中藥單體防治肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

張白冰，龔先瓊

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，福建 福州 351012；

2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬廈門中醫(yī)院肝病中心，福建 廈門 361009）

肝纖維化（hepatic fibrosis，HF）是各種致病因素如乙型肝炎病毒、酒精、藥物等侵襲肝細(xì)胞，導(dǎo)致肝臟反復(fù)炎癥、修復(fù)最終形成纖維結(jié)締組織的病理過程，其發(fā)病機(jī)制為肝星狀細(xì)胞（HSCs）活化增殖，分泌過量的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），ECM合成和降解失衡，導(dǎo)致大量纖維膠原沉積在肝臟。因此抗HF的關(guān)鍵環(huán)節(jié)為抑制HSCs的活化增殖，誘導(dǎo)其衰老、凋亡。HSCs的激活受多種細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子及其他分子的調(diào)控。轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）是HSC活化分子中最重要的細(xì)胞因子，TGF-β1/Smad為最常見的調(diào)控纖維化信號通路[1]。目前尚未發(fā)現(xiàn)對抗HF有明確療效的西藥。中藥因具有多因子、多靶點(diǎn)和多環(huán)節(jié)的協(xié)同藥理效應(yīng)，在HF等復(fù)雜疾病的防治中具有顯著優(yōu)勢，中藥復(fù)方制劑治療HF療效確切，部分已納入肝纖維化指南。中藥單體是從中藥中提取的主要活性成分，具有成分簡單、安全性高等特點(diǎn)。近年來，中藥單體的研究成為中醫(yī)藥治病機(jī)制研究的重要手段，中藥單體及其有效成分治病機(jī)制的研究，為中藥復(fù)方治病的機(jī)制及安全性的探索提供了依據(jù)。本文就近年來比較新穎的中藥單體治療肝纖維化的研究進(jìn)展作一綜述，以期為中藥單體防治HF提供理論依據(jù)。

1 莪術(shù)醇（curcumol）

莪術(shù)醇是莪術(shù)的主要活性成分之一，主要作用為理氣消滯化瘀，臨床常用于治療慢性肝病、抗肝纖維化。研究認(rèn)為[2]，莪術(shù)醇具有較好的抗炎、抗肝纖維化、誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡功效。鄭洋等[3]研究表明，在CCL4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型中，莪術(shù)醇可明顯改善肝纖維化小鼠的肝組織結(jié)構(gòu)和肝功能，抑制肝纖維化，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)莪術(shù)醇可抑制TGF-β1/Smad信號通路的激活，下調(diào)T G F-β1細(xì)胞因子、Smad2/3蛋白分子和基因的表達(dá)；說明莪術(shù)醇可能通過抑制TGF-β1/Smad 信號通路抑制肝纖維化；莪術(shù)醇還可抑制肝星狀細(xì)胞Rho通路的關(guān)鍵分子RhoA和ROCK2的表達(dá)，這可能是其抗HF的另一機(jī)制[4]；此外，莪術(shù)醇還可通過抑制肝竇內(nèi)皮細(xì)胞MAPK信號通路上關(guān)鍵分子JNK、ERK、p38MAPK表達(dá)，降低肝臟炎癥反應(yīng)，抑制肝竇內(nèi)皮細(xì)胞活化、增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制炎癥反應(yīng)進(jìn)而發(fā)揮抗肝纖維化作用[5]。另有王佳慧等[6]基于miR-125b/NLRP3信號通路探討了莪術(shù)醇抗HF的機(jī)制，miR-125b是一種廣泛表達(dá)的miRNA，參與細(xì)胞的增殖、凋亡，改變HSCs的表型；而NLRP3是miR-125b的靶基因，NLRP3炎癥小體及其下游的炎癥信號過量表達(dá)會促進(jìn)肝臟炎癥，莪術(shù)醇通過上調(diào)miR-125b的表達(dá)，靶向抑制下游NLRP3炎癥小體的信號傳導(dǎo)，減輕肝內(nèi)炎癥反應(yīng)以及抑制HSC活化，從而達(dá)到抗HF的作用。

