巴布亞企鵝幼雛白肌病的診斷與防治

宋新然 李艷秋 白 偉 楚善合 趙吉月 王德眾 戰(zhàn)立聰

(大連圣亞旅游控股股份有限公司，大連，116023)

白肌病(white myopathy)又稱肌肉營養(yǎng)不良(muscular dystrophy)或肌透明變性，目前認(rèn)為是由于維生素E和硒的缺乏引起的一種急性、亞急性或慢性營養(yǎng)代謝障礙性疾病，該病的主要發(fā)病群體為各類動物的未成年個體[1]。動物患病后主要表現(xiàn)為精神沉郁、食欲下降、共濟失調(diào)等[2-3]。禽類還表現(xiàn)為打噴嚏、甩鼻、頭部和眼周水腫、結(jié)膜潮紅、腹瀉消瘦、后肢無力等癥狀，部分病禽出現(xiàn)頭頸及腹下部腫大[2，4-5]。該病的病理變化主要包括全身骨骼肌廣泛的對稱性肌營養(yǎng)不良[6]，心肌擴張變薄、心包積液、心肌松弛[3-5]，滲出性素質(zhì)[4]，腎實質(zhì)有出血點和灰色的斑狀灶等[3，7]。因該病多為群體發(fā)病，且發(fā)病急，病程短，死亡率高，給畜禽養(yǎng)殖及繁育工作帶來較大的影響[3-4]。目前相關(guān)的報道主要集中在幼齡畜、禽，包括羔羊、犢牛、仔豬、馬駒、雛雞和雛鴨等，對于企鵝(Pygoscelisspp.)白肌病的研究相對較少[2-3，6]。

巴布亞企鵝(Pygoscelispapua)又稱白眉企鵝、金圖企鵝、紳士企鵝，屬鳥綱(Aves)，楔翼總目(Impennes)，企鵝科(Spheniscidae)，阿德利企鵝屬，主要分布在南極大陸及亞南極圈的眾多海島，以南極磷蝦和魚類等水生動物為食[8]。巴布亞企鵝分布相對較廣，數(shù)量眾多，且因其外觀憨態(tài)可掬，十分惹人喜愛，成為國內(nèi)海洋館和動物園中極地動物的代表之一。

目前，大連圣亞海洋世界場館內(nèi)企鵝的人工飼養(yǎng)溫度保持在(0±2)℃，陸區(qū)面積140多m2，使用的飼料主要是冰鮮的魚類和南極磷蝦，因為冷凍保存過程中，維生素會有一定地流失，因此館內(nèi)飼養(yǎng)的巴布亞企鵝每日混飼馬祖瑞5M25 3～4粒進行相應(yīng)補充。

自2018年起，繁育的企鵝幼雛開始出現(xiàn)發(fā)病和死亡的情況。因其屬于晚成鳥類，幼雛需親鳥從胃內(nèi)反芻食物進行飼喂，給觀察和治療工作帶來了一定的難度。研究發(fā)現(xiàn)，該病主要發(fā)生在40日齡以內(nèi)的幼企鵝，且發(fā)病企鵝巢多在蒸發(fā)器下方。發(fā)病前無任何異常表現(xiàn)，初期可見口吐透明、略黏稠的液體，生長減緩較明顯，正常40日齡幼雛每日體重增長量一般為120 g左右，患病企鵝則表現(xiàn)為體重不增或下降，死亡前2～4 d開始出現(xiàn)頭頸無力，呼吸急促，病程3～5 d，多取死亡轉(zhuǎn)歸。據(jù)統(tǒng)計，該病在新生企鵝中的發(fā)病率約為25%，病死率可達(dá)90%，對場館內(nèi)巴布亞企鵝的保育工作產(chǎn)生了嚴(yán)重影響，因此，對該病進行了進一步的鑒別診斷及治療方法的探究。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

2018—2020年飼養(yǎng)期內(nèi)，在大連圣亞海洋世界場館內(nèi)對其自行繁育的巴布亞企鵝幼雛的體重、精神狀態(tài)、攝食及排便等情況進行觀察和記錄。

1.2 大體剖檢及病理組織學(xué)檢查

當(dāng)有企鵝患病并確認(rèn)死亡后，立即進行解剖，詳細(xì)檢查各臟器的病理變化，并將發(fā)生病變的心、肺、肝、胰、腎等器官固定于體積分?jǐn)?shù)10%的中性福爾馬林溶液中，送往第三方進行病理組織學(xué)鑒定。

1.3 實驗室檢驗

按照無菌操作程序，使用拭子從肌肉、肺、心臟、心包積液、肝臟、胰腺等器官提取病料，接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和普通瓊脂培養(yǎng)基，分別以25、37 ℃培養(yǎng)48、24 h后觀察微生物生長情況并記錄。

