ALKBH5對紫外線誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷模型中DNA損傷修復(fù)的影響△

李鵬飛 鮑思潔 王從玉 王思文 孫誠浩 康麗華 管懷進(jìn)

已有研究發(fā)現(xiàn)，在紫外線照射引起的DNA損傷位點(diǎn)處發(fā)生N6-甲基腺苷(m6A)修飾的聚集，通過多種機(jī)制促進(jìn)DNA修復(fù)，對抗紫外線照射引起的損傷[8-9]。m6A是真核生物mRNA中最豐富的內(nèi)部表觀遺傳學(xué)修飾，參與mRNA代謝全部環(huán)節(jié)，通過調(diào)節(jié)RNA穩(wěn)定性和翻譯調(diào)節(jié)基因表達(dá)，在各種生物過程中發(fā)揮重要作用[10-12]。m6A修飾過程受到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(MTC)、去甲基化酶和m6A識別酶的動態(tài)調(diào)控[13-14]。其中，ALKBH5作為去甲基化酶，在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用[15-16]。雖然已有研究發(fā)現(xiàn)，ALKBH5在皮質(zhì)型ARC的LEC中的表達(dá)顯著上調(diào)，但是其在ARC發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制尚不清楚[17]。

本研究中，我們通過對LEC進(jìn)行紫外線B(UVB)照射構(gòu)建氧化損傷模型，探究m6A去甲基化酶ALKBH5在氧化損傷模型中對損傷性DNA修復(fù)的影響，為ARC的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2021年4月至10月在南通大學(xué)附屬醫(yī)院眼科住院并行超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)的ARC患者8例8眼為ARC組，選擇同期住院并接受透明晶狀體摘除術(shù)的黃斑前膜患者8例8眼為對照組，收集所有患者的臨床資料及晶狀體前囊膜，所有患者的晶狀體混濁程度均根據(jù)LOCSⅢ分級系統(tǒng)進(jìn)行分級。ARC組患者排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)并發(fā)性、外傷性、代謝性、藥物及中毒性白內(nèi)障等其他類型的白內(nèi)障；(2)雙眼中有一眼為無晶狀體眼;(3)合并高血壓、糖尿病或自身免疫病。對照組患者排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并高度近視、葡萄膜炎或青光眼等眼部疾?。?2)合并高血壓、糖尿病或其他全身性疾病。ARC組患者男5例、女3例，年齡為50～80(66.1±3.4)歲，對照組患者男4例、女4例，年齡為50～80(65.6±2.7)歲，兩組患者間性別和年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.94、0.18)。本研究通過南通大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審批(倫理審查批號：2021-L091)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 材料人LEC細(xì)胞系SRA01/04細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶均購自美國Gibco公司；手持式紫外線檢測燈購自中國光豪分析儀器公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Thermo Scientific公司，Trizol試劑盒購自美國Invitrogen公司，引物購自上海生工生物工程股份有限公司；靶向ALKBH5設(shè)計(jì)的siRNAs購自中國銳博生物科技有限公司；CCK-8試劑盒購自日本同仁化學(xué)研究所；15A3抗體購自英國Abcam公司；GAPDH抗體、熒光二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔和山羊抗鼠IgG)均購自中國ABclonal公司。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和UVB處理將SRA01/04細(xì)胞復(fù)蘇后，加入完全培養(yǎng)基(含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清和10 g·L-1青鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基)，并置于 37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待培養(yǎng)皿中的細(xì)胞融合度達(dá)80%左右時(shí)，用Hanks液清洗細(xì)胞2次，加入適量的無菌PBS，置于手持式紫外線檢測燈(波長為275～400 nm ，峰值為310 nm )下30 cm處照射。UVB照射時(shí)間梯度為0 min、10 min、15 min、30 min、45 min。照射后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 qRT-PCR檢測根據(jù)Trizol試劑盒的步驟提取ARC組(n=3)和對照組(n=3)患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中的總RNA。按照說明書行qRT-PCR檢測，以GAPDH為內(nèi)參，使用2-△△Ct分析，實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。GAPDH上游引物為5’-TGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGT-3’，下游引物為5’-CATGTGGGCCATGAGGTCC ACCAC-3’。ALKBH5上游引物為5’-CCCGAGGGCTTCGTCAACA-3’，下游引物為5’-CGACACCCGAATAGGCTTGA-3’。同樣方法檢測經(jīng)不同方法處理后SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和11個(gè)DNA氧化損傷修復(fù)基因(ODRGs)的表達(dá)，其中11個(gè)ODRGs的引物序列見表1。

