）Figure 1 PCNA-positive cells in carotid artery（immunohistochemical staining，400×）

2.5 大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生率及管腔狹窄指數(shù)

假手術(shù)組頸總動(dòng)脈血管管壁結(jié)構(gòu)清晰、完整，未觀察到增生及管腔狹窄；模型組內(nèi)彈力板破裂，從正常波浪狀轉(zhuǎn)變?yōu)槠教篃o(wú)彈性，內(nèi)膜表面有少量紅細(xì)胞，中膜層平滑肌細(xì)胞排列紊亂，外膜層結(jié)締組織排列松散，管腔面積縮??；銀杏葉組、銀杏葉+佛波酯組上述變化較模型組有所改善，其中銀杏葉組改善程度更為明顯。見(jiàn)圖2。與假手術(shù)組比較，模型組頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生率升高，管腔狹窄指數(shù)降低（P<0.05）；與模型組比較，銀杏葉組頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生率降低，管腔狹窄指數(shù)升高（P<0.05）；與銀杏葉組比較，銀杏葉+佛波酯組頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生率升高，管腔狹窄指數(shù)降低（P<0.05）。見(jiàn)表3。

圖2 頸總動(dòng)脈內(nèi)膜及管腔（HE染色，40×）Figure 2 Common carotid artery intima and lumen（HE staining,40×）

表3 各組大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生率及管腔狹窄指數(shù)比較Table 3 Comparison of intimal hyperplasia rate and lumen stenosis index of common carotid artery in rats of each group(±s,n=10)

表3 各組大鼠頸總動(dòng)脈內(nèi)膜增生率及管腔狹窄指數(shù)比較Table 3 Comparison of intimal hyperplasia rate and lumen stenosis index of common carotid artery in rats of each group(±s,n=10)

與假手術(shù)組比較：*P<0.05；與模型組比較：#P<0.05；與銀杏葉組比較：@P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組銀杏葉組銀杏葉+佛波酯組內(nèi)膜增生率/%6.48±0.75 139.20±16.53*15.05±1.37#42.41±5.80@管腔狹窄指數(shù)0.90±0.06 0.43±0.05*0.75±0.09#0.64±0.07@

2.6 大鼠頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2的表達(dá)

與假手術(shù)組比較，模型組頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2 升高（P<0.05）；與模型組比較，銀杏葉組頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2 降低（P<0.05）；與銀杏葉組比較，銀杏葉+佛波酯組頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2升高（P<0.05）。見(jiàn)表4，圖3。

圖3 頸總動(dòng)脈組織NF-κB p65、p-NF-κB p65、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)量Figure 3 Expression of NF-κB p65, p-NF-κB p65,ERK1/2 and p-ERK1/2 in common carotid artery tissue

表4 各組大鼠頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2比較Table 4 Comparison of p-NF-κB p65/NF-κB p65 and p-ERK1/2/ERK1/2 in common carotid artery tissue of rats in each group(±s,n=10)

表4 各組大鼠頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2比較Table 4 Comparison of p-NF-κB p65/NF-κB p65 and p-ERK1/2/ERK1/2 in common carotid artery tissue of rats in each group(±s,n=10)

與假手術(shù)組比較：*P<0.05；與模型組比較：#P<0.05；與銀杏葉組比較：@P<0.05。

組別假手術(shù)組模型組銀杏葉組銀杏葉+佛波酯組p-NF-κB p65/NF-κB p65 0.10±0.01 0.88±0.09*0.22±0.02#0.30±0.04@p-ERK1/2/ERK1/2 0.11±0.01 0.81±0.10*0.30±0.03#0.44±0.05@

3 討論

頸動(dòng)脈狹窄是由頸動(dòng)脈粥樣斑塊造成頸動(dòng)脈管腔狹窄，從而引發(fā)的腦缺血疾病，常發(fā)于頸內(nèi)動(dòng)脈起始段及頸總動(dòng)脈分叉，發(fā)病始于血管內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞異常聚集，膠原、脂質(zhì)及彈力纖維等基質(zhì)增加，平滑肌細(xì)胞隨之增生，動(dòng)脈逐漸鈣化，彈性減低、管腔變窄，從而阻礙血液流動(dòng)[8]。CAS 治療可通過(guò)機(jī)械擠壓擴(kuò)大動(dòng)脈粥樣硬化狹窄段，撕裂粥樣硬化斑塊，重塑為新的平滑內(nèi)腔，其過(guò)程可損傷動(dòng)脈內(nèi)壁，術(shù)后再狹窄則是血管對(duì)內(nèi)壁損傷過(guò)度修復(fù)的結(jié)果。高齡、合并高血壓、合并高血脂、合并糖尿病及術(shù)前狹窄程度高是CAS 術(shù)后再狹窄的主要危險(xiǎn)因素，血管內(nèi)膜異常增生被認(rèn)為是其發(fā)生的主要病理機(jī)制[9]。動(dòng)脈內(nèi)壁損傷后平滑肌細(xì)胞亦大量增殖、分裂，細(xì)胞外基質(zhì)隨之合成積聚，增殖抑制因子合成減少，內(nèi)皮細(xì)胞受損后釋放大量炎癥因子，繼發(fā)反應(yīng)進(jìn)一步促進(jìn)平滑肌細(xì)胞異常增生并遷移至受損部位，動(dòng)脈血管內(nèi)膜代償性增粗重塑，管腔比例及形狀改變，導(dǎo)致再狹窄發(fā)生[10]。因此，抑制血管內(nèi)膜異常增生是治療CAS術(shù)后再狹窄的關(guān)鍵。