2 結(jié) 果

2.1 大體剖檢

正常的巴布亞企鵝成體胸大肌為深紅色，質(zhì)地相對堅實(圖1A)，病死企鵝幼雛的肌肉為淡粉色，質(zhì)地松軟(圖1B)。對病死企鵝內(nèi)臟器官剖檢可見其心臟表面出血，心臟質(zhì)地相對松軟，顏色粉白(圖1D)。病變的心包如圖1C所示，其中存在大量淡黃色、半透明的液體。病死企鵝脾臟被膜局部呈灰黃色，有出血和淤血，病變的胰臟(圖1E)可見明顯的組織出血和凝固性壞死。病死企鵝的肺臟表面粗糙，如圖1F所示，肺臟表面正常組織為淡粉色，伴有大面積的暗紅色出血斑。將肺臟切開后，切面為灰紅色，質(zhì)地松軟如海綿樣，血管內(nèi)可見有血栓形成。肝臟剖檢發(fā)現(xiàn)局部被膜灰黃，質(zhì)地相對松軟(圖1G)。

2.2 病理鏡檢

病理學(xué)檢驗發(fā)現(xiàn)病死企鵝的心、肝、肺、胰等多個器官均有不同程度的病變。在光鏡下，病死企鵝肺部表現(xiàn)為單/雙側(cè)肺細(xì)支氣管腔、肺泡腔內(nèi)存在大量紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，伴有出血和淤血，部分組織出血性梗死，臟層胸膜見少量中性粒細(xì)胞浸潤，鄰近的食管未見病變(圖2A)。心臟剖檢發(fā)現(xiàn)其表面出血，剖開后在心房心室交界處有灰白帶。光鏡下可見其心肌間質(zhì)水腫，小血管充血，心臟及心外膜見灶狀中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(圖2B)。個別病死企鵝還表現(xiàn)有左右心房擴張的情況。腎臟表面光滑，呈灰黃色，伴有淤血和間質(zhì)水腫，腎間質(zhì)及被膜見少量中性粒細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞部分壞死。肝臟局部被膜灰黃，有淤血和細(xì)胞灶狀水腫變性及壞死(圖2C)，或有少量的局部水腫和變性壞死。圖2D為病死的38日齡雌性幼年巴布亞企鵝肝臟的病理送檢結(jié)果，肝組織為灰黃色，內(nèi)見一擴張囊腔，囊壁未見內(nèi)襯上皮，局灶肝細(xì)胞空泡變性，間質(zhì)內(nèi)可見少許炎性細(xì)胞浸潤。肌肉病理送檢結(jié)果顯示多個動脈有血栓形成。脾臟被膜局部呈灰黃色，有出血和淤血。胰臟外觀無異常，病理檢查發(fā)現(xiàn)存在淤血。

2.3 實驗室檢驗

對病死企鵝的肌肉、肺、心臟、心包積液、肝臟、胰腺這些肉眼可見的病變臟器進行細(xì)菌和真菌培養(yǎng)后，均未觀察到有菌落生長。

3 治療與預(yù)防

對場館內(nèi)巴布亞企鵝投喂的飼料多為冷凍保存，易造成包括維生素E等不穩(wěn)定的營養(yǎng)成分流失，由此分析幼雛的白肌病主要是由于維生素E缺乏導(dǎo)致的，并采取了相應(yīng)的治療性診斷措施。

因幼企鵝只能進食親企鵝反芻的食物，不能主動進食，大連圣亞海洋世界館于2019年開始，嘗試在疑似發(fā)病幼雛的親企鵝每日飼料中添加維生素E 30 mg，并每日監(jiān)測這些幼雛的體重及精神狀態(tài)。治療性診斷結(jié)果顯示，發(fā)病幼雛普遍在其親企鵝用藥3 d左右，體重開始上升，精神狀態(tài)也恢復(fù)正常。病情好轉(zhuǎn)之后，繼續(xù)以每日30 mg的劑量，連續(xù)給藥補7 d后結(jié)束治療，未見復(fù)發(fā)。結(jié)合往年的治療經(jīng)驗，于2020年對繁育親企鵝飼料中集體添加維生素E 70 mg/d，待幼企鵝獨立攝食后，繼續(xù)在其飼料中單獨添加維生素E 70 mg/d，未出現(xiàn)發(fā)病情況。

4 討 論

4.1 臨床表現(xiàn)

與其他禽類和哺乳動物相似，該病主要發(fā)生于幼企鵝，這可能是因為幼齡動物的代謝更加旺盛，對維生素E和硒的需求也相對較大[9]。企鵝發(fā)病的表現(xiàn)與其他禽類也較為相似，發(fā)病通常比較突然、病程短、死亡率高。所不同的是，患病企鵝運動狀態(tài)和行為習(xí)慣的變化并不明顯，僅表現(xiàn)為頭頸無力，后期可能出現(xiàn)呼吸急促的癥狀，這可能是由于幼企鵝多趴伏在親企鵝腹下以保持體溫，運動量也較小，不易觀察到其行走狀態(tài)。因此，與其他禽類相比，不易察覺病情。

