基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及數(shù)據(jù)挖掘分析生地黃-牡丹皮-甘草治療尋常型銀屑病的機(jī)制*

藺莉，閆小寧，李文彬，楊霄，張書嬋

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046；2.陜西省中醫(yī)醫(yī)院，陜西 西安 710003）

銀屑?。╬soriasis），亦稱牛皮癬，中醫(yī)稱之為白疕，該病為臨床常見的慢性皮膚病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且易復(fù)發(fā)[1]。中醫(yī)學(xué)將致病因素分為外感、血熱、毒蘊(yùn)三方面[2-4]。銀屑病發(fā)病以冬春最顯著，近些年發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[5]。現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)則主要將銀屑病分為血熱、血瘀、血燥3種證型[6]。

中醫(yī)學(xué)治療銀屑病處方思路獨(dú)具特色，并具有安全性高、療效佳等優(yōu)點(diǎn)，根據(jù)中醫(yī)學(xué)的辨證論治原則，銀屑病在不同的發(fā)展階段有不同的臨床特點(diǎn)，應(yīng)在不同發(fā)病階段采用不同的治療方法[7]。然而，由于臨床經(jīng)驗(yàn)的差異和中藥的復(fù)雜性，處方之間存在很大的差異。本研究基于數(shù)據(jù)挖掘的方法，從大量經(jīng)過(guò)臨床證實(shí)有效的處方中挖掘出最核心的藥對(duì)，即生地黃、牡丹皮、甘草。其中生地黃、牡丹皮屬于清熱類藥物，均具有清熱涼血的功效，甘草是補(bǔ)虛類中藥，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、緩急止痛的功效。三藥配伍，共奏清熱涼血之功效，且三味藥物均具有抗炎、抗氧化等藥理作用。本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接的方法，對(duì)生地黃、牡丹皮、甘草的作用機(jī)制進(jìn)一步探索，探討核心藥對(duì)治療尋常型銀屑病的主要活性成分及作用靶點(diǎn)，為臨床優(yōu)化用藥和篩選新化合物提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源 從CNKI數(shù)據(jù)庫(kù)中收集治療尋常型銀屑病的中藥處方。文獻(xiàn)檢索按主題、標(biāo)題和摘要進(jìn)行，搜索關(guān)鍵詞“中藥”或“中草藥”并“方藥”或“處方”并“尋常型銀屑病”；時(shí)間跨度從數(shù)據(jù)庫(kù)建庫(kù)至2021年3月5日。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)（1）首次診斷為尋常型銀屑病；（2）口服中藥湯劑治療尋常型銀屑病的臨床研究；（3）處方應(yīng)有效。以治療組與對(duì)照組療效相比是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為界定標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)（1）文獻(xiàn)綜述；（2）實(shí)驗(yàn)研究；（3）未公布具體中藥處方或處方數(shù)據(jù)不完整。

1.4 數(shù)據(jù)分析 從符合條件的研究中提取出中藥處方，并建立數(shù)據(jù)庫(kù)。然后用SPSS軟件進(jìn)行頻率分析。應(yīng)用SPSS Modeler軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)結(jié)果可視化，運(yùn)用Apriori建模進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，從所有處方中識(shí)別出治療尋常型銀屑病的核心中藥組合。通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)整理找出尋常型銀屑病的差異基因，通過(guò)TCMSP、Batman-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索核心配伍的主要化合物成分和作用靶點(diǎn)，并在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)和Disgenet數(shù)據(jù)庫(kù)檢索尋常型銀屑病的相關(guān)靶點(diǎn)。將差異基因與尋常型銀屑病基因靶點(diǎn)與核心藥對(duì)組合靶點(diǎn)進(jìn)行合并取交集，對(duì)核心藥物組合治療尋常型銀屑病的潛在作用靶標(biāo)進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）富集分析，使用Cytoscape軟件構(gòu)建“疾病-藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖和活性成分與疾病共同靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interactions，PPI）網(wǎng)絡(luò)，得出最具活性化合物及核心靶點(diǎn)后，通過(guò)Auto Dock工具（v.1.5.6）和PyMOL（v.2.3）制備受體和配體，然后通過(guò)Autodock Vina（v.1.1.2）進(jìn)行對(duì)接驗(yàn)證，評(píng)價(jià)配體與靶蛋白結(jié)合強(qiáng)度的親和力，用Pymol 2.3對(duì)對(duì)接構(gòu)象進(jìn)行了可視化分析并提供最佳構(gòu)象。