表1 11個(gè)ODRGs的引物序列

1.5 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測取ARC組(n=5)和對照組(n=5)患者的晶狀體前囊膜，提取上皮細(xì)胞，加入蛋白裂解液冰上裂解，提取蛋白上清，于125 g·L-1的凝膠上進(jìn)行電泳(電壓80 V轉(zhuǎn)120 V)分離蛋白；采用濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜(電流250 mA，2 h)；采用5 g·L-1脫脂奶粉室溫下封閉2 h；參照說明書將稀釋好的目的一抗(ALKBH5稀釋度為11000;GAPDH稀釋度為16000)加入PVDF膜中，置于4 ℃冰箱孵育過夜；次日，用TBST漂洗，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔(二抗)IgG在室溫下孵育2 h；最后，TBST洗滌后加入顯影劑，置于暗室內(nèi)曝光顯影。以GAPDH為內(nèi)參。同樣方法檢測經(jīng)不同方法處理后SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5蛋白表達(dá)。

1.6 細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染檢測siALKBH5轉(zhuǎn)染效率時(shí)，實(shí)驗(yàn)分為轉(zhuǎn)染siALKBH5組(針對ALKBH5 mRNA的三個(gè)不同區(qū)域設(shè)計(jì)靶向敲低ALKBH5的siRNA,命名為siALKBH5#1、siALKBH5#2和siALKBH5#3)、轉(zhuǎn)染對照siNC組(轉(zhuǎn)染對照siNC)和Control組(未經(jīng)任何處理)。檢測ALKBH5在細(xì)胞氧化損傷模型中的功能時(shí)，實(shí)驗(yàn)分為Control組(未經(jīng)任何處理)、UVB組(采用UVB照射)、UVB+siNC組(轉(zhuǎn)染對照siNC,同時(shí)采用UVB照射處理)以及UVB+siALKBH5#3組(轉(zhuǎn)染siALKBH5#3，同時(shí)采用UVB照射處理)。轉(zhuǎn)染方法：6孔板每孔中加入Lipofectamine 3000和siRNA充分混勻后室溫孵育15 min，之后，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72 h后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

那什么時(shí)間是最佳時(shí)間段呢？根據(jù)數(shù)據(jù)分析顯示，這一類客戶他們通常在晚上7～8點(diǎn)鐘是比較閑的，因?yàn)樗麄冊诿β档墓ぷ骱蠼K于可以在家放松緊張了一天的神經(jīng)。這時(shí)候如果你給他們電話，他們都會和你用心交談。

1.7 CCK-8法檢測細(xì)胞活力CCK-8法檢測Control組、UVB組、UVB+siNC組以及UVB+siALKBH5#3組細(xì)胞活力，具體方法為：將SRA01/04細(xì)胞以每孔1×104個(gè)的密度接種于96孔板，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h；分組處理后棄培養(yǎng)基，向每孔加入100 μL完全培養(yǎng)基和10 μL CCK-8溶液；繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中孵育1～2 h(操作過程中注意避光)；使用酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度。

1.8 免疫熒光染色檢測DNA氧化損傷UVB+siNC組和UVB+siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞分組處理后，PBS清洗，40 g·L-1多聚甲醛室溫固定30 min,加入30 g·L-1牛血清白蛋白和體積分?jǐn)?shù)0.5% Triton X-100溶液，室溫封閉2 h；依據(jù)15A3抗體(15A3抗體可檢測到發(fā)生損傷DNA的標(biāo)志物8-oxoG，而8-oxoG為ALKBH5修復(fù)損傷DNA的結(jié)合底物[8])說明書，使用10 g·L-1牛血清白蛋白配一抗反應(yīng)液，4 ℃孵育過夜；次日取出洗滌后，加入熒光二抗，室溫下孵育2 h(操作過程中注意避光)；之后，Hoechst(110 000)孵育8 min染細(xì)胞核(操作過程中注意避光)，熒光顯微鏡下避光觀察、拍照。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Graphpad prism 8統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。多組間比較均采用單因素方差分析，兩樣本間比較采用t檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ARC患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)qRT-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，ARC組患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)(圖1)。

