新型冠狀病毒核酸檢測分析

付永偉

（吉林市疾病預防控制中心，吉林 吉林 132000）

0 引言

由于新型冠狀病毒肺炎具備極大的傳染力和感染力，自從進入我國以來，快速造成了大范圍內(nèi)的傳播感染感染人數(shù)的增加，導致眾多的居民申訴了生命安全威脅當中，為了加強對于民眾生命安全保護防衛(wèi)工作進行，我國在新型冠狀病毒肺炎防治過程當中積極應用相關(guān)政策，通過減少人口流動速度和人口流動范圍，將病毒感染控制在較小區(qū)域內(nèi)，盡最大努力控制新型冠狀病毒的傳染。我國在新型冠狀病毒肺炎呈現(xiàn)流行趨勢的過程中及時進行政策調(diào)整，通過合理的手段和規(guī)范，良好地控制住了疫情的發(fā)展，且對于當前仍然存在的出現(xiàn)病例的情況進行了應對措施，由于新型冠狀病毒傳染發(fā)展過程當中呈現(xiàn)出了進化突變態(tài)勢，由此衍生出了德爾塔毒株和奧密克戎變異株，具備更強的感染力和殺傷力，容易造成感染者嚴重的后遺癥影響，甚至因此而死亡。目前國內(nèi)仍然保持著對于公共衛(wèi)生安全的警惕性，其中，核酸檢測就是重要的環(huán)節(jié)。通過觀察核酸檢測不難發(fā)現(xiàn)，患者往往需要多次檢測才能檢測陽性結(jié)果，這對于效率和安全問題都產(chǎn)生了比較大的影響，因此，本文將進行核酸檢測分析和研究對比，并主要論述假陰性、假陽性的影響因素，同時做出一些針對性的解讀，提出提高核酸檢測結(jié)果準確性的操作方法和管控方法，以期為當前的核酸檢測中保障檢測效率和效果提供參考價值。

1 新型冠狀病毒核酸檢測

1.1 COVID-19 病例暴露后核酸檢測陽性率

傳染患者在14天后才會逐漸暴發(fā)出相關(guān)的病癥，并且此時可以有效檢測到患者體內(nèi)的核酸陽性狀況，因此在進行病例核酸檢測過程中需要觀察病例暴露后，確診病例和無癥狀感染者的情況，對他們暴露后的核酸檢測陽性率進行對比可以發(fā)現(xiàn)，普遍情況下，隨著時間的增長，陽性率相對來說都是比較明顯的下降[1]。

1.2 COVID-19病例暴露后核酸檢測循環(huán)閾值（Ct值）

從表格中的數(shù)據(jù)可以看出COVID-19病例暴露后核酸檢測循環(huán)閾值比較，此外，在針對患者檢測陽性的時間分析中，普遍發(fā)現(xiàn)確診病例和無癥狀感染者的陽性時間沒有較大差異。在無癥狀感染者核酸病毒監(jiān)測過程中較難及時有效檢測出相關(guān)的患病情況。

2 影響假陰性的主要因素分析

2.1 病原學因素

我國國內(nèi)通過控制傳播感染范圍，盡量減少大量人群聚集，加強病毒攜帶者核酸檢測等相關(guān)措施對病毒實現(xiàn)了比較良好的控制，同時通過開展全面的核酸檢測、新型冠狀疫苗注射工作提高了全體人民對于新冠肺炎病毒和疫情的防控能力。但是，新冠肺炎病毒的結(jié)構(gòu)不斷變化，變異，導致病毒的傳染力和破壞力更強，對人類的生命健康造成更大的威脅。因此需要不斷研究和完善相應的病毒檢測方法，針對病毒進行有效的預防控制。目前核酸檢測作為有效檢查并了解病毒感染概率的重要方法，在使用過程中仍然存在一些問題，檢測反應速度較慢、檢測效率較差等問題，在核酸檢測的試劑上還有待加強，提高檢測的效率和質(zhì)量。

表1 確診病例組與無癥狀感染者組暴露后核酸檢測Ct值比較（）

2.2 標本因素

采集標本的時間、類型和質(zhì)量等，實際上都會影響到檢測的結(jié)果。從客觀結(jié)果上來看，如果采集的標本在時間和類型上有不適當之處，例如由于潛伏期原因而導致的所采集的標本并非最佳的檢測時期，就很容易導致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差和問題。而在目前的痰液、鼻咽拭子、口咽拭子這三種類型的標本中對比，隨著時間的不同，它們的檢測結(jié)果也會出現(xiàn)問題差異。此外是標本質(zhì)量本身的問題，若標本的病毒含量能夠達到核酸檢測下限，能夠取得良好的檢測效果，但反之則很容易導致檢測結(jié)果出現(xiàn)差異，這也是當前的主要問題之一，操作的不規(guī)范、保存問題或是由于就診者本身具有其他疾病等因素，都會導致標本的質(zhì)量比較低。因此，一方面，采集標本本身就要注意規(guī)范性，然后通過合理適當?shù)氖侄蝸肀４鏄吮?，盡快進行檢測；另一方面，要注意運輸問題，避免在運輸?shù)倪^程中由于溫度等原因?qū)е聵吮举|(zhì)量下降，影響檢測結(jié)果，采集的標本應當盡快進行檢測，并且注意保持一定的溫度。