2 荔枝核總黃酮（total flavone of Litchi Chinensis Sonn，TFL）

TFL是荔枝核主要提取物之一，屬于黃酮類化合物，藥理研究證明具有抗炎、抗氧化、抗纖維化的作用，廣泛應(yīng)用于肝炎、肝纖維等疾病治療中[7]。已有研究發(fā)現(xiàn)TFL可調(diào)控多個(gè)蛋白，通過多種復(fù)雜的信號通路抗HF[8]。成秋宸等[9]研究發(fā)現(xiàn)：多條炎癥信號通路中的關(guān)鍵分子NF-kBp65及COX-2因子是增強(qiáng)炎癥反應(yīng)、促進(jìn)HSCs增殖、抑制HSCs凋亡的重要因子，而TFL可通過抑制大鼠肝纖維化細(xì)胞中NF-kBp65及COX-2在肝臟中的表達(dá)減少HSCs活化，發(fā)揮抗HF作用。而馮茵怡等[10]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)TFL治療后的肝纖維化大鼠肝組織學(xué)病理提示肝臟ECM沉積減少及肝臟病變程度減輕，表明TFL有抗HF作用，其分子機(jī)制可能與其調(diào)控ALB、PLG、HSP90AAL、EGFR、MAP2K1的表達(dá)有關(guān)。陳姍等[11，12]也通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)TFL可調(diào)控肝細(xì)胞中PPAR-γ及C-ski mRNA、TGF-β1、Smad3/4表達(dá)，這可能也是其抗HF機(jī)制之一。

3 丹酚酸B（salvianolic acid B，SalB）

SalB是從中藥丹參的根部中提取的化合物，是丹參的主要活性成分。近年來對SalB藥理作用進(jìn)一步深入研究發(fā)現(xiàn)其具有良好的抗纖維化活性，SalB通過調(diào)控多條信號通路來發(fā)揮其良好的抗HF作用[13]。Wu C等[14]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SalB可抑制MAPK的激活，介導(dǎo)Smad2/3在接頭區(qū)域（P-Smad2/3L）和Smad2在C末端（P-Smad2C）的磷酸化，下調(diào)P-Smad2/3L和P-Smad2C蛋白水平，降低肝纖維化相關(guān)標(biāo)志物α-SMA、膠原蛋白I、TGF-β表達(dá)，以上結(jié)果提示SalB可能通過調(diào)控MAPK介導(dǎo)的P-Smad2/3L信號通路減輕肝纖維化。Tao S等[15]研究發(fā)現(xiàn)，SalB可能通過下調(diào)Hh信號通路中Shh、Ptch1、Smo和Gli1mRNA的表達(dá)量，抑制Hh信號通路的激活來發(fā)揮抗HF的作用。轉(zhuǎn)錄因子MEF2是促進(jìn)HSCs活化和纖維化的重要調(diào)節(jié)因子，SalB可通過拮抗TGF-β1誘導(dǎo)的MEF2信號通路激活，降低MEF2mRNA和蛋白質(zhì)水平，從而抑制HSCs活化增殖，這可能是其抗HF的另一作用靶點(diǎn)[16]。

4 紅景天苷（salidroside，Sal）

Sal是從中藥紅景天中提取出的一類苯丙烷類糖苷，具有顯著的抗HF作用，其機(jī)制可能與調(diào)控多條炎癥信號通路而使HSCs分泌減少有關(guān)[17]。Feng J等[18]研究發(fā)現(xiàn)：Sal可下調(diào)NF-κB信號通路，降低TGF-β1生成，進(jìn)一步抑制TGF-β1/ Smad3信號通路的激活，從而抑制HSCs活化，此外還可抑制HSCs的自噬、上調(diào)MMP2 的表達(dá)并下調(diào)TIMP1，從而抑制ECM生成。肝纖維化小鼠模型中趨化因子CXCL16高表達(dá)，CXCL16能夠促進(jìn)HSCs遷移、活化和α－SMA、I型膠原的高表達(dá)及Akt磷酸化，Sal干預(yù)可以拮抗CXCL16，逆轉(zhuǎn)肝纖維化，提示Sal抗HF機(jī)制可能與抑制CXCL16 誘導(dǎo)的HSCs遷移、活化及Akt 磷酸化有關(guān)[19]。賈詩惠等[20]研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化小鼠模型中HIF-1α、NRP-1蛋白表達(dá)增加，Sal干預(yù)治療后HIF-1α、NRP-1顯著下降，Sal可能通過抑制肝細(xì)胞中HIF-1α、NRP-1表達(dá)，減輕肝損傷，緩解肝纖維化。