MCP-1 是由單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌一種趨化因子，具有雙向調(diào)節(jié)作用，可在機(jī)體損傷后與血管受體結(jié)合，發(fā)揮其抵御輕度損傷的作用，但其亦可加劇動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖及內(nèi)膜組織增生，其水平升高代表動(dòng)脈粥樣硬化加劇及CAS 術(shù)后再狹窄風(fēng)險(xiǎn)增加[11]。NO 是內(nèi)皮細(xì)胞分泌的一種抑制增生因子，可升高細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷水平，從而抑制細(xì)胞增殖[12]。PCNA 是細(xì)胞增殖所需的重要核蛋白，其表達(dá)水平與DNA復(fù)制效率呈正相關(guān)，可用于判斷細(xì)胞增殖活性高低[13]。中醫(yī)認(rèn)為CAS 術(shù)后再狹窄是一種醫(yī)源性疾病，患者正氣虧虛、腑臟衰退，以致瘀血阻滯、血脈不通，CAS 術(shù)乃破血逐瘀之法，雖消瘀通痹、疏通脈絡(luò)，但過(guò)度擴(kuò)張亦損脈絡(luò)，氣血未得正常灌注，瘀血內(nèi)阻，血瘀之證復(fù)始，故應(yīng)以益氣活血、化瘀通絡(luò)為主[14]。銀杏葉取自銀杏科植物銀杏干燥葉，可活血、止痛、化瘀，含有銀杏黃酮甙及銀杏苦內(nèi)酯，二者可協(xié)同消除血管壁沉積，增加血流量，抑制紅細(xì)胞聚集凝固，從而保護(hù)心腦血管[15]。姚海艇等[16]研究認(rèn)為，銀杏葉提取物聯(lián)合辛伐他汀可有效改善血脂代謝異常，縮小粥樣硬化斑塊，從而對(duì)頸動(dòng)脈狹窄產(chǎn)生治療作用，提示銀杏葉提取物或可作為動(dòng)脈粥樣硬化輔助治療推廣藥物。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，銀杏葉組血清TNF-α、IL-6、MCP-1 水平，PCNA 陽(yáng)性率，內(nèi)膜增生率降低，血清NO 水平、管腔狹窄指數(shù)升高，提示銀杏葉提取物可抑制炎癥反應(yīng)，緩解動(dòng)脈粥樣硬化，抑制內(nèi)膜增生，治療血管再狹窄。

NF-κB 是機(jī)體內(nèi)一種多功能性轉(zhuǎn)錄因子，可與不同的基因啟動(dòng)子特異性結(jié)合，調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)，在細(xì)胞增殖、分化、遷移及炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其中NF-κB p65、ERK1/2 是NF-κB 通路重要調(diào)控蛋白。靜息狀態(tài)下，NF-κB p65與另一亞基p50及其抑制蛋白結(jié)合為聚合體，在細(xì)胞質(zhì)中保持非活性狀態(tài)，當(dāng)其被上游細(xì)胞因子刺激后，NF-κB p65 活化解離并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核，級(jí)聯(lián)反應(yīng)信號(hào)刺激下游ERK1/2 磷酸化，啟動(dòng)多個(gè)促增殖因子轉(zhuǎn)錄，加劇內(nèi)膜增生[17]。王芳等[18]研究認(rèn)為，抑制NF-κB/ERK 通路可降低內(nèi)膜組織增殖及侵襲能力，從而抑制子宮內(nèi)膜異位癥大鼠病灶生長(zhǎng)及腺體增生。本研究結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組頸總動(dòng)脈組織p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-ERK1/2/ERK1/2 升高，經(jīng)銀杏葉提取物干預(yù)后均降低，且在銀杏葉提取物基礎(chǔ)上增用NF-κB 通路激活劑佛波酯可減弱銀杏葉提取物對(duì)大鼠球囊損傷后頸動(dòng)脈再狹窄的治療作用，提示銀杏葉提取物可能通過(guò)介導(dǎo)該通路治療大鼠球囊損傷后頸動(dòng)脈再狹窄。

綜上所述，銀杏葉提取物可抑制炎癥反應(yīng)，緩解動(dòng)脈粥樣硬化，抑制內(nèi)膜增生，治療球囊損傷后頸動(dòng)脈再狹窄，其作用機(jī)制可能與抑制NF-κB/ERK信號(hào)通路活性有關(guān)，為臨床該藥物的使用提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。由于中藥提取物具有多靶點(diǎn)、多機(jī)制的特點(diǎn)，下一步需持續(xù)研究銀杏葉提取物治療球囊損傷后頸動(dòng)脈再狹窄的可能機(jī)制，為臨床靶向藥物的開(kāi)發(fā)提供更多參考靶點(diǎn)。