2 結(jié)果

2.1 數(shù)據(jù)篩選 共獲得890項(xiàng)研究。根據(jù)上述納入和排除標(biāo)準(zhǔn)篩選，最終納入175項(xiàng)研究，并提取出治療方劑178首。參照2015年版《中華人民共和國(guó)國(guó)藥典》一部和《中藥學(xué)》對(duì)178首方劑中的藥物名稱進(jìn)行統(tǒng)一。

2.2 處方用藥頻數(shù)及藥物功效分析 對(duì)中藥名稱進(jìn)行規(guī)范化處理后，共提取出259種中藥，累計(jì)出現(xiàn)頻數(shù)2 076次，取用藥頻數(shù)在前10%的中藥作為高頻藥物，共27種（頻數(shù)≥18），累計(jì)頻數(shù)1 288次（占總頻數(shù)的62.04%）。單味中藥具體使用情況見表1，其中使用頻率最高的前五味中藥分別是生地黃（64.61%）、甘草（56.18%）、赤芍（50.56%）、牡丹皮（50.56%）、土茯苓（42.70%）。27味中藥主要以清熱藥為主，其次是活血化瘀藥、解表藥、補(bǔ)虛藥等。

表1 單味中藥的使用情況（頻數(shù)≥18）

2.3 高頻藥物藥性、藥味及歸經(jīng)分析 27味高頻中藥的藥性主要以寒、溫、平為主，其中寒性占比最高，但未出現(xiàn)涼性及熱性；藥味主要以甘、辛、苦為主，其中苦味出現(xiàn)最多，未見酸性藥物；藥物歸經(jīng)主要以肝經(jīng)為主，占25.35%，其次是心經(jīng)（21.13%）、胃經(jīng)（12.68%）。（見圖1）

圖1 高頻中藥性味、歸經(jīng)分布圖

2.4 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則分析高頻中藥組方規(guī)律 應(yīng)用SPSS Modeler軟件對(duì)高頻藥物（使用頻數(shù)≥18）進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，藥物間關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)見圖2，Apriori算法是關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘的經(jīng)典算法，基于Apriori規(guī)則，設(shè)置支持度為20，置信度為80%，最大前項(xiàng)數(shù)為5，最終在178首方劑中提取出14個(gè)核心藥物組合，潛在藥物組合的提升度均大于1，具體參數(shù)見表2，說(shuō)明這些藥物組合在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中置信度最高的組合是“生地黃-牡丹皮-甘草”。

表2 高頻藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則組合

圖2 高頻中藥關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)

2.5 核心藥物組合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)機(jī)制分析

2.5.1 尋常型銀屑病差異基因、作用靶點(diǎn)及核心藥物組合活性成分、作用靶點(diǎn)收集 以“psoriasis vulgaris”為關(guān)鍵詞，檢索GEO數(shù)據(jù)庫(kù)，下載GSE7610（有機(jī)體：智人）的基因芯片數(shù)據(jù)原始文件，數(shù)據(jù)共26個(gè)樣本。樣本采用GPL96人類基因表達(dá)陣列平臺(tái)檢測(cè)，13例正常對(duì)照組，13例疾病組。以logFC與P值作為篩選條件，所篩選出的基因被視為有顯著差異表達(dá)基因，利用R語(yǔ)言軟件繪制火山圖及熱圖進(jìn)行差異基因可視化。（見圖3）其中無(wú)顯著表達(dá)差異的基因標(biāo)記為黑點(diǎn)，在尋常型銀屑病皮膚樣本中表達(dá)上調(diào)的差異基因標(biāo)記為紅點(diǎn)，共有58個(gè)，下調(diào)為藍(lán)點(diǎn)，共115個(gè)。最終得出差異表達(dá)基因共173個(gè)。