5 黃芪甲苷（astragaloside lV）

黃芪甲苷是從中藥黃芪中提取的一種活性成分，其對肝纖維化的形成有改善和延緩作用[21]。近年來，黃芪在臨床治療肝纖維化已取得良好成效。研究表明[22]黃芪甲苷可下調(diào)纖維化因子TGF-β1、MCP-1、ɑ-SMA蛋白分子表達(dá)量，升高Smad7蛋白水平，提示黃芪甲苷可能通過抑制TGF-β1/ Smad信號通路激活，抑制HSC活化增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)揮其抗肝纖維化作用；此外黃芪甲苷還可以調(diào)節(jié)MMP-2、TIMP-2的表達(dá)，抑制星狀細(xì)胞活化，促進(jìn)膠原蛋白的合成和代謝，有利于ECM的降解。Chen Z等[23]在血小板衍生生長因子（PDGF）-BB激活的大鼠HSC-T6細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)黃芪甲苷處理后ECM主要標(biāo)志物ɑ-SMA、COL1A1和纖連蛋白的表達(dá)降低；細(xì)胞衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（SAβ-gal）活性顯著增強(qiáng)，衰老標(biāo)志物p21、p53和高遷移率基團(tuán)AT-hook 1（HMGA1）的表達(dá)顯著上調(diào)，端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）表達(dá)量下調(diào)；與對照組相比，黃芪甲苷治療組的HSCs-T6細(xì)胞早期和晚期凋亡率均升高，說明黃芪甲苷可能通過促進(jìn)HSCs-T6衰老及凋亡發(fā)揮其抗HF作用。此外戴鴻志等[24]研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷抗HF的分子機(jī)制可能與其下調(diào)N-cadherin、TGF-β1、ɑ-SMA的蛋白表達(dá)，上調(diào)E-cadherin 蛋白表達(dá)，抑制上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。

6 大黃素（emodin）

大黃素是從中藥大黃的根部提取的單體化合物，具有抗纖維化的作用[25]，大黃素可抑制氧化應(yīng)激、TGF-β/Smad通路及HSCs活化增殖、促進(jìn)凋亡，降低膠原蛋白合成等來起到抗HF的作用[26]。張峰等[27]研究發(fā)現(xiàn)，大黃素還能上調(diào)HSC中的衰老相關(guān)分子如SA-β-Gal、p16、p21及Hmga1的表達(dá)，并阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，進(jìn)一步研究中發(fā)現(xiàn)大黃素還能促進(jìn)核受體Nur77與DNA甲基化酶DNMT3b相互作用，從而上調(diào)DNMT3b催化的Gls1啟動(dòng)子甲基化，抑制ERK和Nur77磷酸化，導(dǎo)致Gls1表達(dá)及谷氨酰胺代謝受到抑制，進(jìn)而誘導(dǎo)HSC衰老發(fā)揮抗HF作用。龍丹丹等[28]研究發(fā)現(xiàn)大黃素可下調(diào)CTGF、TIMP-1表達(dá)量，上調(diào)MMP-9表達(dá)量，減少膠原蛋白合成，促進(jìn)ECM降解。Zhao XA等[29]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)相對于CCl4肝纖維模型組，大黃素干預(yù)組單核細(xì)胞趨化因子MCP-1和CCL7表達(dá)量顯著降低，Gr1h1單核細(xì)胞的浸潤減少；Gr1h1單核細(xì)胞相關(guān)的促炎及促纖維化因子：IL-1β、TNF-α、GRN、TGF-β1表達(dá)也顯著降低；大黃素可能通過抑制MCP-1和CCL7減少Gr1h1單核細(xì)胞的浸潤延緩HF。

7 總結(jié)與展望

肝纖維化的防治對于阻斷各種慢性肝病走向肝硬化、肝癌至關(guān)重要，中藥單體藥理作用廣泛，可多途徑、多靶點(diǎn)、多信號通路調(diào)控肝纖維化，又具有副作用小的特點(diǎn)，在治療肝纖維化上有巨大優(yōu)勢。目前中藥單體抗肝纖維化的作用研究已取得一定成就，但對于其機(jī)制闡述還不清楚，因此日后的研究工作應(yīng)從有良好發(fā)展前景的中藥單體出發(fā)，系統(tǒng)、全面、深入研究其抗HF機(jī)制，找到新靶點(diǎn)、新機(jī)制，為中醫(yī)藥防治肝纖維化帶來新方向、提供新思路，進(jìn)而擴(kuò)展至中藥復(fù)方的研究探索。此外，由于目前對中藥單體治療肝纖維化研究仍以動(dòng)物模型為主，其與人體肝纖維化發(fā)生機(jī)理差異較大，導(dǎo)致與臨床療效存在差異，因此，在日后的研究探索中，還亟須建立更加契合臨床肝纖維化發(fā)病機(jī)制的動(dòng)物模型?，F(xiàn)有大量研究已證實(shí)中藥單體在抗炎保肝、抑制HSCs活化增殖及誘導(dǎo)其衰亡凋亡、平衡ECM生成與降解等方面協(xié)同發(fā)揮作用,因此繼續(xù)探討中藥單體抗肝纖維化的研究前景較好。