免疫球蛋白A腎病病人血清白細(xì)胞介素-17、白細(xì)胞介素-18表達(dá)變化與乙型肝炎病毒感染的相關(guān)性

張世杰，宋曉杰，王利軍，裴旭東

免疫球蛋白A（IgA）腎病是臨床多發(fā)原發(fā)性腎小球疾病，在我國十分常見，目前其病因、病機(jī)尚未完全清楚，且臨床特征、病理學(xué)呈多樣性，預(yù)后也不盡相同，給臨床診治、預(yù)后評價帶來較大困難［1-2］。近年有研究報道，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是IgA腎病發(fā)病的重要危險因素之一［3］。乙型肝炎在我國患病率較高，且涉及面廣，因此，積極探究其與IgA腎病發(fā)病發(fā)展間關(guān)系對了解IgA腎病發(fā)病機(jī)制、完善治療方案具有重要指導(dǎo)價值。臨床已證實，多種細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)過程是IgA腎病、乙型肝炎發(fā)病發(fā)展的共同病理生理特征，可為臨床評價二者間關(guān)聯(lián)性提供方向［4］。白細(xì)胞介素-17（IL-17）、白細(xì)胞介素-18（IL-18）是參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞或白細(xì)胞間互相作用的主要淋巴因子家族成員，廣泛分布于人體腎臟、肝臟的多種器官、組織中，其外周血水平異常改變可應(yīng)用于評估機(jī)體免疫狀態(tài)及肝腎功能［5］。本研究首次探究IgA腎病病人血清IL-17、IL-18表達(dá)變化與HBV感染的相關(guān)性，旨在為IgA腎病病人HBV感染診療提供依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年3月至2019年3月南陽市中心醫(yī)院224例IgA腎病病人，其中HBV感染67例作為感染組，未感染病人157例作為未感染組。另選取無腎臟疾病的單純乙型肝炎病毒感染病人67例作為對照組。經(jīng)皮腎活檢診斷確診為IgA腎??；無黃疸、嚴(yán)重肝功能不全史；近期無過敏史或重金屬接觸史。排除標(biāo)準(zhǔn)：紫癜性腎炎、狼瘡性腎炎等繼發(fā)性IgA腎?。惶悄虿?、血液病、甲狀腺疾病者。三組年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、IgA病程、飲食偏好等基礎(chǔ)資料均衡可比（P＞0.05）；三組肝功能［谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）］對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 免疫球蛋白A（IgA）腎病病人224例與單純乙型肝炎病毒感染病人67例一般資料對比

1.2 方法以非抗凝真空管取晨空腹肘靜脈血2 mL，離心（半徑8 cm，轉(zhuǎn)速3 500 r/min）15 min，取上層血清，以上海酶聯(lián)生物科技有限公司IL-17酶聯(lián)免疫試劑盒、IL-18酶聯(lián)免疫試劑盒測IL-17、IL-18水平；以雷度米特醫(yī)療設(shè)備（上海）有限公司AQT90型熒光定量儀用PCR技術(shù)測乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）載量。乙肝表面抗原（HBeAg）檢測：經(jīng)皮取腎活檢組織，石蠟切片以非標(biāo)記免疫酶法進(jìn)行HBeAg染色，羊抗HBe購自丹麥DAKO公司，以正常羊血清代替一抗作為陰性對照。操作均由資深專科醫(yī)師規(guī)范完成。

1.3 觀察指標(biāo)（1）對比三組血清IL-17、IL-18水平。（2）分析血清IL-17、IL-18對IgA腎病病人HBV感染的診斷價值。（3）對比不同HBV-DNA載量病人血清IL-17、IL-18水平。（4）分析血清IL-17、IL-18水平與HBV-DNA載量相關(guān)性。（5）對比HBeAg陰、陽性病人血清IL-17、IL-18水平。（6）分析血清IL-17、IL-18水平與肝功能（AST、ALT）的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計分析軟件，符合正態(tài)分布的計量資料以表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩組間比較采用SNK-q檢驗，計數(shù)資料以例（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗。Pearson相關(guān)性系數(shù)分析相關(guān)性。接受者操作特征（ROC）曲線分析血清IL-17、IL-18對IgA腎病病人HBV感染的診斷價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清IL-17、IL-18水平感染組血清IL-17、IL-18水平高于未感染組、對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且未感染組IL-17、IL-18水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 免疫球蛋白A（IgA）腎病224例與單純乙型肝炎病毒感染67例血清白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-18水平對比/（ng/L，）

