北方馬口魚全人工繁殖、胚胎與仔魚發(fā)育研究

駱小年，段友健*，張曉靜，阿麗達(dá)·夏木西丁，李姣，吳晨，李文康，季辰躍，常建太

(1.大連海洋大學(xué) 水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧 大連 116023；2.遼寧省北方魚類應(yīng)用生物學(xué)與增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

馬口魚Opsariichthysbidens，俗稱馬口、馬魚、桃花魚和大口扒，隸屬于鯉形目Cypriniformes鯉科Cyprinidae魚丹亞科Danioninae馬口魚屬Opsariichthys，在中國(guó)各江河均有分布，屬于小型兇猛魚類[1]。馬口魚喜棲息于湖泊、水庫(kù)中上層，在山澗溪流等清澈水體中也有分布，多與寬鰭鱲Zaccoplatypus棲息于同一水體。因其在大水面中能捕食鰱Hypophthalmichthysmolitrix、鳙Aristichrhysnobilis等其他主要經(jīng)濟(jì)魚類，馬口魚曾被視為重要的敵害魚類，成為被清除的對(duì)象[2-3]。近年來(lái)，中國(guó)水庫(kù)的魚類品種呈下降趨勢(shì)，特別是肉食性魚類明顯減少，水庫(kù)的生態(tài)系統(tǒng)遭到破壞。馬口魚因易捕撈，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，深受消費(fèi)者的歡迎，故自然資源也急劇下降[4-5]。

目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)馬口魚的研究主要集中在分類學(xué)[6-8]、基礎(chǔ)生物學(xué)[9-12]、生物地理學(xué)[13-14]和分子生物學(xué)[13-15]等方面，對(duì)其繁殖生物學(xué)的研究也主要集中在南方地區(qū)[16-19]，北方馬口魚全人工繁殖尚未見(jiàn)報(bào)道。本項(xiàng)目組從2018年起,在遼寧省遼陽(yáng)縣進(jìn)行了馬口魚的池塘馴養(yǎng)和全人工繁殖試驗(yàn)，首次實(shí)現(xiàn)了馬口魚全人工繁殖和苗種的規(guī)?；a(chǎn)。本研究中，進(jìn)行了北方地區(qū)馬口魚全人工繁殖試驗(yàn)，觀察了其胚胎和仔魚發(fā)育情況，以期為馬口魚的人工繁殖和苗種規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)于2018年5月—2021年7月在遼寧省遼陽(yáng)縣興大養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。馬口魚親魚采自遼寧省本溪滿族自治縣關(guān)門山水庫(kù)，采用抬網(wǎng)和燈光誘捕的方法，共捕撈親魚10組(雌魚和雄魚各10尾)，平均體質(zhì)量為358.0 g(265～620 g)。

1.2 方法

1.2.1 馬口魚親魚來(lái)源及全人工繁殖路線 將親魚用塑料袋充氧運(yùn)回遼陽(yáng)縣興大養(yǎng)殖場(chǎng)后，于2018年6月13日開始進(jìn)行人工催產(chǎn)，獲F1代水花魚苗1.4萬(wàn)尾，在2 668 m2池塘中進(jìn)行培育，共獲秋片7 500尾，平均體質(zhì)量為38.0 g/尾，秋片越冬成活率為98.7%。2019年4月20日將越冬魚種7 500尾(平均體質(zhì)量為35.0 g/尾)轉(zhuǎn)移至6 670 m2池塘中養(yǎng)殖，至2019年11月3日獲馬口魚7 200尾，其平均體長(zhǎng)為23.6 cm(19.3～28.5 cm)，平均體質(zhì)量為185.0 g(80.0～267.0 g)，留作后備親魚。這些親魚于2020年繁殖F2代夏花70萬(wàn)尾，于2021年繁殖F2代夏花40萬(wàn)尾。其全人工繁殖路線如圖1所示。

圖1 馬口魚全人工繁殖路線圖Fig.1 Artificial propagation routine map of Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens

1.2.2 馬口魚的人工繁殖

1)親魚暫養(yǎng)、雌雄成熟度鑒選。馬口魚催情時(shí)間選擇在5—6月，于2021年5月10日，將馬口魚親魚從池塘運(yùn)回孵化車間的水泥池中暫養(yǎng)。馬口魚喜跳躍，暫養(yǎng)時(shí)應(yīng)盡量避免親魚受到驚嚇，撞壁受傷死亡。試驗(yàn)親魚2+～3+齡，雌、雄體質(zhì)量分別為165.0～335.0 g和215.0～445.0 g。

挑選的親魚要求魚體無(wú)傷、無(wú)殘且體質(zhì)強(qiáng)健。從圖2可見(jiàn)：性成熟的馬口魚在生殖季節(jié)會(huì)出現(xiàn)明顯的第二性征，一般雄魚規(guī)格明顯大于雌魚；雌魚個(gè)體腹部膨大柔軟，有較明顯的卵巢輪廓，生殖孔微紅；雄魚各鰭條較長(zhǎng)，尤其臀鰭第1至第4根分枝鰭條明顯延長(zhǎng)，輕壓腹部有乳白色精液流出，且乳白色精液能在水中迅速分散，在生殖季節(jié)成熟的雄魚吻部、上下頜、下眼眶、鰓蓋、身體的側(cè)后部及尾柄上布滿圓錐狀的追星，在臀鰭條上也有排列成行的追星，背腹鰭上追星較少。此外，雄魚的體表還有鮮艷的婚姻色，即背部呈黃綠色，體側(cè)部呈淡綠色，腹部呈粉白色，鰓蓋和各鰭均呈淡紅色。

圖2 繁殖期雌、雄馬口魚特征Fig.2 Characteristics of male and female Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens during the breeding period

2)人工催情。參照駱小年等[18]的方法。馬口魚的催產(chǎn)藥物和劑量：雌魚，促黃體素激素釋放激素類似物2號(hào)(LHRH-A2)4～8 μg/kg+地歐酮(DOM)4～8 mg/kg+絨毛膜促性腺激素(HCG)1 000～2 000 IU/kg；雄魚，催產(chǎn)藥物同雌魚，但劑量減半。然后進(jìn)行一次或二次注射對(duì)比試驗(yàn)，注射后將雌、雄魚暫養(yǎng)在塑料網(wǎng)眼籠(直徑為0.5 m，高為1.5 m)中，水深為0.7 m，微流水刺激。

3)人工授精。催情20 h后，每隔2 h檢查一次，至效應(yīng)時(shí)間時(shí)采用干法人工授精。將雌魚撈出，批次放入裝有相同溫度的塑料大盆中，用體積分?jǐn)?shù)為0.1～0.2 mL/L的乙二醇苯醚進(jìn)行麻醉；待雌魚多數(shù)暈厥時(shí)撈出，用干毛巾擦去魚體表面黏液；用手輕壓雌魚腹部?jī)蓚?cè)擠出卵粒，輕壓雄魚腹部?jī)蓚?cè)擠出精液，一般雌、雄魚比1∶1～3∶1；用鵝毛將精子和卵子混合均勻，使精子均勻地分布在卵子周圍；將混合好的精子和卵子倒入盆中，同時(shí)向盆中緩慢倒入清水，攪拌授精；待魚卵吸水后，用塑料量筒杯統(tǒng)計(jì)卵量；最后放入孵化簍中孵化。

4)人工孵化。采用孵化簍+孵化桶接力孵化的方式，受精卵置于錐形篩絹孵化簍(孔徑245 μm)內(nèi)，孵化簍上端呈圓柱體，下部呈圓錐體，最底部包裹氣石(圖3)。孵化過(guò)程中氣量大小以卵粒全部翻滾無(wú)死角為宜。每簍放15～20萬(wàn)粒卵，孵化過(guò)程中及時(shí)換箱或刷箱，保持水質(zhì)清潔。若有箱內(nèi)魚卵水霉嚴(yán)重時(shí)，將卵倒出重新漂洗，直至清理完畢。孵化期間，水溫保持在19～21 ℃。受精卵部分開始破膜時(shí)，將漂洗后的魚卵轉(zhuǎn)移至孵化桶中孵化。孵化前期水流調(diào)小，待魚苗出膜時(shí)調(diào)大水流，至魚苗全部出膜后，再次調(diào)小水流。

