酶抑制率法測(cè)定蔬菜中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)分析

何 歡

（湖南省農(nóng)藥檢定所，湖南 長(zhǎng)沙 410000）

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本文所提試驗(yàn)將使用大型菜市場(chǎng)供應(yīng)原料為試驗(yàn)基礎(chǔ)材料，采集時(shí)間為2021年8月，其中蔬菜樣品按類(lèi)別可分為葉菜類(lèi)、蕓薹屬類(lèi)、豆類(lèi)、瓜類(lèi)、茄果類(lèi)和根莖類(lèi)等6大類(lèi)，共19個(gè)蔬菜品種。其中葉菜類(lèi)包含7個(gè)品種、蕓薹屬類(lèi)和豆類(lèi)均為3個(gè)品種、瓜類(lèi)、茄果類(lèi)和根莖類(lèi)均為2個(gè)品種，共計(jì)檢測(cè)份數(shù)為3800份（單位：批次），其中葉菜類(lèi)共1400份，占總份數(shù)36.8%；蕓薹屬類(lèi)和豆類(lèi)均為600份，均占總份數(shù)的15.8%；瓜類(lèi)、茄果類(lèi)和根莖類(lèi)蔬菜均為400份，均占總份數(shù)的10.5%。

本試驗(yàn)所使用的儀器與試劑有：DY-3500Plus食品速測(cè)儀、電子天平，檢測(cè)試劑有提取試劑、乙酯膽堿酯酶、二硫代二硝基苯甲酸顯色劑、碘化硫代乙酰膽堿底物。

1.2 試驗(yàn)方法

樣品處理：將從市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的蔬菜樣品進(jìn)行預(yù)處理，擦凈表面泥土，用取樣器取1厘米左右的方碎片，用電子天平稱(chēng)取葉菜類(lèi)2克，非葉菜類(lèi)4克。將稱(chēng)取好的樣品放入取樣瓶中，加入20毫升緩沖液，振蕩1～2分鐘，倒出提取液，靜置2分鐘待測(cè)。

檢測(cè)：對(duì)照測(cè)試，在專(zhuān)用反應(yīng)瓶中加入3毫升緩沖液，再加入50微升顯色劑和50微升酶液，混勻，37℃下放置30分鐘后加入50微升底物，搖勻并立即倒入比色皿中，放入測(cè)試通道，按儀器“對(duì)照”鍵測(cè)試3分鐘的吸光度變化值ΔA。樣品測(cè)試，在專(zhuān)用反應(yīng)瓶中加入3毫升樣品提取緩沖液，再加入50微升顯色劑和50微升酶液，混勻，37℃下放置30分鐘后加入50微升底物，搖勻并立即倒入比色皿中，放入測(cè)試通道，按儀器“對(duì)照”鍵測(cè)試3分鐘的吸光度變化值ΔA。

檢測(cè)結(jié)果：在410納米波長(zhǎng)下測(cè)試吸光度的變化，計(jì)算出抑制率就可判斷農(nóng)藥的殘留情況。

試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果依據(jù)主要以添加酶制劑下酶被抑制的程度來(lái)表示。

上式中：ΔA表示對(duì)照組下緩沖液反應(yīng)3分鐘吸光度下的變化值；ΔA表示試驗(yàn)樣品溶液反應(yīng)3分鐘后酶吸光度的變化值。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果得出提取液對(duì)添加酶的抑制率≥70%時(shí)，即代表檢測(cè)樣品蔬菜中存在含有高劑量的有機(jī)磷或者氨基甲酸酯類(lèi)的農(nóng)藥殘留超標(biāo)。對(duì)首次檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)陽(yáng)性的蔬菜進(jìn)行重檢，以保證檢測(cè)蔬菜得出結(jié)果的真實(shí)性，兩次檢測(cè)仍呈陽(yáng)性需用氣相色譜法進(jìn)一步檢測(cè)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種蔬菜的農(nóng)藥殘留檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果

在本試驗(yàn)蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)樣品中，共檢測(cè)出農(nóng)藥殘留份數(shù)為226份，總超標(biāo)率為5.9%，詳細(xì)檢測(cè)結(jié)果如表l所示。

從上表1中檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果的整體上看，可以得出以豆類(lèi)蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)率最多，超標(biāo)份數(shù)可以達(dá)到總樣品份數(shù)的2.8%；以根莖類(lèi)蔬菜農(nóng)藥殘留份數(shù)最少，超標(biāo)份數(shù)僅占檢測(cè)份數(shù)的0.2%。從檢測(cè)樣品整體角度上看，樣品中豇豆、荷蘭豆、四季豆、辣椒的農(nóng)藥殘留超標(biāo)率相對(duì)較高，其余試驗(yàn)檢測(cè)樣品農(nóng)藥殘留偏低。

