長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00671對(duì)肝細(xì)胞肝癌生物學(xué)行為的影響及機(jī)制

郭 濤，宋 寧，孫玉琪，田佳琪，唐 婕，孫榕婍，蔣英英,

1.濰坊醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，山東 濰坊 261053；2.濰坊醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261053；3.濰坊醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，山東 濰坊 261053；4.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科，山東 濰坊 261035

肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球常見的腫瘤，也是主要的致死性腫瘤之一［1］。隨著臨床診療技術(shù)水平的不斷提高，HCC的治療和管理取得了顯著進(jìn)展，但其高復(fù)發(fā)率和低生存率的現(xiàn)狀依然如故，且新增病例仍呈上升趨勢(shì)［2］。對(duì)于HCC的病因，目前已知其與多種因素有關(guān)，包括乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）感染、非乙醇性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease，NAFLD）、酗酒等引起的肝纖維化以及吸煙、黃曲霉素接觸等飲食環(huán)境因素［3］。

另一方面，隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的深入，HCC進(jìn)展過(guò)程中越來(lái)越多的分子失調(diào)事件被證實(shí)，從蛋白到核酸再到小分子化合物。這些物質(zhì)的失調(diào)往往與HCC的發(fā)生、發(fā)展存在密不可分的關(guān)系，有些甚至直接參與HCC發(fā)生、發(fā)展的始終［4］。近年來(lái)，長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）與腫瘤的關(guān)系逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。LncRNA是指長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的鏈狀RNA分子，其由基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生，但并不具備蛋白翻譯潛能［5］。在HCC中，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種lncRNA失調(diào)表達(dá)并行使多種分子功能來(lái)調(diào)控HCC的發(fā)生、發(fā)展［6］。其作用涉及基因生命周期的各個(gè)方面，包括轉(zhuǎn)錄、剪接、RNA衰變和翻譯；同時(shí)參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡、血管生成和耐藥性調(diào)節(jié)［7］。

有研究報(bào)道，作為一種功能性的lncRNA，長(zhǎng)基因間非蛋白編碼RNA 671（long intergenic non-protein coding RNA 671，LINC00671）在腫瘤中具有抑癌潛能，但其對(duì)HCC的具體影響和作用機(jī)制尚未見報(bào)道。本項(xiàng)目擬探討LINC00671對(duì)HCC體外腫瘤生物學(xué)行為的影響并初步了解其作用機(jī)制，旨在為HCC患者尋找新的治療靶點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

HCC相關(guān)細(xì)胞系購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)/中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，10%的胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，細(xì)胞培養(yǎng)箱和LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher公司，反義寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASO）、過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及LINC00671探針均購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公司，碘化丙啶購(gòu)自國(guó)藥（上海）國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生有限公司，聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜和transwell小室購(gòu)自美國(guó)Millipore公司，ECM550基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)Chemicon公司，細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）購(gòu)自日本Dojindo公司。

所有細(xì)胞均采用高糖DMEM加10%的胎牛血清組成的完全培養(yǎng)基，置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑采用無(wú)血清DMEM混合LipofectamineTM2000進(jìn)行ASO及LINC00671過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。

1.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）

使用TRIzol試劑（美國(guó)ThermoFisher公司）進(jìn)行細(xì)胞總RNA分離提取，并用反轉(zhuǎn)錄試劑盒［寶生物工程（大連）有限公司］在體外進(jìn)行R N A 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將R N A 反轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR反應(yīng)采用2 μL反應(yīng)模板的20 μL反應(yīng)體系，預(yù)變性參數(shù)：95 ℃、5 min；循環(huán)參數(shù)：94 ℃變性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，并進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。整個(gè)反應(yīng)在Bio-rad 3.0 PCR儀上進(jìn)行，引物如下：LINC00671上游引物5'-CCTGGGCTTCCTGCTGAGAC-3'，LINC00671下游引物5'-CGTCCACACCTCTG CTCCTTC -3 '；c-myc上游引物5'-CAAGAGGCGAACACACAACGTCT-3'，c-myc下游引物5'-AACTGTTCTCGTCGTTT CCGCAA-3'；選擇GAPDH為內(nèi)參，其上游引物5'-GGTATCGTGGAAGGACTCAT-3'，下游引物為5'-CCTTGCCCACAGCCTTG-3'；實(shí)驗(yàn)結(jié)果取2-ΔΔCT進(jìn)行比較。

