分散固相萃取法與固相萃取法在氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定多組分農(nóng)殘中的比較＊

閆 玉，宋 姝，袁 寧，張月輝，劉家陽，趙 飛，于 晨，田 甜，李彥博

（遼寧省檢驗(yàn)檢測認(rèn)證中心，遼寧 沈陽 110000）

現(xiàn)代農(nóng)藥技術(shù)為滿足農(nóng)作物多種病害蟲害的防治要求，實(shí)現(xiàn)少次噴灑多種預(yù)防的效果，生產(chǎn)的農(nóng)藥基本為混合型農(nóng)藥，以多種復(fù)雜有機(jī)化合物復(fù)配而成[1-3]。因此對蔬菜水果中農(nóng)藥殘留的檢測方法要求很高，而且農(nóng)藥很多化合物組分結(jié)構(gòu)復(fù)雜且相近，多存在同分異構(gòu)現(xiàn)象[4]，所以在食品檢測中多采用氣相色譜聯(lián)用質(zhì)譜法進(jìn)行組分分析。氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（GC-MS/MS）檢測具有靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，正好滿足農(nóng)藥多殘留分析的需求[5-8]。

同時農(nóng)藥中很多化合物易分解且具有易揮發(fā)遷移等特性[9-11]，而且不同蔬菜水果特性不同，在進(jìn)行上機(jī)測定時，帶來的干擾和影響也大不相同[12-14]。在實(shí)驗(yàn)中還有多次進(jìn)樣帶來進(jìn)樣口、離子源的污染，導(dǎo)致農(nóng)藥中某些化合物的檢測靈敏度逐漸下降，從而影響檢測結(jié)果[15-17]。雖然可以通過更換襯管、割柱頭以及清洗離子源等操作對儀器進(jìn)行維護(hù)，但這無疑增加了檢測的成本與時間。因此，對樣品的凈化成為提高方法耐用性的關(guān)鍵，所以前處理方法的選擇也尤為重要，也是影響結(jié)果精確度和準(zhǔn)確性的重要前提[18-19]。

本實(shí)驗(yàn)選取含有葉綠素成分較高的菠菜為作為空白基質(zhì)[20]，分別采用分散固相萃?。≦uEChERS）和固相萃取2 種方法進(jìn)行比較，通過加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，考察2 種前處理方法之間對有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、氨基甲酸酯等多種農(nóng)藥化合物的回收率和準(zhǔn)確度的差異。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

島津GCMS-TQ8050 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（日本島津公司）。

TTL-DCⅡ型氮吹儀（余姚市長江溫度儀表廠）。

HeraeusMultifu.geX1R 離心機(jī)（賽默飛世爾科技有限公司）。

T25 高速勻漿機(jī)（德國ⅠKA 公司）。

乙腈、丙酮（色譜純，F(xiàn)isher 公司）。

提取鹽包：4 g 硫酸鎂、1 g 氯化鈉、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g 檸檬酸氫二鈉（迪馬公司）。

凈化管：900 mg 硫酸鎂、150 mg 乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠及150 mg 十八烷基硅烷鍵合硅膠（迪馬公司）。

凈化柱：石墨化碳黑-氨基復(fù)合柱。

0.22 μm 尼龍濾膜（上海安譜公司）。

實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q 超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 μg/mL）

準(zhǔn)確吸取農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50 mL 置于5 mL 容量瓶中，用丙酮溶解并稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL 的農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的配制

環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1.0 mg/mL）：準(zhǔn)確稱取環(huán)氧七氯10.00 mg 標(biāo)準(zhǔn)品置于10 mL 容量瓶中，用丙酮溶解并稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL 的環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.0 μg/mL）：準(zhǔn)確移取上述環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1.0 mg/mL）0.050 mL于10 mL容量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為5.0 μg/mL 的環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.2.3 混合標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備

分別準(zhǔn)確移取1.0 μg/mL 農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.05 mL、0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL 于 5 mL容量瓶，用丙酮定容至刻度，配成混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，質(zhì)量濃度分別為5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL。準(zhǔn)確移取以上各濃度標(biāo)準(zhǔn)系列工作液1 mL 分別添加至經(jīng)提取、凈化步驟處理的5份空白樣品處理吹干后的殘渣中，最后加入質(zhì)量濃度為5.0 μg/mL 的環(huán)氧七氯標(biāo)準(zhǔn)中間液20 μL，渦旋混合均勻，制得質(zhì)量濃度分別為5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL 的系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 前處理方法

1.3.1 分散固相萃取法（QuEChERS 法）

稱取5.00 g 粉碎后的試樣（精確至0.01 g）于50 mL塑料離心管中，加入10 mL 乙腈、4 g 硫酸鎂、1 g 氯化鈉、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g 檸檬酸氫二鈉及1 顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩1 min 后4 200 r/min離心5 min。吸取6 mL 上清液加到內(nèi)含900 mg 硫酸鎂及150 mg PSA 的15 mL 塑料離心管中。渦旋混勻1 min，4 200 r/min 離心5 min，準(zhǔn)確吸取1 mL 上清液于10 mL 試管中，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?。加入質(zhì)量濃度為5 μg/mL 的環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，加入1 mL 丙酮復(fù)溶，渦旋混勻，過微孔濾膜，用于測定。