圖3 馬口魚受精卵孵化簍Fig.3 Incubator of fertilized eggs of Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens

1.2.3 馬口魚胚胎發(fā)育觀察 每次取樣30粒以上，當(dāng)50%的卵出現(xiàn)新特征時(shí)記錄魚卵發(fā)育至新時(shí)期的起始時(shí)間。在顯微鏡(奧林巴斯CX21型)(4×10倍)下觀察馬口魚的胚胎發(fā)育過(guò)程。

1.2.4 適時(shí)下塘 仔魚孵出5 d左右，魚苗體色由透明逐漸變成灰黑色，當(dāng)卵黃囊吸收一半以上、鰾充氣和消化道貫通時(shí)，即可下池(塘)。

1.2.5 人工繁殖效率評(píng)價(jià) 各評(píng)價(jià)指標(biāo)計(jì)算公式：

性腺成熟系數(shù)=性腺質(zhì)量/去內(nèi)臟體質(zhì)量，

性腺成熟率=性腺發(fā)育成熟的親魚數(shù)(性腺達(dá)第Ⅳ期)/培育親魚總數(shù)×100%，

催產(chǎn)率=產(chǎn)卵魚數(shù)/催產(chǎn)魚總數(shù)×100%，

受精率=原腸中期活卵數(shù)/產(chǎn)卵總數(shù)×100%，

孵化率=魚苗水花數(shù)/受精卵總數(shù)×100%。

1.2.6 馬口魚仔魚發(fā)育觀察及生長(zhǎng)模型構(gòu)建 馬口魚魚苗出膜后，每天隨機(jī)取樣本25～30尾，在顯微鏡下觀察不同發(fā)育階段仔魚的形態(tài)特征，拍照后利用Image-Pro Plus軟件測(cè)量仔魚的全長(zhǎng)。

為了構(gòu)建適合馬口魚仔魚生長(zhǎng)的模型，挑選漸進(jìn)式von Bertalanffy、多項(xiàng)式和直線式3種模型作為備選生長(zhǎng)方程，并比較不同生長(zhǎng)模型在馬口魚仔魚上的應(yīng)用效果。

漸進(jìn)式生長(zhǎng)方程：Lt=L∞(1-e-k1(t-t1))；

多項(xiàng)式生長(zhǎng)方程：Lt=a0+a1t+a2t2；

直線式生長(zhǎng)方程：Lt=a0+a1t。

其中：Lt為t齡時(shí)的全長(zhǎng)(mm)；t為年齡(a)；L∞為漸進(jìn)全長(zhǎng)(mm)；k1為生長(zhǎng)系數(shù)；t1為理論初始年齡(a)；a0、a1和a2為待估參數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 池塘養(yǎng)殖馬口魚的性腺發(fā)育及人工催產(chǎn)

共解剖池塘養(yǎng)殖F1代雌魚45尾、雄魚22尾，結(jié)果顯示:雌魚2冬齡性腺成熟率達(dá)52%，雌魚3冬齡性腺成熟率達(dá)65%，懷卵量為4 940～24 822粒，性成熟系數(shù)(GSI)值為0.06～0.18;而雄魚2冬齡性腺成熟率為95%,GSI值為0.01～0.02。在池塘養(yǎng)殖過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，雄魚1冬齡可達(dá)性成熟，但繁殖期在6月份，比其他年齡組晚1個(gè)月左右。

從表1可見(jiàn)：2018年關(guān)門山水庫(kù)野生馬口魚的繁殖期在6月13日左右，要比遼陽(yáng)地區(qū)池塘培育的馬口魚繁殖期(2020年5月份)晚15～30 d；二次注射效果普遍比一次注射效果好，二次注射最高催產(chǎn)率可達(dá)95%，一次注射最高催產(chǎn)率僅為76%；F1代馬口魚平均催產(chǎn)率為73.8%，平均受精率為81.3%，平均孵化率為78.8%。在遼陽(yáng)地區(qū)，池塘養(yǎng)殖馬口魚的繁殖期在5月10—29日，水溫為18～24 ℃，一次注射效應(yīng)時(shí)間為25～27 h，兩次注射效應(yīng)時(shí)間為16～17 h。馬口魚受精卵呈球形橙黃色，屬沉性卵，無(wú)黏性，卵徑為1.25 mm，吸水后卵徑達(dá)1.45 mm。2018年催產(chǎn)獲F1代水花1.4萬(wàn)尾，2020—2021年連續(xù)兩年催產(chǎn)共獲F2代水花212萬(wàn)尾。