1.3 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)

將提取的細(xì)胞總蛋白加入蛋白緩沖液（美國(guó)Sigma-Aldrich公司），95 ℃變性10 min。蛋白樣品用10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離，并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。加入4 ℃一抗（c-myc、GAPDH為1∶2000，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）溫育過(guò)夜，加入對(duì)應(yīng)二抗（1∶2000，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）。暗室中用ECL發(fā)光液（美國(guó)MedChemExpress公司）顯影條帶并壓片曝光。

1.4 RNA熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）

細(xì)胞在預(yù)雜交緩沖液處理后，雜交緩沖液中稀釋LINC00671探針混合，并在37 ℃下培養(yǎng)溫育過(guò)夜。DNA在密封前用DAPI染色10 min。在相同的光學(xué)強(qiáng)度條件下，用激光共聚焦成像系統(tǒng)（日本Olympus公司）觀察LINC00671亞細(xì)胞定位。

1.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

采用CCK-8轉(zhuǎn)染細(xì)胞并接種在24孔板中，每孔2×104～5×104個(gè)細(xì)胞，常規(guī)環(huán)境中培養(yǎng)，在0、24、48和72 h于450 nm波長(zhǎng)的D值下評(píng)估細(xì)胞增殖情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.6 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)

對(duì)于凋亡實(shí)驗(yàn)，選擇流式細(xì)胞術(shù)分析進(jìn)行定量比較。細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理后，利用膜聯(lián)蛋白Ⅴ和碘化丙啶對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行30 min的雙重染色。收集培養(yǎng)物，并通過(guò)配備CellQuest 3.3計(jì)算機(jī)程序的流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞凋亡情況，凋亡率以早期凋亡加晚期凋亡計(jì)算。

1.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞轉(zhuǎn)染處理后，通過(guò)在培養(yǎng)板（1×106）中使用100 μL塑料移液管尖端進(jìn)行垂直劃痕。劃痕后，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，觀察劃痕大小并在光學(xué)顯微鏡下拍照。以（0～24 h）/0 h為愈合百分比定量，測(cè)量虛線區(qū)域之間的細(xì)胞垂直遷移寬度比來(lái)評(píng)估腫瘤細(xì)胞遷移情況。

1.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)

將轉(zhuǎn)染處理后的細(xì)胞接種于帶有8 μm孔徑聚碳酸酯過(guò)濾器的transwell小室內(nèi)，并在此之前于底部鋪上ECM550基質(zhì)膠。將裝有無(wú)血清培養(yǎng)基的小室置于含完全培養(yǎng)基的24孔板中培養(yǎng)24 h后，取出小室，細(xì)胞固定并染色拍照。

1.9 在線生物信息學(xué)分析系統(tǒng)

LINC00671在HCC及正常肝組織中的表達(dá)、預(yù)后及相關(guān)性分析在GEPIA（Gene Expression Profiling Interactive Analysis；http://gepia2.cancerpku.cn/#index）及starBase 3.0（Encyclopedia of RNA Interactomes，ENCORI；https://starbase.sysu.edu.cn/）數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行［8-10］；LINC00671的亞細(xì)胞定位通過(guò)lncAtlas網(wǎng)站（https://lncatlas.crg.eu/）進(jìn)行預(yù)測(cè)［11］；此外，LINC00671下游Hoogsteen堿基配對(duì)DNA則通過(guò)LongTarget網(wǎng)站（http://lncrna.smu.edu.cn/show/DNATriplex）進(jìn)行［12］；同時(shí)通過(guò)UCSC網(wǎng)站（http://genome.ucsc.edu/）調(diào)取并查詢下游基因c-myc啟動(dòng)子序列信息［13］。