表1 不同品種蔬菜農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果

2.2 不同檢測(cè)類(lèi)型蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)率比較

由表2中數(shù)據(jù)可知，蔬菜檢測(cè)樣品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)率從高到低排序?yàn)?，豆?lèi)＞葉菜類(lèi)＞蕓薹屬類(lèi)＞茄果類(lèi)＞瓜類(lèi)＞根莖類(lèi)。造成該現(xiàn)象的主要原因在于蔬菜本身的生長(zhǎng)環(huán)境與抗蟲(chóng)害的能力。以豆類(lèi)蔬菜為例，生長(zhǎng)環(huán)境耐熱性強(qiáng)，不耐低溫。在少雨干旱高溫的季節(jié)，很容易受到地面蟲(chóng)害的侵蝕，主要以銹病、病毒病、莢螟、紅蜘蛛、蚜蟲(chóng)等為主的病蟲(chóng)害比較嚴(yán)重。一方面，農(nóng)戶為保障蔬菜不遭到破壞，會(huì)經(jīng)常噴灑農(nóng)藥來(lái)殺死害蟲(chóng)或阻止害蟲(chóng)產(chǎn)卵等，另一方面，用藥多憑習(xí)慣和經(jīng)驗(yàn)，缺乏科學(xué)的使用方法。在用量上有可能超量使用，沒(méi)有遵循超過(guò)農(nóng)藥安全間隔期之后采摘，從而導(dǎo)致蔬菜農(nóng)藥超標(biāo)現(xiàn)象偏高。

表2 不同種類(lèi)蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

經(jīng)上述試驗(yàn)數(shù)據(jù)能夠得出，現(xiàn)階段蔬菜流通環(huán)節(jié)中售賣(mài)的蔬菜仍有一部分蔬菜存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象，特別是豆類(lèi)蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)率最高。因此在當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)部門(mén)加強(qiáng)監(jiān)管的同時(shí)，商戶應(yīng)了解蔬菜產(chǎn)地及生產(chǎn)用藥情況，加強(qiáng)采購(gòu)蔬菜的安全食用性，以降低殘留農(nóng)藥對(duì)人自身的傷害。

同時(shí)，經(jīng)上述所提試驗(yàn)及其數(shù)據(jù)，本文將出現(xiàn)該現(xiàn)象的主要原因進(jìn)行總結(jié)并得出一下幾點(diǎn)結(jié)論。

第一，經(jīng)上述試驗(yàn)結(jié)果可以得出，市場(chǎng)中農(nóng)藥殘留超標(biāo)的蔬菜均以豆類(lèi)、葉菜類(lèi)蔬菜為主。其常見(jiàn)侵蝕昆蟲(chóng)有黃曲條跳甲、夜蛾科、小菜蛾以及煙粉虱等。為消滅上述害蟲(chóng)農(nóng)戶們會(huì)通過(guò)使用過(guò)量用藥和多次施藥的方式，進(jìn)行消殺害蟲(chóng)的操作，而超標(biāo)準(zhǔn)、超范圍的使用農(nóng)藥會(huì)影響蔬菜農(nóng)藥消解，如農(nóng)戶在使用如氧樂(lè)果和克百威等殺蟲(chóng)劑之后，蔬菜未超過(guò)農(nóng)藥的安全間隔期就采摘上市，就會(huì)導(dǎo)致上市蔬菜出現(xiàn)農(nóng)藥殘留超標(biāo)的現(xiàn)象。

第二，經(jīng)上述試驗(yàn)結(jié)果證明，上市蔬菜中殘留較低的蔬菜有，番茄、黃瓜。生長(zhǎng)環(huán)境下存在的害蟲(chóng)較少且害蟲(chóng)只會(huì)以這些植物的葉片為食，噴灑農(nóng)藥時(shí)也會(huì)著重噴灑蔬菜的葉片而不是果實(shí)部分，因此上市的茄果類(lèi)蔬菜和瓜類(lèi)蔬菜農(nóng)藥殘留較低。

第三，上述蔬菜葉菜類(lèi)含有天然色素，需要延長(zhǎng)靜置時(shí)間，減少干擾。因此在上述檢測(cè)中檢測(cè)結(jié)果會(huì)容易出現(xiàn)假陽(yáng)性（檢測(cè)結(jié)果為農(nóng)藥殘留超標(biāo)），對(duì)此在處理上述蔬菜樣品時(shí)應(yīng)當(dāng)采取浸泡法來(lái)獲得蔬菜上的農(nóng)藥殘留，延長(zhǎng)提取靜置時(shí)間。從而降低次生物質(zhì)和葉綠素對(duì)酶制劑檢測(cè)的（干擾。另外，需要重點(diǎn)注意若檢測(cè)試劑存放到冰箱中，在取出使用時(shí)需要解凍至規(guī)定操作溫度及添加酶制劑中酶的最佳活性溫度，而且酶液不易反復(fù)進(jìn)行解凍操作，否則會(huì)直接影響酶的活性降低，影響試驗(yàn)的精準(zhǔn)性。