表1 遼陽(yáng)縣興大養(yǎng)殖場(chǎng)2018—2021年馬口魚人工繁殖情況Tab.1 Artificial propagation information of Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens in Xingda Farm in Liaoyang County from 2018 to 2021

2.2 馬口魚的胚胎發(fā)育觀察

水溫18 ℃時(shí)，馬口魚受精卵在水中約50 min后卵膜吸水膨脹，卵質(zhì)逐漸向動(dòng)物極集中，胚胎形成。馬口魚受精卵呈圓球形，在水溫為17～18 ℃條件下，歷經(jīng)62 h 6 min完成整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程(圖4)。根據(jù)胚胎發(fā)育各個(gè)階段的形態(tài)特征變化，將馬口魚的胚胎發(fā)育分為7個(gè)階段24個(gè)時(shí)期。馬口魚卵是典型的端黃卵，卵裂類型為盤狀卵裂。

A—受精卵；B—胚盤隆起；C—2細(xì)胞期；D—4細(xì)胞期；E—8細(xì)胞期；F—16細(xì)胞期；G—32細(xì)胞期；H—64細(xì)胞期；I—多細(xì)胞期；J—囊胚早期；K—囊胚中期；L—囊胚晚期；M—原腸早期；N—原腸中期；O—原腸晚期；P—神經(jīng)胚期；Q—肌節(jié)出現(xiàn)期；R—眼基出現(xiàn)期；S—尾芽期；T—肌肉效應(yīng)期；U—心臟原基期；V—耳石出現(xiàn)期；W—心臟跳動(dòng)期；X—出膜期。A—fertilized egg; B—blastoderm; C—2 cell stage; D—4 cell stage; E—8 cell stage;F—16 cell stage; G—32 cell stage; H—64 cell stage; I—multicellular stage; J—early blastula stage; K—mid-blastula stage; L—late blastula stage; M—early gastrula stage; N—mid-gastrula stage; O—late gastrula stage; P—neurula stage; Q—sarcomere stage; R—eye sac stage;S—tail bud stage; T—muscular contraction effect; U—rudiment of heart; V—otolith stage; W—heart pulsation stage; X—hatching.圖4 馬口魚胚胎發(fā)育圖Fig.4 Embryonic development of Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens

2.2.1 胚盤形成期 受精卵吸水膨脹，卵周隙逐漸擴(kuò)大(圖4A)。受精后50 min，胎盤隆起，卵內(nèi)的原生質(zhì)向動(dòng)物極移動(dòng)、集中，逐漸在卵黃表面形成隆起的胚盤(圖4B)。

2.2.2 卵裂期 卵裂期根據(jù)所具有的細(xì)胞數(shù)量又可以分為2細(xì)胞期、4細(xì)胞期、8細(xì)胞期、16細(xì)胞期、32細(xì)胞期、64細(xì)胞期、128細(xì)胞期和多細(xì)胞期，形成的時(shí)間依次為受精后2 h、2 h 20 min、2 h 50 min、3 h 5 min、3 h 40 min、4 h、4 h 15 min和4 h 30 min(圖4C～I(xiàn))。新細(xì)胞的形成與其他硬骨魚類相同，均按照盤狀卵裂方式進(jìn)行，每一次形成的分裂溝均與上一次的分裂溝相互垂直。進(jìn)入多細(xì)胞期之后，細(xì)胞大小也變得不一致，相比于2細(xì)胞期體積明顯減小，呈不規(guī)則排列。