1.10 甲基化DNA免疫共沉淀PCR（methylated DNA immunoprecipitation-PCR，MeDIPPCR）

將細(xì)胞轉(zhuǎn)染處理后，提取基因組DNA，超聲碎裂至0.3-1.0 kb長(zhǎng)度。使用5-甲基胞嘧啶抗體（比利時(shí)Eurogentec公司）進(jìn)行甲基化沉淀，并在VⅡA 7 real-time PCR系統(tǒng)（美國(guó)Applied Biosystems公司）分析純化的DNA。對(duì)應(yīng)啟動(dòng)子甲基化的變化可通過(guò)測(cè)量免疫沉淀DNA的數(shù)量，其PCR所需的c-myc上游引物為5'-CCCATATTCTCCCGTCTAGCAC-3'，下游引物為5'-CCAATTTCTCAGCCAGGTTTCA-3'；將該值與總input DNA的數(shù)量（MeDIP/input）進(jìn)行比較來(lái)確定。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用表示。采用t檢驗(yàn)分析各組之間的差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 組織及細(xì)胞間LINC00671表達(dá)差異及亞細(xì)胞定位

我們利用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析了LINC00671在HCC組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與正常肝組織相比，LINC00671在HCC組織中的表達(dá)顯著下調(diào)（圖1A）。隨后我們?cè)趕tarBase數(shù)據(jù)庫(kù)中分析了LINC00671對(duì)生存預(yù)后的影響，我們發(fā)現(xiàn)LINC00671高表達(dá)可能預(yù)示著較好的預(yù)后（P＜0.05，圖1B）。而在體外細(xì)胞系中，我們對(duì)比了正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞系與HCC細(xì)胞系中LINC00671的表達(dá)差異。RTFQ-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LINC00671在HCC細(xì)胞系中顯著下調(diào)，同時(shí)在不同的HCC細(xì)胞系中，LINC00671表達(dá)水平存在差異。其在Huh7細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)較高，而在HepG2細(xì)胞中表達(dá)水平較低（圖1C）。隨后通過(guò)lncAtlas數(shù)據(jù)庫(kù)在線預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)LINC00671主要分布于細(xì)胞核內(nèi)（圖1D）。為了進(jìn)一步證實(shí)這一預(yù)測(cè)，我們通過(guò)RNA FISH實(shí)驗(yàn)對(duì)LINC00671亞細(xì)胞定位進(jìn)行了分析，結(jié)果提示LINC00671確實(shí)主要集中于細(xì)胞核中（圖1E）。

圖1 LINC00671在HCC組織及細(xì)胞系中的表達(dá)和亞細(xì)胞定位Fig.1 Expression and subcellular localization of LINC00671 in HCC tissues and hepatoma cell lines

2.2 LINC00671可以抑制HCC細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡

以上結(jié)果證實(shí)了LINC00671在Huh7細(xì)胞中表達(dá)較高而在HepG2細(xì)胞中表達(dá)水平較低，由此我們選取Huh7細(xì)胞系進(jìn)行敲減實(shí)驗(yàn)并選取HepG2細(xì)胞進(jìn)行過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)。我們首先在體外對(duì)Huh7進(jìn)行了ASO轉(zhuǎn)染，RTFQ-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)ASO對(duì)LINC00671敲低效果較好（圖2A）。同時(shí)，在HepG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00671過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，RTFQ-PCR結(jié)果提示過(guò)表達(dá)效果明顯（圖2A）。在此基礎(chǔ)上，我們分別觀察了Huh7和HepG2細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果證實(shí)當(dāng)LINC00671敲低后，Huh7細(xì)胞增殖增加（圖2B）；而LINC00671過(guò)表達(dá)后，HepG2細(xì)胞增殖明顯受到抑制（圖2C）。此外，流式細(xì)胞式術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，LINC00671被敲低后，Huh7細(xì)胞凋亡顯著減少（圖2D）；而在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)LINC00671后，其凋亡率顯著增加（圖2E）。

圖2 LINC00671能夠影響HCC增殖和凋亡Fig.2 The regulation of LINC00671 on proliferation and apoptosis in hepatoma cells