圖3 尋常型銀屑病差異基因表達(dá)火山圖

“生地黃-牡丹皮-甘草”是核心藥物組合，在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)TCMSP、Batman-TCM搜索三味中藥的生物活性化合物，無(wú)法在數(shù)據(jù)庫(kù)搜索到的中藥，通過(guò)文獻(xiàn)查找補(bǔ)充，并通過(guò)SwissTarget Predicition平臺(tái)預(yù)測(cè)化合物靶點(diǎn)。在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，以口服生物利用度（OB）≥30%和藥物相似度（DL）≥0.18為篩選標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)（ADME），篩選出候選化合物。利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)將所有目標(biāo)名稱轉(zhuǎn)換成基因符號(hào)用于后續(xù)研究。并以尋常型銀屑病為搜索詞，查詢GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)和Disgenet數(shù)據(jù)庫(kù)，將搜索結(jié)果合并，刪除重復(fù)序列，從而得出核心中藥和尋常型銀屑病之間的重疊目標(biāo)，共得到1 075個(gè)尋常型銀屑病相關(guān)目標(biāo)。將差異基因與尋常型銀屑病基因靶點(diǎn)與“生地黃-牡丹皮-甘草”藥物組合靶點(diǎn)進(jìn)行合并取交集并制作Venn圖（見圖4），得到藥物組合與數(shù)據(jù)庫(kù)中尋常型銀屑病相關(guān)靶點(diǎn)、GEO差異基因的交集有108個(gè)。

圖4 疾病靶點(diǎn)及共同靶點(diǎn)Venn圖

2.5.2 “疾病-藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)和PPI網(wǎng)絡(luò)分析 本研究構(gòu)建了兩個(gè)網(wǎng)絡(luò)，均使用Cytosscape3.8.2構(gòu)建圖解網(wǎng)絡(luò)，并利用網(wǎng)絡(luò)分析儀插件計(jì)算的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，用度值結(jié)合其他拓?fù)鋮?shù)來(lái)描述網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)的重要性，從而篩選出主要的生物活性化合物和目標(biāo)。（1）“中藥-生物活性化合物-疾病治療靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)顯示了“生地黃-牡丹皮-甘草”、生物活性化合物和治療靶點(diǎn)之間的相互作用。該網(wǎng)絡(luò)由202個(gè)節(jié)點(diǎn)（3個(gè)中藥，91個(gè)生物活性化合物，108個(gè)靶標(biāo)）和933條邊組成。（見圖5）91個(gè)生物化合物度值見表3，其中槲皮素及山奈酚的交互作用最明顯，槲皮素的作用靶點(diǎn)最多，度值為172，其次是山奈酚度值為70。表4顯示了最具交互作用的10個(gè)生物活性化合物的信息。（2）蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)顯示了治療靶點(diǎn)之間的相互作用。用檢索工具對(duì)治療靶點(diǎn)的PPI數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以檢索相互作用的基因/蛋白質(zhì)平臺(tái)（String），將物種確定為“智人”，最低置信度設(shè)置為0.9，根據(jù)PPI結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示16個(gè)目標(biāo)沒有參與蛋白質(zhì)相互作用，最終的PPI網(wǎng)絡(luò)由92個(gè)節(jié)點(diǎn)和420條邊組成。（見圖6）對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)中的節(jié)點(diǎn)進(jìn)行拓?fù)鋮?shù)篩選，分別取Degree、Average Shortest Path Length、Betweenness centrality、Closeness centrality四項(xiàng)參數(shù)中位數(shù)，分別是7、2.527 472 53、0.004 839 895、0.395 652 17。以Degree值大于2倍中位數(shù)，其余各項(xiàng)參數(shù)參照中位數(shù)進(jìn)行篩選，其中17個(gè)目標(biāo)符合條件，是該網(wǎng)絡(luò)的主要指標(biāo)。（見圖6）主要靶點(diǎn)與其他蛋白質(zhì)廣泛相互作用，提示它們?cè)趯こＰ豌y屑病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，其中STAT3、TNF及JUN三項(xiàng)占網(wǎng)絡(luò)中作用最突出，所以將其作為最具橋梁作用的靶點(diǎn)與核心化合物進(jìn)行分子對(duì)接。