2.2.3 囊胚期 受精后4 h 55 min進(jìn)入囊胚期，囊胚期分為囊胚早期、中期和晚期3個(gè)階段，用時(shí)5 h左右。該階段的主要特征是卵裂不斷進(jìn)行，分裂出的細(xì)胞變得更小，細(xì)胞界限不明顯，囊胚細(xì)胞層高度降低，開始向植物極轉(zhuǎn)移，最終呈扁平低帽狀覆蓋在卵黃上(圖4J～L)。

2.2.4 原腸胚期 受精后10 h 25 min進(jìn)入原腸期，原腸胚期分為早期、中期和晚期3個(gè)階段，用時(shí)2 h 10 min。此階段的主要形態(tài)特征是胚盤不斷向植物極移動(dòng)，下包內(nèi)卷，形成胚環(huán)，接著胚環(huán)的一側(cè)隆起形成胚盾，而后形成胚體的雛形(圖4M～O)。

2.2.5 神經(jīng)胚期 受精后14 h 40 min進(jìn)入神經(jīng)胚期，神經(jīng)胚期分為神經(jīng)胚期和胚孔閉合期2個(gè)階段，用時(shí)2 h 50 min，期間依次形成過(guò)卵黃栓、腦泡等過(guò)渡性組織，胚胎的神經(jīng)板雛形出現(xiàn)，這一時(shí)期稱為神經(jīng)胚期(圖4P)。

2.2.6 器官形成期 器官形成期主要分為肌節(jié)出現(xiàn)期、眼基出現(xiàn)期、尾芽期、尾鰭?cǎi)蕹霈F(xiàn)期、肌肉效應(yīng)期、心臟原基期、耳石出現(xiàn)期和心臟跳動(dòng)期7個(gè)時(shí)期，具體特征如下：

1)肌節(jié)出現(xiàn)期。受精后28 h 26 min，胚體包繞卵黃囊外周4/5，中部形成4～6對(duì)肌節(jié)，之后體節(jié)慢慢增多，更加清晰可見(jiàn)(圖4Q)。

2)眼基期。受精后33 h 56 min，胚體前端近頭部的兩側(cè)有橢圓形的眼原基形成，眼基中央凹陷，逐漸擴(kuò)大為腔體，呈“蠶豆”狀(圖4R)。

3)尾芽期。受精后40 h 1 min，胚體伸長(zhǎng)，在卵黃囊下方或斜下方包卵黃囊外周1/2，胚體后端逐漸隆起為尾芽，尾部出現(xiàn)圓圈狀尾泡，肌節(jié)19～20對(duì)(圖4S)。

4)尾鰭?cǎi)蕹霈F(xiàn)期。受精后42 h 6 min，隨著尾芽的生長(zhǎng)，尾芽邊緣外凸形成尾鰭?cǎi)蓿拷膊康穆腰S囊向內(nèi)凹陷明顯。

5)肌肉效應(yīng)期。受精后44 h 36 min，肌節(jié)32～34對(duì)，胚體開始表現(xiàn)出微弱的肌肉收縮，第四腦室出現(xiàn)，晶體清晰，胚體開始左右扭動(dòng)，卵黃囊也逐漸變小被吸收(圖4T)。

6)眼晶體出現(xiàn)期。受精后47 h 16 min，眼囊逐漸變圓，囊內(nèi)有圓形晶體原基出現(xiàn)。

7)心臟原基期。受精后48 h 36 min，胚體頭部與卵黃囊連接處出現(xiàn)心臟原基(圖4U)。

8)耳石出現(xiàn)期。受精后51 h 24 min，耳囊結(jié)構(gòu)明顯，兩個(gè)耳囊中分別形成2個(gè)耳石，前后排列(圖4V)。

9)心臟跳動(dòng)期。受精后58 h 6 min，胚體出現(xiàn)心跳，心跳頻率約為80 次/min，血液在胚體中流動(dòng)明顯，尾部扭動(dòng)頻繁，心臟開始微弱搏動(dòng)，胚胎伸長(zhǎng)，尾鰭?cǎi)扪由欤勰抑谐霈F(xiàn)晶體(圖4W)。