2.3 LINC00671抑制HCC遷移和侵襲

為了進(jìn)一步驗(yàn)證LINC00671對(duì)HCC遷移和侵襲的影響，我們?cè)贖uh7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了ASO并在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)了LINC00671，隨后進(jìn)行細(xì)胞劃痕及transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果顯示，LINC00671敲低后，Huh7細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)（圖3A）；而LINC00671表達(dá)增加后，HepG2細(xì)胞遷移能力明顯受到抑制（圖3B）。此外，LINC00671敲降后，Huh7細(xì)胞侵襲能力明顯增加（圖3C）；而過(guò)表達(dá)LINC00671后，其可以明顯抑制HepG2細(xì)胞侵襲（圖3D）。

圖3 LINC00671抑制HCC遷移和侵襲Fig.3 LINC00671 inhibits migration and invasion of hepatoma cells

2.4 LINC00671可以通過(guò)介導(dǎo)啟動(dòng)子甲基化下調(diào)c-myc表達(dá)

通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)LINC00671與癌基因c-myc啟動(dòng)子區(qū)可能存在Hoogsteen配對(duì)結(jié)合（圖4A）。這一結(jié)果提示c-myc可能是LINC00671的下游靶基因。我們隨后在以上數(shù)據(jù)庫(kù)中分析了LINC00671與c-myc表達(dá)的相關(guān)性，Spearman分析提示LINC00671與c-myc在HCC組織中的表達(dá)呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)（圖4B～4C）。這一結(jié)果提示c-myc可能是LINC00671的靶基因且可能被LINC00671負(fù)向調(diào)控。為了明確c-myc是否是LINC00671下游靶基因，我們?cè)贖uh7細(xì)胞中敲低了LINC00671并在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)了LINC00671。隨后通過(guò)RTFQ-PCR及Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LINC00671確實(shí)可以下調(diào)c-myc的表達(dá)（圖4D～4E）。已有研究［14-15］指出，核內(nèi)lncRNA可以介導(dǎo)下游靶基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化修飾從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。因此，我們用同樣的方法轉(zhuǎn)染上述細(xì)胞后，利用MeDIP-PCR檢測(cè)了c-myc啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平變化。結(jié)果提示LINC00671可以顯著升高c-myc啟動(dòng)子甲基化水平（圖4F）。由此可見，LINC00671可能在細(xì)胞核內(nèi)通過(guò)介導(dǎo)c-myc啟動(dòng)子甲基化抑制c-myc表達(dá)，從而抑制了HCC的生物學(xué)行為。

圖4 LINC00671對(duì)c-myc的調(diào)控Fig.4 The regualtion of LINC00671 on c-myc

3 討 論

隨著測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步和研究的逐漸深入，越來(lái)越多的lncRNA分子被證明在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色。雖然目前有關(guān)lncRNA的文章越來(lái)越多，但仍有許多l(xiāng)ncRNA的生物功能未知，并且同一lncRNA在不同腫瘤中的作用和機(jī)制可能也不盡相同。因此對(duì)于這類分子的研究將為未來(lái)腫瘤的分子診斷和分子治療提供理論證據(jù)。