表2 免疫球蛋白A（IgA）腎病224例與單純乙型肝炎病毒感染67例血清白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-18水平對比/（ng/L，）

組別對照組未感染組感染組F值P值例數(shù)67 157 67 IL-17 14.78±2.69 12.68±2.13 17.62±3.25 89.19＜0.001 IL-18 412.37±30.25 360.37±25.37 498.96±38.41 1 370.86＜0.001

2.2 血清IL-17、IL-18對IgA腎病病人HBV感染的診斷價值以感染組為陽性，未感染組為陰性，分別繪制各指標(biāo)單一、聯(lián)合診斷HBV感染的ROC曲線，顯示各指標(biāo)聯(lián)合診斷HBV感染的AUC值為0.90（95%CI：0.86～0.94），高于血清IL-17、IL-18單一預(yù)測的AUC值0.80（95%CI：0.75～0.85）、0.81（95%CI為0.76～0.86），采取各指標(biāo)聯(lián)合診斷HBV感染的靈敏度為79.10%，特異度為94.90%。見圖1。

圖1 免疫球蛋白A（IgA）腎病病人224例的乙型肝炎病毒感染ROC診斷價值

2.3 不同HBV-DNA載量病人血清IL-17、IL-18水平67例伴HBV毒感染病人中HBV-DNA高載量（＞1×105copies/mL）39例，HBV-DNA低載量（HBVDNA≤1×105copies/mL）28例，高載量病人血清IL-17、IL-18水平高于低載量病人，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 伴HBV毒感染67例中不同HBV-DNA載量病人血清白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-18水平對比/（ng/L，）

表3 伴HBV毒感染67例中不同HBV-DNA載量病人血清白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-18水平對比/（ng/L，）

HBV-DNA表達(dá)低載量高載量t值P值例數(shù)28 39 IL-17 15.41±2.94 19.21±3.12 5.04＜0.001 IL-18 431.57±35.69 547.34±40.12 12.19＜0.001

2.4 血清指標(biāo)與HBV-DNA載量相關(guān)性血清IL-17、IL-18水平與IgA腎病伴有HBV感染病人HBVDNA載量呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.48、0.51，均P＜0.001）。

2.5 HBeAg陰陽性病人血清IL-17、IL-18水平67例伴HBV毒感染病人中HBeAg陽性32例，陰性35例，HBeAg陽性與陰性病人血清IL-17、IL-18水平相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。2.6 血清IL-17、IL-18水平與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性血清IL-17、IL-18水平與IgA腎病伴有HBV感染病人肝功能指標(biāo)AST（r=0.57、0.59）、ALT（r=0.59、0.65）呈正相關(guān)（均P＜0.001）。

表4 HBeAg陰陽性病人血清白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-18水平對比/（ng/L，）

表4 HBeAg陰陽性病人血清白細(xì)胞介素（IL）-17、IL-18水平對比/（ng/L，）

HBeAg陽性陰性t值P值例數(shù)32 35 IL-17 17.06±2.94 18.05±3.12 1.58 0.117 IL-18 489.63±39.41 507.49±45.62 1.71 0.093

3 討論

IgA腎病在我國約占原發(fā)性腎小球疾病的40%，目前尚缺乏特異性診治方案，其病理機(jī)制復(fù)雜，不同致病因素所誘發(fā)IgA腎病病機(jī)不同，強化病因治療是抑制病情進(jìn)展，改善預(yù)后的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［6-7］。近年流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，HBV感染高發(fā)地區(qū)，IgA腎病患病率也較高，但二者間具體關(guān)聯(lián)性尚存爭議［8］。