表3 生物活性化合物及其Degree值

表4 前10 個(gè)生物活性化合物及其參數(shù)

圖5 “藥物-生物活性化合物-疾病靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖

圖6 PPI 網(wǎng)絡(luò)及核心靶點(diǎn)條形圖

2.5.3 GO功能富集與KEGG通路富集分析 為了闡明核心中藥對(duì)尋常型銀屑病的治療機(jī)制，利用注釋、可視化和集成發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（DAVID）對(duì)108個(gè)治療靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體論（GO）功能富集分析和京都基因和基因組百科全書（KEGG）途徑富集分析。其中GO富集分析由細(xì)胞成分（CC）、分子功能（MF），生物過(guò)程（BP）三部分組成，結(jié)果數(shù)值P＜0.05和錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（FDR）＜0.05被認(rèn)為是顯著的，經(jīng)過(guò)篩選后共得出266個(gè)BP條目，21個(gè)CC條目及40個(gè)MF條目。此外，106個(gè)KEGG途徑條目得到豐富，其中許多是特定類型癌癥的途徑。選取GO富集每項(xiàng)中前五項(xiàng)最顯著的條目，使用R軟件的“gg plot 2”軟件包繪制條形圖（見圖7），GO分析結(jié)果表明，對(duì)BP來(lái)說(shuō)，主要以RNA聚合酶2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄正調(diào)控、基因表達(dá)正調(diào)控、藥物反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、缺氧反應(yīng)等條目為主，主要參與基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄及凋亡等的調(diào)控；對(duì)MF來(lái)說(shuō)，靶點(diǎn)主要負(fù)責(zé)酶結(jié)合、相同蛋白結(jié)合及提高蛋白同源二聚化活性、細(xì)胞因子活性等；CC的靶點(diǎn)主要分布于胞外間隙、胞外區(qū)、細(xì)胞質(zhì)、膜筏等。并選取前10項(xiàng)最豐富KEGG通路繪制氣泡圖（見圖8），由圖可見，KEGG通路主要以癌癥相關(guān)通路、TNF信號(hào)通路、乙型肝炎等通路為主。

圖7 GO 富集分析圖

圖8 KEGG 富集分析氣泡圖

2.6 核心化合物-核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接驗(yàn)證 為評(píng)估核心中藥的主要生物活性化合物與關(guān)鍵靶蛋白的結(jié)合勢(shì)，從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)（PDB）下載STAT3、TNF、JUN 3種目標(biāo)蛋白-原配體復(fù)合物的三維晶體結(jié)構(gòu)，保存為“.pdb”文件，通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)查詢主要目標(biāo)生物活性化合物的Pubchem ID，并通過(guò)Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)查詢目標(biāo)生物活性化合物的三維分子結(jié)構(gòu)，并以SDF格式保存，使用Open Babel 2.4.1將該格式轉(zhuǎn)換為“.mol2”格式。配體和受體是通過(guò)AutoDock工具（v.1.5.6）和PyMOL（v.2.3）制備的，制備受體的工作包括從受體晶體結(jié)構(gòu)中刪除原配體和水分子，添加非極性氫，計(jì)算Gasteiger部分電荷，所制備的受體和配體均以pdbqt格式保存。

然后，用AutodockVina（v.1.1.2）評(píng)價(jià)配體與靶蛋白結(jié)合強(qiáng)度的親和力。親和力＜-5.00 kcal/mol表示結(jié)合強(qiáng)度好，親和力＜-7.00 kcal/mol表示結(jié)合強(qiáng)度令人滿意。兩個(gè)生物活性化合物與核心靶點(diǎn)的結(jié)合力見表5，用Pymol 2.3對(duì)對(duì)接構(gòu)象進(jìn)行了可視化和分析。（見圖9）