LINC00671定位于人體第17號(hào)染色體，目前已知僅有一個(gè)轉(zhuǎn)錄本，成熟體由1844個(gè)核苷酸組成。當(dāng)前對(duì)于LINC00671的報(bào)道并不多，在胰腺癌中，LINC00671被證明可能作為臨床分子標(biāo)志與胰腺癌患者預(yù)后相關(guān)［16］。在本研究中，我們同樣發(fā)現(xiàn)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)提示LINC00671在HCC組織中出現(xiàn)下調(diào)，并且starBase數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)其可能與HCC患者預(yù)后生存有關(guān)，即LINC00671高表達(dá)可能預(yù)示著較好的預(yù)后。機(jī)制上，其被證明能夠通過(guò)發(fā)揮內(nèi)源競(jìng)爭(zhēng)性RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）作用吸附miRNA分子從而通過(guò)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制胰腺癌進(jìn)展［17-18］。在甲狀腺癌中，LINC00671受到轉(zhuǎn)錄因子STAT3的調(diào)控，同時(shí)通過(guò)抑制糖酵解抑制甲狀腺癌進(jìn)展［19］。近期還有研究［20］報(bào)道了LINC00671在腎癌中同樣通過(guò)ceRNA作用抑制了腎癌的進(jìn)展。以上幾項(xiàng)研究雖然從不同癌種揭示了LINC00671的作用，但僅有一項(xiàng)研究進(jìn)行了LINC00671的亞細(xì)胞定位驗(yàn)證［19］。本研究證明了LINC00671可以顯著抑制HCC的生物學(xué)行為，這與先前的幾篇報(bào)道一致。不同于其他腫瘤，LINC00671在HCC中雖然也發(fā)揮抑癌效應(yīng)，但其主要定位于細(xì)胞核內(nèi)。因此，其可能有著與之前完全不同的分子機(jī)制。

通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)LINC00671可能與癌基因c-myc啟動(dòng)子區(qū)存在Hoogsteen配對(duì)從而介導(dǎo)后者啟動(dòng)子甲基化修飾，這提示c-myc可能是LINC00671的靶基因。而數(shù)據(jù)庫(kù)分析同樣發(fā)現(xiàn)LINC00671與c-myc在HCC組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)也證實(shí)：LINC00671可以通過(guò)介導(dǎo)c-myc啟動(dòng)子甲基化從而下調(diào)后者表達(dá)。C-myc基因（又稱MYC）是一個(gè)公認(rèn)的癌基因，其在不同腫瘤中均可扮演促癌基因的角色。從調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄到影響染色體穩(wěn)定性［21］，c-myc幾乎在所有腫瘤中均存在促癌作用而被稱為腫瘤的主宰基因之一［22］。在HCC中，c-myc同樣可以在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移及侵襲等多方面影響HCC的生物學(xué)行為［23］。而本研究發(fā)現(xiàn)LINC00671可以在細(xì)胞核內(nèi)介導(dǎo)c-myc啟動(dòng)子甲基化從而下調(diào)c-myc基因的表達(dá)，而這直接導(dǎo)致了LINC00671抑制HCC的生物學(xué)行為，即LINC00671抑制HCC進(jìn)展的分子機(jī)制。

本研究揭示了LINC00671在HCC中發(fā)揮的作用，初步探討了其抑制HCC進(jìn)展的分子機(jī)制。此外，本研究發(fā)現(xiàn)LINC00671在腫瘤中可以發(fā)揮核RNA的作用并可能通過(guò)介導(dǎo)啟動(dòng)子甲基化修飾從而下調(diào)靶基因的表達(dá)。

本研究也存在部分不足之處：首先，從臨床角度，雖然我們證明了LINC00671在HCC細(xì)胞系中有明顯下調(diào)，但數(shù)據(jù)庫(kù)納入的樣本量依舊有限并且其納入病例可能均存在潛在偏倚。因此，關(guān)于LINC00671的臨床意義仍需要大樣本臨床數(shù)據(jù)深入探究。其次，LINC00671對(duì)HCC的影響，包括生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，仍缺乏體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證；最后，在機(jī)制方面，我們雖然發(fā)現(xiàn)LINC00671可能通過(guò)調(diào)控c-myc來(lái)抑制HCC的生物學(xué)行為，但其調(diào)控的深入機(jī)制，包括具體結(jié)合位點(diǎn)、互作的甲基化酶及組蛋白甲基化位點(diǎn)均仍有待未來(lái)進(jìn)一步研究。

綜上所述，LINC00671可以顯著影響HCC的生物學(xué)行為，即其可以在體外顯著抑制HCC進(jìn)展；同時(shí)，其可以介導(dǎo)癌基因c-myc啟動(dòng)子甲基化修飾從而導(dǎo)致后者下調(diào)表達(dá)，這可能是LINC00671抑制HCC的重要分子機(jī)制。

利益沖突聲明：所有作者聲明均不存在利益沖突。