2.2.7 出膜期 受精后62 h 6 min，胚體劇烈扭動(dòng)，卵膜逐漸變薄，彈性減弱，大部分胚體尾部先出膜，少部分以頭部或身體前半部先出膜(圖4X)。

2.3 仔魚發(fā)育及生長(zhǎng)特性

1日齡仔魚全長(zhǎng)為(5.13±0.63)mm，頭部及尾部與卵黃囊分離，軀干部貼于卵黃囊上，卵黃囊前半部呈球形，后半部呈棒狀；2日齡仔魚全長(zhǎng)為(6.01±0.49)mm，卵黃囊變小，眼后下方可見(jiàn)鰓弧，其內(nèi)血液流動(dòng)明顯，胸鰭原基明顯可見(jiàn)；3日齡仔魚全長(zhǎng)為(6.12±0.78)mm，卵黃囊繼續(xù)變小，眼內(nèi)黑色素開始積累，心臟中紅色血液流動(dòng)明顯；4日齡仔魚全長(zhǎng)為(6.81±0.41)mm，卵黃囊變小呈棒狀，眼內(nèi)黑色素增多；5日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.07±0.27)mm，眼內(nèi)黑色素布滿，血液紅色加深；6日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.11±0.29)mm，軀體部與卵黃囊相接處出現(xiàn)一列枝狀黑色素；7日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.30±0.40)mm，胸鰭鰭條形成，枝狀黑色素增多，腸道明顯；8日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.32±0.52)mm，頭部出現(xiàn)黃色點(diǎn)狀斑，腸道更加明顯，肛門至尾鰭間可見(jiàn)一列枝狀黑色素；9日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.38±0.62)mm，卵黃囊明顯縮小，尤其后半部分變化最大，鰾初步形成，腸道貫通，肛門與外界相通，但無(wú)攝食情況；10日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.45±0.35)mm，卵黃囊較小，頭部與軀干部背面呈淺黃綠色，腸道內(nèi)可見(jiàn)食物；11日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.56±0.44)mm，尾鰭鰭條清晰可見(jiàn)，有黑色素出現(xiàn)，部分仔魚卵黃囊消失，口部出現(xiàn)少許黑色素;12日齡仔魚全長(zhǎng)為(7.63±0.58)mm，卵黃囊?guī)缀跸?，脊柱上有不連續(xù)的黑色素；部分仔魚背鰭形成；13日齡仔魚全長(zhǎng)(7.75±0.61)mm，背鰭形成，尾鰭黃色點(diǎn)狀色素分布明顯。

馬口魚仔魚備選生長(zhǎng)模型信息見(jiàn)表2。依據(jù)相關(guān)系數(shù)判斷，von Bertalanffy模型是描述馬口魚仔魚生長(zhǎng)特性的最優(yōu)生長(zhǎng)模型，而其他2種模型的相關(guān)系數(shù)相對(duì)較低，不適合描述仔魚的生長(zhǎng)特性。用von Bertalanffy模型擬合馬口魚仔魚全長(zhǎng)與日齡關(guān)系如圖5所示，這表明馬口魚前期仔魚生長(zhǎng)符合漸進(jìn)式曲線特性。

表2 馬口魚仔魚備選生長(zhǎng)模型的相關(guān)系數(shù)Tab.2 Correlation coefficients of candidate growth model in Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens fry

圖5 馬口魚仔魚全長(zhǎng)與日齡的關(guān)系Fig.5 Relationship between of total length and daily age of Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens fry