2.3 人員因素

目前主要采用的核酸檢測樣本采集方法。有偶像呼吸道樣本，血液樣本，糞便樣本等等吸收下呼吸道樣本是開展核酸檢測的首要選擇，早期新型冠狀病毒感染者癥狀為無痰、干咳、少痰等等反應，通過檢查下呼吸道樣本可以較為準確檢測到患者核酸樣本當中的相關(guān)病毒數(shù)據(jù)。在采集過程當中，醫(yī)護人員需要采集同一患者不同部位的多個樣本，從而提高樣本檢測的精準性。注意在樣本采集過程中，如果采集部位不當、采集深度不足、采集力度不佳，都有可能造成樣本材料不合格。在核酸檢測的過程中需要大量的檢測人員負責對廣大民眾進行檢測樣本收集，將檢測完畢的樣本進行分類保管，快速送至檢驗場所進行檢查，由于我國人口眾多，在人員的作業(yè)收集檢測過程中需要花費大量的人力，人力是開展病毒檢測和分析活動的重要力量，但是人力有限，在人力使用活動過程當中容易受到個人操作方法和操作水平的影響，從而導致最終檢測結(jié)果不準確，比如在鼻咽拭子樣本采集過程當中，受到樣本采集部位選擇樣本采集深度和力度樣本是指停留時間的因素影響，最終檢測結(jié)果的準確性將會發(fā)生相應變化，在樣本采集過程當中由于樣本采集部位較為敏感，容易引發(fā)患者出現(xiàn)咳嗽和噴嚏現(xiàn)象，從而導致局部出現(xiàn)較高濃度的飛沫，造成病毒感染隱患。為保證檢測結(jié)果的準確性，在檢測過程當中積極對于檢測人員來說，需要進行專業(yè)的科學的培訓過程，個人基礎(chǔ)能力達標，具備基本的知識儲備和經(jīng)驗等，通過加強對于檢測人員的培訓教育，引導檢測人員了解規(guī)范合理的檢測方法，能夠勝任檢測中的操作要求，且規(guī)范自身的操作行為。在整個提取過程中需要注意多個事項，檢測人員應當留意這些問題，積極根據(jù)檢測中標本出現(xiàn)的問題規(guī)范自己的操作，避免由于人員能力等原因?qū)е绿崛?、檢測過程中的誤差。

2.4 設(shè)備因素

在檢測過程中會使用到相關(guān)的設(shè)備儀器，如冰箱、離心機等，檢測設(shè)備使用操作和日常維護都會影響到最終檢測結(jié)果，如果在檢測設(shè)備使用過程當中不注意消毒和清潔，會使細菌侵入檢測設(shè)備當中，污染檢測樣本，不利于檢測結(jié)果精準測驗。另外，設(shè)備、儀器的功能對于標本保存、提取和檢測過程都有著直接的影響，如冰箱就會對標本的質(zhì)量產(chǎn)生影響，溫度升高會導致病毒的繁殖性增強，病毒會出現(xiàn)大量繁殖現(xiàn)象，污染影響內(nèi)部環(huán)境；溫度過低會導致病毒活性增強，無法快速有效檢測相關(guān)病毒含量。因此，就要做好新冠疫情檢測設(shè)備的維護，整套檢測設(shè)備以及具體的儀器都需要非常細致和科學的維護，定期對設(shè)備的功能進行檢查，避免設(shè)備出現(xiàn)問題。

2.5 試劑因素

COVID-19新型冠狀病毒疫情屬于全球范圍內(nèi)的突發(fā)性公共衛(wèi)生事件，在一出現(xiàn)后迅速造成了大范圍的感染，未有效預防相關(guān)病毒，并快速針對病毒感染者進行治療，各國學者紛紛開始加強對于新型冠狀病毒肺炎核酸檢測的研究。目前各國學者在第一時間內(nèi)對病毒核酸檢測進行研究，提出了能夠有效檢測病毒的核酸檢測試劑，但是由于時間有限，核酸檢測試劑并未能進行大范圍內(nèi)的臨床試驗和長期的研究評估，在檢測過程中可能出現(xiàn)部分個體由于擴增區(qū)而導致假陽性或假陰性的可能。目前我國擁有7種以上的核酸檢測試劑進行廣泛使用，不同的核酸檢測試劑在靈敏性和穩(wěn)定性方面具備一定的差異，核酸檢測試劑的檢測結(jié)果也存在一定的差異。另外，在提取方面，由于提取的方法實際上在當前還是有多種不同的，而試劑的品牌也有了不同，則就需要選擇適當?shù)奶崛≡噭?，并且保證提取的過程中規(guī)范科學操作，如果這些方面中出現(xiàn)問題，自然會影響核酸檢測的結(jié)果[2-3]；在擴增方面，則由于不同廠商所研發(fā)的試劑盒問題，需要注意當出現(xiàn)異常結(jié)果的時候，要及時重新采集樣本并檢測，根據(jù)說明書進行規(guī)范性的檢測。