HBV具有廣嗜性，除肝臟外，還可在其他多種器官組織內(nèi)復(fù)制，損害相應(yīng)器官功能，而腎臟作為與肝關(guān)系最密切器官，其最易受累［9］。近年隨研究深入，IgA腎病發(fā)病是抗原抗體復(fù)合物沉積致體液免疫損害所誘發(fā)，而HBV抗原抗體所形成循環(huán)免疫復(fù)合物沉積在腎小球內(nèi)引起體液免疫損害是誘發(fā)乙肝相關(guān)腎病的主要因素［10-11］。自1987年首次有報道在系膜區(qū)切片中發(fā)現(xiàn)HBV抗原相繼有學(xué)者針對此觀點對HBeAg攜帶率進(jìn)行研究，與普通群體對比，IgA腎病病人HBeAg攜帶率并無異常［12-13］。本研究發(fā)現(xiàn)，IgA腎病伴HBV感染病人血清IL-17、IL-18水平高于單純IgA腎病病人。IL-17、IL-18均是體液免疫狀態(tài)下的促炎性細(xì)胞因子，其過表達(dá)可介導(dǎo)多種感染性疾病、自身免疫性疾病等［14］。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，IL-17在HBV感染過程中發(fā)揮重要作用，且外周血表達(dá)水平，隨癥狀加重呈升高趨勢［15］。此外，已有研究證實，IgA腎病與系膜異常關(guān)系密切，而IL-17在系膜病變中揮發(fā)關(guān)鍵作用，其能刺激、協(xié)助效應(yīng)B細(xì)胞活化，并生成HBeAg等大分子物質(zhì)，隨外周血循環(huán)沉積于系膜區(qū)，介導(dǎo)IgA腎病發(fā)病，而IL-18表達(dá)異常增加所介導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖、腎間質(zhì)纖維化是引起腎損害的又一主要機(jī)制［16-17］。因此，IgA腎病病人伴HBV感染時腎損害更顯著。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清IL-17、IL-18水平與IgA腎病伴HBV感染病人HBV-DNA載量呈正相關(guān)，反映二者表達(dá)與HBV感染關(guān)系密切。分析HBV感染可刺激機(jī)體啟動免疫防御機(jī)制，介導(dǎo)IL-17、IL-18免疫炎性因子表達(dá)，但隨HBV持續(xù)性感染、復(fù)制、侵襲，機(jī)體防御系統(tǒng)過度激活，可引起各種細(xì)胞因子表達(dá)失衡，形成惡性循環(huán)［18-19］。進(jìn)一步ROC曲線分析，血清IL-17、IL-18聯(lián)合診斷IgA腎病病人HBV感染的AUC值0.904最大，可為臨床評價IgA腎病病人HBV感染提供參考依據(jù)。

此外，HBeAg陽性與陰性病人血清IL-17、IL-18水平相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與上文相關(guān)報道IgA腎病病人HBeAg攜帶率無異常的結(jié)論近似。分析可能是腎組織內(nèi)HBAg主要來自血循環(huán)、腎組織原位合成，HBeAg一般埋藏于HBcAg內(nèi)部，而HBcAg屬細(xì)胞內(nèi)抗原，只有細(xì)胞受損HBcAg從細(xì)胞內(nèi)釋放、裂解時才能于組織中觀察到HBeAg表達(dá)，加之活檢取材存在局限性［20］。因此，腎組織內(nèi)HBeAg表達(dá)難以準(zhǔn)確解釋系膜區(qū)抗原或抗體免疫復(fù)合物沉積性。另外，高水平IL-17、IL-18不利于HBV清除，HBeAg在介導(dǎo)Th17、Th18細(xì)胞參與免疫應(yīng)答的同時可促進(jìn)IL-17、IL-18生成，繼而下調(diào)維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt活性以抑制Th17、Th18細(xì)胞生理功能，減弱對病毒免疫清除作用［21］。經(jīng)Pearson相關(guān)性系數(shù)分析，血清IL-17、IL-18水平與IgA腎病伴HBV感染病人血清AST、ALT水平呈正相關(guān)，說明血清IL-17、IL-18表達(dá)可反映IgA腎病伴HBV感染病人肝功能變化。

綜上可知，IgA腎病伴HBV感染病人血清IL-17、IL-18表達(dá)異常，且異常程度與HBV-DNA載量關(guān)系密切，以上血清指標(biāo)動態(tài)變化可及時反映IgA腎病病人HBV感染情況及肝功能變化。