圖1 ARC組和對照組患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中ALKBH5的mRNA和蛋白表達(dá) A：qRT-PCR檢測ALKBH5 mRNA表達(dá)；B：免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測ALKBH5蛋白表達(dá)。與對照組相比，****P<0.000 1。

2.2 UVB照射對LEC中ALKBH5表達(dá)的影響

2.2.1 UVB照射對LEC中ALKBH5 mRNA表達(dá)的影響qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，與UVB照射0 min時(shí)相比，SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA表達(dá)量在UVB照射10 min時(shí)上升，在UVB照射30 min和45 min時(shí)下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)；UVB照射15 min與0 min時(shí)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中，UVB照射10 min時(shí)ALKBH5 mRNA的表達(dá)量最高(圖2)。

圖2 qRT-PCR檢測UVB照射不同時(shí)間SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA表達(dá) 與照射0 min時(shí)相比，*P<0.05，****P<0.000 1。

2.2.2 UVB照射對LEC中ALKBH5蛋白表達(dá)的影響免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，在UVB以時(shí)間梯度照射SRA01/04細(xì)胞后，SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5的蛋白表達(dá)量呈上升后下降趨勢。與UVB照射0 min時(shí)相比，SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5蛋白表達(dá)量在UVB照射10 min時(shí)和15 min時(shí)上升，在UVB照射45 min時(shí)下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)；UVB照射30 min與照射0 min時(shí)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中，UVB照射10 min時(shí)ALKBH5的蛋白表達(dá)量升高最明顯(圖3)。因此，本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞UVB照射氧化損傷模型的構(gòu)建均采用輻射強(qiáng)度為0.09 mW·cm-2的手持式紫外線檢測燈照射SRA01/04細(xì)胞10 min。

圖3 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測UVB照射不同時(shí)間SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5蛋白表達(dá) 與照射0 min時(shí)相比，**P<0.01，***P<0.001。

2.3 ALKBH5敲降模型驗(yàn)證qRT-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比，轉(zhuǎn)染siALKBH5#3后，SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低(均為P<0.001)(圖4)。因此，選取siALKBH5#3用于后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)的ALKBH5敲降模型。

圖4 不同siALKBH5轉(zhuǎn)染SRA01/04細(xì)胞后mRNA和蛋白水平的敲降效率驗(yàn)證 與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比，***P<0.001，****P<0.000 1。

2.4 敲降A(chǔ)LKBH5對LEC狀態(tài)的影響

2.4.1 ALKBH5轉(zhuǎn)染后細(xì)胞活力檢測CCK-8法檢測結(jié)果顯示，與Control組相比，UVB和UVB+siNC組SRA01/04細(xì)胞活力均明顯降低(均為P<0.000 1);與UVB+ siNC組和UVB組相比，UVB+siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞活力明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.000 1)(圖5)。

圖5 siALKBH5#3轉(zhuǎn)染對SRA01/04細(xì)胞活力的影響 與Control組相比，****P<0.000 1；與UVB組和UVB+siNC組相比，####P<0.000 1。

2.4.2 ALKBH5敲降后細(xì)胞內(nèi)DNA氧化損傷程度變化免疫熒光染色檢測結(jié)果顯示，與UVB+siNC組(熒光強(qiáng)度為33.8±2.7)相比，UVB+siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞的15A3染色(熒光強(qiáng)度為68.0±6.0)明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.39,P<0.000 1)(圖6)。

圖6 siALKBH5#3轉(zhuǎn)染對SRA01/04細(xì)胞DNA氧化損傷的影響

2.5 敲降A(chǔ)LKBH5對LEC的ODRGs表達(dá)的影響qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比，轉(zhuǎn)染siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞中TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6mRNA的表達(dá)均顯著升高，DCLRE1AmRNA的表達(dá)顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.01)；兩組間MGMT和MRE11AmRNA的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)(圖7)。