3 影響假陽性的主要因素

3.1 污染因素

核酸污染的問題，實際上將會涉及到提取、上級擴增全程中的污染問題，并非某個特定環(huán)節(jié)的，而這一問題所引起的檢測結(jié)果問題相對也比較集中，所需要規(guī)范的行為也比較統(tǒng)一，因此應當單獨列為一項影響因素。提取前以及提取中的污染，例如交叉污染，會對樣本等本身產(chǎn)生比較大的影響，導致樣本的質(zhì)量出現(xiàn)問題，進而影響后續(xù)的一系列操作過程，是根本性的，同時也是相對容易解決的，因此針對各個環(huán)節(jié)階段中的污染問題要進行合理的防控，將污染因素控制好。首先，實驗室必須將各個區(qū)域獨立開，并且保障檢測、操作人員之間沒有互相進入?yún)^(qū)域，即避免由于人員等問題導致區(qū)域之間產(chǎn)生流通而出現(xiàn)的最后的污染問題[4]；其次，則是要合理使用設(shè)備儀器，尤其注意清潔等問題，根據(jù)操作的方法和注意事項等及時對設(shè)備進行管理，避免出現(xiàn)交叉污染的問題[5]；最后，還要注意在操作過程中如果發(fā)現(xiàn)了已存在的污染現(xiàn)象，應當及時進行應對措施，對針對性的環(huán)節(jié)進行合理的檢查。

3.2 非特異性擴增因素

由于引物設(shè)計不夠特異，也容易在整個檢測過程中導致問題，進而導致最后的假陽性。這一問題的關(guān)鍵點在于會對S型擴增曲線產(chǎn)生影響，導致最后的檢測結(jié)果和數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差，進而導致更多的檢測質(zhì)量問題和判斷問題。因此在進行核酸檢測試劑應用過程當中，需要選擇適當?shù)膭┬筒∑?，要根?jù)相應檢測需求設(shè)置擴增條件，最好采用密閉性上架的8連管上機，有效避免而在。擴增過程中造成大量樣本污染，在實驗結(jié)束以后需要應用75%含量的酒精清洗核酸檢測盒，保障檢測器具的安全性和衛(wèi)生性。

3.3 判斷失誤因素

由于需要對結(jié)果進行判斷和解讀，就導致了在判斷上也可能會出現(xiàn)失誤，進而影響最終的結(jié)果確定，這一問題是主觀上的因素，因此也是容易解決的，在檢測結(jié)果上，需要提高判斷能力，對結(jié)果進行合理的調(diào)整和對比，從而更準確地對結(jié)果曲線進行合理判斷，避免由于人為的判讀失誤原因而導致結(jié)果問題[6-7]。另外在檢測結(jié)束以后需要開展復查工作，對檢測人員進行重新采樣或者更換不同品牌的試劑盒進行檢測，通過復查檢測得出明確的檢查樣本，有效排除因為江陰新因素存在而出現(xiàn)的檢測結(jié)果誤差。

4 結(jié)論

綜上分析，從整個新型冠狀病毒核酸檢測以及假陰性、假陽性的影響因素來看，在當前的核酸檢測中，仍然由于主觀以及客觀的許多因素而存在著對于檢測結(jié)果的影響，包括人員自身的操作、判斷等，以及對于客觀環(huán)境的控制和檢測，因此，要做出針對性的提高和管控，盡最大努力來保障核酸檢測的結(jié)果[8-10]。核酸檢測技術(shù)對于新型冠狀病毒的防控具備巨大的意義，本文初步探討分析了在病毒核酸檢測過程中的關(guān)鍵要點和影響因素，通過不斷完善新型冠狀病毒的檢測，科學監(jiān)督和檢測合理程度，提高新型冠狀病毒核酸檢測準確性，有助于疫情的防控監(jiān)測。在整個檢測過程中，需要更加注重對每個環(huán)節(jié)的規(guī)范性，正確采集標本，避免采集、運輸過程中的問題影響檢測結(jié)果，同時還要提高檢測本身的能力，規(guī)范實驗室人員的操作，保證檢測結(jié)果的準確性，以此來保障在當前社會中的核酸檢測能夠普遍產(chǎn)生作用，為保障公共衛(wèi)生安全提供幫助。