表5 槲皮素、山奈酚與STAT3、TNF、JUN 分子對(duì)接評(píng)分（單位：kcal/mol）

圖9 分子對(duì)接構(gòu)象圖

3 討論

本研究主要分為兩個(gè)部分，以實(shí)現(xiàn)從臨床經(jīng)驗(yàn)到分子機(jī)制的推論。第一部分是通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘從豐富的中藥處方中找出尋常型銀屑病的治療方藥。第二部分從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度推導(dǎo)了核心中藥對(duì)尋常型銀屑病的治療靶點(diǎn)和作用機(jī)理。首先，利用數(shù)據(jù)挖掘的方法，對(duì)中藥治療尋常型銀屑病的中藥處方進(jìn)行分析，其中使用頻數(shù)最高的有生地黃、甘草、赤芍、牡丹皮、土茯苓等。對(duì)使用頻數(shù)排在前10%的27味中藥進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)其藥味、藥性及歸經(jīng)。高頻藥物的藥性主要以寒、溫、平為主，藥味主要以甘、辛、苦為主，歸經(jīng)主要以肝經(jīng)為主。根據(jù)中藥的使用頻率和關(guān)聯(lián)規(guī)則，確定了生地黃-牡丹皮-甘草作為核心藥物組合，其中生地黃、牡丹皮屬于清熱類藥物，均具有清熱涼血的功效[8]，甘草是補(bǔ)虛類中藥，具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、緩急止痛的功效[9]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為白疕表現(xiàn)出的斑疹、脫屑為熱入血分的表現(xiàn)，往往從血瘀、血熱、血燥立法選方，清熱涼血類中藥在治療尋常型銀屑病時(shí)常被選擇。隨著對(duì)白疕的認(rèn)識(shí)與治療經(jīng)驗(yàn)的豐富，情志因素對(duì)銀屑病發(fā)展的影響被越來(lái)越重視，而肝主情志，在疏達(dá)氣機(jī)方面起著至關(guān)重要的作用，因此肝經(jīng)藥物在治療銀屑病中使用頻率較高[10]。

通過(guò)從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)收集關(guān)于尋常型銀屑病的數(shù)據(jù)集，篩選出差異基因并進(jìn)行分析，與PV疾病數(shù)據(jù)庫(kù)收集靶點(diǎn)及生地黃-牡丹皮-甘草的靶標(biāo)進(jìn)行合并并取交集，得到的重疊目標(biāo)被認(rèn)為是潛在的治療目標(biāo)。對(duì)重疊目標(biāo)進(jìn)行GO和KEGG功能富集分析，結(jié)果表明，治療靶標(biāo)可能主要參與基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄及凋亡等的調(diào)控。涉及的信號(hào)途徑主要包括TNF信號(hào)通路及其他與腫瘤相關(guān)通路等。其中腫瘤壞死因子（TNF）是銀屑病發(fā)病的重要炎癥細(xì)胞因子[11]。

本研究結(jié)果表明生地黃-牡丹皮-甘草藥對(duì)共有91個(gè)生物活性化合物，對(duì)Degree值排名前十的活性成分進(jìn)行分析。主要的生物活性化合物是類黃酮，已有研究證實(shí)槲皮素、山奈酚、刺芒柄花素、柚皮苷、甘草查爾酮A等黃酮類化合物具有明顯的抗銀屑病作用[12-13]，這些化合物具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗炎和抗氧化的作用。其中，槲皮素具有抗炎、抗氧化、舒張血管、保護(hù)肝臟和抗癌等藥理作用[14]，其作用機(jī)制可能與改善抗氧化和抗炎狀態(tài)及抑制NF-κB信號(hào)通路的激活有關(guān)。山奈酚是一種天然的黃酮醇，具有很強(qiáng)的抗炎、抗氧化和抗癌作用[15]，可以減少牛銀屑病病變中CD3+T細(xì)胞的浸潤(rùn)及主要促炎性細(xì)胞因子（IL-6、IL-17A和TNF-α）的基因表達(dá)。此外，山奈酚還能下調(diào)皮膚中的促炎性核因子κB（NF-κB）信號(hào)。刺芒柄花素同樣具有抗炎的作用[16]。柚皮苷是一種具有3個(gè)羥基部分的黃烷酮類似物，可以抑制IL-6過(guò)表達(dá)，達(dá)到基線控制。此外，柚皮苷還具有免疫調(diào)節(jié)，抗炎作用，可以降低銀屑病患者h(yuǎn)PBMC中的mRNA表達(dá)和所有促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生[17]。甘草查爾酮A可以誘導(dǎo)ROS的形成并具有抗氧化作用。