3 討論

3.1 馬口魚的繁殖習(xí)性

陳乘[17]推測(cè)，北方馬口魚生長(zhǎng)于溫帶地區(qū)，水溫較低，達(dá)到性成熟所需的有效積溫比南方馬口魚所需時(shí)間長(zhǎng)，故達(dá)到初次性成熟的規(guī)格較大，以提高后代生存率。對(duì)比遼寧省鐵甲水庫(kù)馬口魚(13.6～29.8 g)、北江馬口魚(8.0～14.9 g)和湖北省三道河水庫(kù)馬口魚(9.7～19.2 g)的繁殖個(gè)體規(guī)格，北方馬口魚的繁殖群體個(gè)體較大；對(duì)比三地馬口魚的平均絕對(duì)繁殖力，依次為遼寧省鐵甲水庫(kù)馬口魚(平均為8 207粒/尾，范圍為2 382～ 14 022粒/尾)>湖北省三道河水庫(kù)馬口魚(平均為5 608粒/尾，范圍為1 870～20 434粒/尾)>北江馬口魚(平均為4 842粒/尾，范圍為1 486～ 12 025粒/尾)，北方馬口魚的平均絕對(duì)繁殖力也較高。練青平等[16]用于繁殖的馬口魚雌、雄親魚體質(zhì)量分別為1+齡11.8～22.4 g和15.1～45.5 g， 2+齡22～65 g和35～75.2 g。而本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，北方池養(yǎng)馬口魚，雄魚1+齡以上性成熟，雌魚需2+齡以上性成熟，且親魚性成熟規(guī)格一般平均在150 g以上。因此，南北方馬口魚親魚性成熟年齡和規(guī)格存在較大差異，這與南北方地理群體物種差異性密切相關(guān)。

馬口魚繁殖期在南北方地理群體間同樣存在差異。北方馬口魚的繁殖期集中在5—6月，其中遼陽(yáng)地區(qū)馬口魚繁殖期在5月10日—29日(本試驗(yàn)中)，遼寧水豐水庫(kù)和關(guān)門山水庫(kù)繁殖時(shí)間分別在6月17日[19]和6月13日(本試驗(yàn)中)，而南方馬口魚的繁殖期相對(duì)較長(zhǎng)，集中在4月中旬—7月底[17]。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，初次達(dá)到性成熟的馬口魚存在繁殖期拖后現(xiàn)象，這與練青平等[16]的研究結(jié)果一致。同時(shí)，池塘養(yǎng)殖馬口魚繁殖群體的F1代2冬齡親魚中，有一部分雌魚的性腺仍然處于Ⅱ期，性腺成熟率為52%，性成熟率不高；3冬齡雌魚性腺成熟率為65%，這可能與投喂的馬口魚親魚飼料營(yíng)養(yǎng)成分和池塘養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境有關(guān)。本試驗(yàn)中，池塘養(yǎng)殖馬口魚過(guò)程中僅投喂鯉飼料，而未選擇專用的配合飼料；與湖泊水庫(kù)的敞水區(qū)不同，池塘養(yǎng)殖環(huán)境不是馬口魚最適宜的繁殖生態(tài)調(diào)控環(huán)境。因此，建議在親魚培育過(guò)程中，盡量滿足馬口魚親魚繁殖所需外界環(huán)境條件。

3.2 繁殖馬口魚親魚死亡率高的原因分析

與人工繁殖刀鱭Coilianasus的情況相似[20]，馬口魚在人工繁殖過(guò)程中應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，死亡率高，有“離水即死”的現(xiàn)象。據(jù)筆者觀察，人工繁殖后的親魚死亡率較高，即便不立即死亡，返塘后親魚也會(huì)陸續(xù)死亡，死亡率高達(dá)90%以上。原因可能是：第一，馬口魚的生物習(xí)性與常規(guī)養(yǎng)殖魚類不同，其善跳躍，性情暴躁，攻擊性強(qiáng)，在水泥池中容易撞擊，導(dǎo)致內(nèi)臟受傷，后逐漸死亡；第二，馬口魚耐受性較差，其離水后身體機(jī)能迅速下降，不能承受催產(chǎn)藥物注射和干法授精的人工操作。筆者總結(jié)的解決方法如下：一是，在繁殖期前逐漸增加拉網(wǎng)鍛煉次數(shù)，使其適應(yīng)高密度擁擠的生態(tài)環(huán)境；二是，繁殖前潑灑抗應(yīng)激性藥物或人工繁殖時(shí)使用麻醉劑，減少應(yīng)激反應(yīng)；三是，模擬生態(tài)產(chǎn)卵條件，誘導(dǎo)其自然產(chǎn)卵。但是，馬口魚與拉氏鱥Phoxinuslagowskii[21]相同，目前尚未找到一種簡(jiǎn)便的人工催情和自然產(chǎn)卵的繁殖方式，因此，尚需開展進(jìn)一步的相關(guān)研究。