圖7 敲降A(chǔ)LKBH5對SRA01/04細(xì)胞ODRGs表達(dá)的影響 與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比，**P<0.01，****P<0.000 1。

3 討論

LEC是晶狀體中唯一的細(xì)胞類型，在維持晶狀體內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)態(tài)以及維持晶狀體光學(xué)透明度方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[18]。LEC內(nèi)的氧化應(yīng)激誘發(fā)因素主要包括外源性紫外線和內(nèi)源性的線粒體呼吸鏈所產(chǎn)生的活性氧(ROS)，當(dāng)ROS的產(chǎn)生超過細(xì)胞自身生理性的抗氧化防御機(jī)制時(shí)，就會導(dǎo)致氧化和抗氧化失衡，從而引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)[19-21]。有研究顯示，氧化應(yīng)激可導(dǎo)致每個(gè)生物體每天大約104個(gè)DNA發(fā)生氧化損傷[22]。氧化損傷往往是不可避免的，因此，在機(jī)制方面針對DNA損傷修復(fù)調(diào)控的研究在ARC的防治中具有重要意義。

m6A是發(fā)生在腺苷N6位的甲基化，在真核生物的mRNA中廣泛分布，調(diào)控多種生物活動過程，包括轉(zhuǎn)錄、翻譯、干細(xì)胞的維持和分化以及腫瘤的惡化等[23-25]。也有研究發(fā)現(xiàn)，在氧化應(yīng)激條件下可以通過多種機(jī)制調(diào)節(jié)m6A修飾水平，促進(jìn)DNA修復(fù)，維持基因穩(wěn)定性[8,16]。Xiang等[8]研究發(fā)現(xiàn)，紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷能特異性觸發(fā)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3在DNA損傷位點(diǎn)的瞬時(shí)募集，促進(jìn)m6A RNA水平全面升高，進(jìn)而誘導(dǎo)與核苷酸切除修復(fù)和跨損傷合成有關(guān)的 DNA 聚合酶κ(Pol κ)定位DNA損傷位點(diǎn)，參與損傷DNA的修復(fù)。Yu等[16]研究發(fā)現(xiàn)，在ROS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激過程中，ROS通過激活ERK/JNK信號通路促進(jìn)m6A去甲基化酶ALKBH5 SUMO化，抑制ALKBH5活性，誘導(dǎo)mRNA m6A修飾，從而提高氧化修復(fù)基因的穩(wěn)定性，促進(jìn)DNA修復(fù)過程。所以，m6A可以通過響應(yīng)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的DNA損傷來調(diào)節(jié)DNA修復(fù)，在此過程中m6A調(diào)節(jié)酶起到了重要的調(diào)控作用。

m6A調(diào)節(jié)酶可分為3種類型，共同參與m6A動態(tài)可逆的調(diào)控過程，即m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(MTC)，包括METTL3、METTL14、WTAP等，負(fù)責(zé)催化m6A；m6A去甲基化酶，包括FTO、ALKBH5，負(fù)責(zé)將m6A刪除；m6A識別酶，包括 YT521-B 同源域蛋白家族(YTHDF1/2/3 和 YTHDC1/2)等[21]，負(fù)責(zé)特異性識別m6A修飾位點(diǎn)并與之結(jié)合[26]。本研究通過對比ARC組和對照組患者晶狀體前囊膜樣本，發(fā)現(xiàn)m6A去甲基化酶ALKBH5在ARC患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高，這也一定程度上提示了m6A水平的改變。另外，在采用UVB以時(shí)間梯度照射LEC構(gòu)建的氧化損傷模型中，發(fā)現(xiàn)在UVB照射10 min后，ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著上升。因此，我們推測m6A去甲基化酶ALKBH5在LEC的氧化損傷過程中可能發(fā)揮著重要調(diào)控作用。