1.3.2 固相萃取

稱取5.00 g 粉碎后的試樣（精確至0.01 g）于50 mL塑料離心管中，加入10 mL 水渦旋混勻，靜置30 min，加入20 mL 乙腈，15 000 r/min 高速勻漿2 min，加入5 g 氯化鈉劇烈振蕩，5 000 r/min 離心5 min，準(zhǔn)確吸取5 mL 上清液，40 ℃水浴旋蒸至1 mL，氮?dú)獯抵两?，待凈化。? mL 乙腈-甲苯溶液（3+1）預(yù)洗石墨化碳黑-氨基復(fù)合柱，棄去流出液。下續(xù)150 mL 雞心瓶，放入固定架上。將上述待凈化試樣用3 mL 乙腈-甲苯溶液（3+1）洗滌至固相萃取柱中，再用2 mL 乙腈-甲苯溶液（3+1）洗滌，并將洗滌液移入柱中，重復(fù)2 次。用25 mL 乙腈-甲苯溶液（3+1）淋洗固相萃取柱，收集上述所有流出液于150 mL 雞心瓶中，40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至近干。加入5.0 μg/mL 環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液20 μL，加入1.0 mL 丙酮復(fù)溶，過微孔濾膜，用于測定。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：SH-Rtx-1701（30 m×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25 μm（膜厚））。

柱溫：40 ℃保持1 min，以40 ℃/min 的速率升溫至120 ℃，保持0 min，以5 ℃/min 的速率升溫至240 ℃，保持 0 min，以 12 ℃/min 的速率升溫至 300 ℃，保持10 min。

進(jìn)樣口溫度：280 ℃。

載氣（高純氦氣）線速：36.1 cm/s 恒線速。

進(jìn)樣量：1 μL。

1.4.2 質(zhì)譜條件

接口溫度：280 ℃。

離子源：電子轟擊源（EⅠ源）。

離子源溫度：230 ℃。

掃描方式MRM。

農(nóng)殘化合物質(zhì)譜條件如表1 所示。

表1 農(nóng)殘化合物質(zhì)譜條件

表1（續(xù)）

2 結(jié)果與討論

2.1 分散固相萃取法

標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性相關(guān)性、加標(biāo)回收率及RSD 值如表2 所示。

表2 分散固相萃取法所得曲線方程、線性相關(guān)性、加標(biāo)回收率及RSD 值

表2（續(xù)）

加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)方法：準(zhǔn)確稱取5.000 g 樣品6 份，分別加入農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1.0 μg/mL）0.10 mL，提取、凈化過程同樣品處理，進(jìn)樣，測定回收率，計算 RSD 值。

2.2 固相萃取法

標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性相關(guān)性、加標(biāo)回收率及RSD 值如表3 所示。

表3 固相萃取法所得曲線方程、線性相關(guān)性、加標(biāo)回收率及RSD 值

表3（續(xù)）

加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)方法同2.1。

2.3 分析討論

從結(jié)果可以看出該儀器條件下，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性均滿足一般實(shí)驗(yàn)對結(jié)果的要求，35 種農(nóng)藥成分的線性相關(guān)性均在0.995 以上。

從RSD 值來看，分散固相萃取法和固相萃取法的平均標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較好，2 種前處理方法均可滿足實(shí)驗(yàn)要求。

通過對比每個組分的加標(biāo)回收率可以發(fā)現(xiàn)，部分組分農(nóng)藥采用分散固相萃取前處理方法的加標(biāo)回收率優(yōu)于采用固相萃取。這是由于固相萃取法中使用的氨基炭黑復(fù)合柱中吸附結(jié)構(gòu)致密緊實(shí)，吸附性強(qiáng)，而很多農(nóng)藥的分子結(jié)構(gòu)多為長鏈性和平面片層結(jié)構(gòu)，被吸附后不易洗脫，造成回收率較低；雖然分散固相萃取組分也含有吸附能力的物質(zhì)，但由于結(jié)構(gòu)松散，農(nóng)藥組分回溶較為容易，所以回收率反而較高。

3 結(jié)論

通過對比這2 組實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，分散固相萃取法可以很好地實(shí)現(xiàn)多組分農(nóng)殘的檢測，部分組分的回收率優(yōu)于固相萃取法。分散固相萃取法相較于固相萃取法減少了凈化和洗脫環(huán)節(jié)，有效節(jié)省了有機(jī)試劑的使用量，縮短了前處理時間，且分散固相萃取管的價格遠(yuǎn)低于固相萃取柱，在保證實(shí)驗(yàn)快捷、高效、結(jié)果準(zhǔn)確性的前提下，還有效降低了實(shí)驗(yàn)成本。