4.2 剖檢病理

剖檢發(fā)現(xiàn)企鵝骨骼肌較其他陸生禽類相比顏色更加深紅，這可能是因為企鵝主要在水中覓食，需要增加肌肉中肌紅蛋白的含量以增強其儲氧量從而提高屏息潛水能力[10-11]。患病企鵝的肌肉和臟器病變與其他哺乳動物和禽類較為相似，特征較為明顯，不同的是，在剖檢過程中未發(fā)現(xiàn)滲出性素質(zhì)。關(guān)于這一點，有研究發(fā)現(xiàn)維生素E和硒的共同缺乏會導(dǎo)致動物毛細(xì)血管基底膜變薄，從而改變毛細(xì)血管通透性，重者還會導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞破裂，引起出血。繁育企鵝投喂的全魚飼料在冷凍保存過程中可能造成維生素E的流失，但硒的含量不會受到影響，可能對病死企鵝毛細(xì)血管通透性未造成明顯改變，從而未出現(xiàn)如其他禽類所表現(xiàn)的滲出性素質(zhì)[12-13]。另外，由于缺乏正常巴布亞企鵝幼雛的肌肉樣本做對照，也不能斷定病死雛企鵝肌肉顏色較淺完全是由于維生素E缺乏所致。

病理學(xué)檢驗發(fā)現(xiàn)心、肝、肺、胰等多個器官均有不同程度的病變，其主要表現(xiàn)有組織出血、淤血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤等特征，這可能是因為維生素E在體內(nèi)多以α生育酚的形式存在，可有效清除體內(nèi)自由基、活性氧氮等有害物質(zhì)，還可以增強動物組織細(xì)胞多種抗氧化酶的作用，維生素E的缺乏則會導(dǎo)致動物機體抗氧化環(huán)境的破壞，引起一系列的病理變化[14-15]。

4.3 實驗室檢驗

對病死企鵝的多個病變臟器進行細(xì)菌和真菌培養(yǎng)后，均未觀察到有菌落生長，但病理檢查結(jié)果顯示肝、肺等臟器均存在炎性細(xì)胞浸潤，這可能是因為，維生素E的缺乏導(dǎo)致細(xì)胞的變性壞死，引發(fā)無菌性炎癥[14]。

4.4 治療與預(yù)防

該病的主要治療方法是增加患病動物對硒和維生素E的攝入。一般根據(jù)動物種類的不同及發(fā)病情況在飼料中添加適量的亞硒酸鈉和維生素E即可獲得顯著效果，也可將亞硒酸鈉溶于水中飼喂，更易均勻混合，但需注意防止飼喂過量引起中毒[4-5]。家禽一般在用藥后1 d即可好轉(zhuǎn)，繼續(xù)用藥1周可基本恢復(fù)正常，對于危重的患病動物可根據(jù)體重以適量的亞硒酸鈉生理鹽水溶液肌注進行急救[2，5]。

通過對場館內(nèi)幼企鵝的頻繁發(fā)病進行治療性診斷，進一步證實該病是由于維生素E缺乏所致。在巴布亞企鵝幼雛群體中，白肌病表現(xiàn)為泛發(fā)，發(fā)病急，病程短，又因其癥狀表現(xiàn)相對較晚且不太典型，一旦發(fā)病，留給治療的時間往往不夠充分，死亡率較高。因此，對于此病應(yīng)提前做好預(yù)防，在繁育期企鵝的日糧中添加適量的維生素E即可有效預(yù)防此病的發(fā)生，避免不必要的損失。

觀察發(fā)現(xiàn)，發(fā)病企鵝巢體多在蒸發(fā)器下，噪音相對較大，雖然已有研究認(rèn)為噪音對企鵝的影響較小[16]，但對于繁殖期企鵝或企鵝幼雛影響的相關(guān)研究還比較少，有待于進一步的探究。另外，蒸發(fā)器下溫度相對較高，可能會對幼企鵝的新陳代謝產(chǎn)生一定的促進作用，加快營養(yǎng)物質(zhì)包括維生素E的消耗。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)維生素E的抗氧化性能可有效降低熱應(yīng)激造成的自由基損傷，從而影響動物的環(huán)境適應(yīng)能力[17]。因此，提供更為適宜的溫度和相對安靜的環(huán)境對于幼企鵝白肌病的預(yù)防可能具有積極作用。

另有研究發(fā)現(xiàn)，自然環(huán)境下維生素E會在野生企鵝的卵黃內(nèi)大量富集，其濃度可達(dá)到食物中濃度的1.5～4.5倍[18]，這足以證明維生素E在企鵝幼雛生長和發(fā)育過程中的重要作用，因此，在企鵝繁育期開始前就進行維生素E的投喂，可能會更有效地避免幼企鵝出生后維生素E的攝入或吸收不足。但由于企鵝是反芻鳥類，幼企鵝所攝食的魚糜會提前在親企鵝的胃內(nèi)與胃酸融合并進行一定程度的消化，而這個消化過程對于維生素E的保留程度還不明確，因此，對于維生素E在飼料中的添加時機和添加劑量還有待于進一步的研究。