核心藥對(duì)的活性成分共對(duì)應(yīng)273個(gè)靶點(diǎn)，與尋常型銀屑病相關(guān)基因靶點(diǎn)及GEO差異基因的交集有108個(gè)。其中STAT3、TNF、JUN、AKT1、TP53等被確定核心藥對(duì)治療尋常型銀屑病的主要目標(biāo)，并在PPI網(wǎng)絡(luò)中作出了重要貢獻(xiàn)，其中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子。該因子介導(dǎo)了大多數(shù)參與銀屑病發(fā)病的細(xì)胞因子的信號(hào)，包括白細(xì)胞介素（IL）-23/IL-17/IL-22軸，在角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增生與異常分化、與炎癥細(xì)胞相互作用、真皮血管增生等重要病理過(guò)程中起關(guān)鍵作用[18]。TNF可以促進(jìn)人HaCaT和正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（NHEK S）的促炎因子IL-6、CXCL 8和VEGF表達(dá)，還可以通過(guò)mTOR信號(hào)刺激皮膚炎癥[19]。JUN是二聚體轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物AP-1的核心成員，對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）表達(dá)有直接轉(zhuǎn)錄作用，角質(zhì)形成細(xì)胞中AP-1的下調(diào)可誘發(fā)銀屑病。JUN可作為表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）表達(dá)過(guò)程中角質(zhì)形成細(xì)胞增殖/分化的正調(diào)節(jié)因子，從而起到治療銀屑病的作用[20]。Akt1可以促進(jìn)亞型絲氨酸473磷酸化的上調(diào)，導(dǎo)致高濃度CCL 3通過(guò)K48鍵泛素化促進(jìn)FOXP3降解，從而降低FOXP3的穩(wěn)定性。CCL 3-mTORC2亞PKB/Akt1S473磷酸化軸在FOXP 3+Tregs中具有重要作用，能促進(jìn)銀屑病的發(fā)生發(fā)展[21]。Tp53對(duì)銀屑病治療的調(diào)節(jié)因子-1具有促凋亡功能，P53蛋白在細(xì)胞增殖調(diào)控中起著重要的作用[22-23]。

綜上所述，本研究通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘?qū)χ兴幹委煂こＰ豌y屑病的處方進(jìn)行分析與關(guān)聯(lián)規(guī)則建模，從而得出生地黃-牡丹皮-甘草這一核心中藥組合，并利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法推導(dǎo)了核心中藥對(duì)尋常型銀屑病的治療靶點(diǎn)和作用機(jī)理。研究表明生地黃-牡丹皮-甘草可以通過(guò)槲皮素、山奈酚等類黃酮活性成分單體發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗炎和抗氧化作用，通過(guò)STAT3、TNF等信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)尋常型銀屑病的治療作用。最后，對(duì)最具活性生物化合物（槲皮素、山奈酚）與STAT3、TNF及JUN三項(xiàng)最具橋梁作用的靶點(diǎn)進(jìn)行了分子對(duì)接模擬，對(duì)接結(jié)果表明2種活性化合物均與STAT3、TNF、JUN緊密結(jié)合，從而為其發(fā)揮藥理作用提供了佐證，但仍需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證來(lái)進(jìn)一步證實(shí)這一結(jié)論。