為了進(jìn)一步探究ALKBH5在UVB誘導(dǎo)的LEC氧化損傷模型中的功能，本研究首先利用靶向ALKBH5的小干擾RNA(siRNA)對其進(jìn)行了敲降實(shí)驗(yàn)，然后比較了各組中的細(xì)胞活力改變和DNA損傷情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，同樣經(jīng)過UVB照射10 min，敲降A(chǔ)LKBH5的LEC與未處理組和干擾組相比細(xì)胞活力更差；15A3熒光染色結(jié)果也同樣提示，遭受相同程度的UVB照射，敲降A(chǔ)LKBH5的細(xì)胞更易發(fā)生DNA損傷。因此，我們可以確定ALKBH5在LEC響應(yīng)氧化應(yīng)激損傷的過程中起到了保護(hù)作用，可對抗由UVB照射誘導(dǎo)的DNA損傷，具體機(jī)制尚不明確，仍然有待深入研究。

在DNA損傷修復(fù)過程中，首先檢查點(diǎn)激酶CHK1和CHK2被激活，然后啟動細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，從而引起細(xì)胞周期停滯和DNA修復(fù)[27]。DNA修復(fù)主要包括直接修復(fù)、堿基切除修復(fù)、核苷酸切除修復(fù)、錯(cuò)配修復(fù)、單鏈斷裂修復(fù)以及雙鏈斷裂修復(fù)等途徑[28]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，ALKBH5能調(diào)控ODRGs的表達(dá)[16,29-30]。課題組前期通過微陣列分析篩選和qRT-PCR檢測驗(yàn)證了96個(gè)ODRGs，發(fā)現(xiàn)了在ARC和對照患者樣本中顯著差異表達(dá)的11個(gè)ODRGs，這些差異表達(dá)的ODRGs在DNA修復(fù)途徑中發(fā)揮不同功能，促進(jìn)DNA的損傷修復(fù)——LIG1、MGMT、SMUG1參與堿基切除修復(fù)，DCLRE1A、RPA2參與核苷酸切除修復(fù)，TREX1、MSH2、MSH3參與錯(cuò)配修復(fù)，F(xiàn)ANCD2參與同源重組，MRE11A、XRCC6參與雙鏈斷裂修復(fù)[31]。對此，我們在LEC中靶向ALKBH5進(jìn)行敲低，觀察這些ODRGs的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6mRNA的表達(dá)在ALKBH5敲降后均顯著升高，而DCLRE1A mRNA的表達(dá)顯著降低，MGMT和MRE11AmRNA的表達(dá)則未見明顯差異，表明敲降A(chǔ)LKBH5后，細(xì)胞內(nèi)ODRGs的表達(dá)明顯改變。其中，表達(dá)升高最為顯著的FANCD2,在DNA損傷反應(yīng)的早期階段可發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用被ATM磷酸化，從而觸發(fā)細(xì)胞周期停滯[32]，同時(shí)還作為與其他信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路協(xié)同作用的檢查點(diǎn)機(jī)制的中心，在及時(shí)修復(fù)受損DNA中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[33]。此外，作為哺乳動物細(xì)胞中重要的3’-5’ DNA核酸外切酶，TREX1除了能優(yōu)先選擇錯(cuò)配的核苷酸，參與錯(cuò)配修復(fù)外[34]，還可通過降解細(xì)胞周期S期出現(xiàn)的單鏈DNA，阻止慢性ATM依賴性檢查點(diǎn)的激活[35]，多階段促進(jìn)DNA損傷修復(fù)。

綜上所述，ALKBH5在ARC患者以及UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷模型中表達(dá)升高。在UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷模型中靶向敲降A(chǔ)LKBH5，可導(dǎo)致細(xì)胞活力下降以及DNA損傷程度加重，同時(shí)ODRGs表達(dá)升高，促進(jìn)DNA損傷修復(fù)。而在ARC患者中，ALKBH5表達(dá)的顯著升高也意味著ODRGs的表達(dá)受到抑制，從而無法對LEC中長期累積的DNA損傷進(jìn)行及時(shí)修復(fù)，最終導(dǎo)致ARC的發(fā)生。因此，我們的結(jié)果證實(shí)了m6A去甲基化酶ALKBH5在UVB誘導(dǎo)的LEC氧化損傷模型中誘導(dǎo)性表達(dá)上升，敲降A(chǔ)LKBH5可影響細(xì)胞內(nèi)ODRGs表達(dá)變化，參與調(diào)控LEC內(nèi)損傷DNA的修復(fù)，阻止ARC的發(fā)生。