3.3 馬口魚的胚胎發(fā)育和仔魚生長(zhǎng)特點(diǎn)

與大多數(shù)淡水經(jīng)濟(jì)魚類一樣，馬口魚卵是典型的端黃卵，卵裂類型為盤狀卵裂。但其胚胎發(fā)育時(shí)間和積溫因地理群體不同而異(表3)，浙江省寧波、湖南省安化地區(qū)的馬口魚胚胎發(fā)育積溫相近(約900 ℃·h)，本試驗(yàn)中，遼寧省遼陽(yáng)縣和鐵甲水庫(kù)的馬口魚胚胎發(fā)育積溫相近(約1 200 ℃·h)，而北京地區(qū)的馬口魚胚胎發(fā)育積溫最高(達(dá) 1 694 ℃·h)。筆者發(fā)現(xiàn)，相同溫度下，馬口魚的胚胎發(fā)育時(shí)間較拉氏鱥短，但出膜至黑色眼點(diǎn)出現(xiàn)的時(shí)間較拉氏鱥長(zhǎng)，馬口魚出膜相對(duì)一般魚類早，而黑色眼點(diǎn)出現(xiàn)較晚，這可能是對(duì)環(huán)境的一種適應(yīng)性，有利于減少在河道砂礫中被敵害獵捕的機(jī)會(huì)。

表3 不同地域馬口魚群體胚胎發(fā)育差異Tab.3 Difference in embryonic development of different region populations of Chinese hook snout carp Opsariichthys bidens

以卵黃囊消失為標(biāo)志，馬口魚仔魚生長(zhǎng)可劃分為前期仔魚和后期仔魚，此生長(zhǎng)階段由內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)轉(zhuǎn)化為外源性營(yíng)養(yǎng)，為高死亡率的臨界期，對(duì)仔魚存活至關(guān)重要[20]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，北方馬口魚仔魚生長(zhǎng)為異速生長(zhǎng)，早期仔魚生長(zhǎng)速度較快，在10日齡進(jìn)入混合營(yíng)養(yǎng)期后生長(zhǎng)速度有所下降，12日齡時(shí)卵黃囊消失，進(jìn)入外源營(yíng)養(yǎng)期，這種發(fā)育和生長(zhǎng)特性能夠保證攝食器官充分發(fā)育，有利于攝食經(jīng)驗(yàn)的積累，從而提高存活率。

3.4 馬口魚全人工繁殖成功意義

土著經(jīng)濟(jì)魚類是大自然賜予的寶貴種質(zhì)資源庫(kù)，關(guān)注土著魚類漁業(yè)資源的養(yǎng)護(hù)和生態(tài)修復(fù)，保護(hù)淡水土著魚類物種及其多樣性，并逐步恢復(fù)其自然資源，是土著魚類漁業(yè)資源可持續(xù)發(fā)展的必由之路。馬口魚是中國(guó)優(yōu)質(zhì)大水面河流魚類，是遼寧省重要土著淡水魚類之一，開發(fā)前景廣闊[4]，其全人工繁殖的成功，填補(bǔ)了北方地區(qū)該品種全人工繁殖的空白，為實(shí)現(xiàn)馬口魚規(guī)?；斯ゐB(yǎng)殖奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，同時(shí)有助于優(yōu)化中國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種結(jié)構(gòu)。此外，馬口魚全人工繁殖成功也為其他兇猛性小型魚類人工繁殖提供了有益借鑒。

4 結(jié)論

1)馬口魚在池塘養(yǎng)殖條件下可實(shí)現(xiàn)全人工繁育，但馬口魚親魚人工授精后死亡率很高，達(dá)90%以上。

2)在水溫19～21 ℃條件下，相對(duì)一般淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚類胚胎發(fā)育，馬口魚胚胎期較短，約62 h 6 min，出膜至平游期時(shí)間較長(zhǎng)，達(dá)5～6 d，其混合營(yíng)養(yǎng)期較短且在第10、11日齡，僅2 d。