P53、CDC7蛋白在多原發(fā)肺腺癌中表達(dá)的研究

張克劍，楊金禮，閆 陽，姜 慧，趙 輝

（吉林省腫瘤醫(yī)院胸部腫瘤外一科，長春 130021）

多原發(fā)性肺癌 （multipleprimary lungcancer，MPLC）是指在同一患者肺內(nèi)同時(shí)或先后發(fā)生兩個(gè)或兩個(gè)以上原發(fā)性惡性腫瘤[1]，分為同時(shí)性（synchronous）和異時(shí)性 （metachronous）兩種。然而關(guān)于MPLC發(fā)病機(jī)制及診斷始終沒有一個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)，研究表明多原發(fā)肺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移與P53基因突變及P53基因信號傳導(dǎo)通路密切相關(guān)[2]，現(xiàn)以P53蛋白、CDC7蛋白在多原發(fā)肺腺癌原發(fā)灶中表達(dá)，探討其與多原發(fā)肺癌臨床病理學(xué)特征關(guān)系和發(fā)病機(jī)制。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集吉林省腫瘤醫(yī)院2017年1月－2020年12月接受手術(shù)治療且病理為腺癌（排除轉(zhuǎn)移癌）的多原發(fā)肺癌患者56例（每例均有 2個(gè)或2個(gè)以上獨(dú)立病灶），術(shù)前均未做任何治療。56例中男20例，女36例；年齡 36～76歲，平均56歲。臨床癥狀表現(xiàn)為無癥狀體檢發(fā)現(xiàn)18例，咳嗽20例，胸痛8例，胸悶10例。同時(shí)性38例中病灶位于同側(cè)右肺內(nèi)的12例，同側(cè)左肺內(nèi)的10例，左右兩側(cè)肺內(nèi)均有16例。異時(shí)性18例中病灶位于同側(cè)右肺內(nèi)的6例，同側(cè)左肺內(nèi)的4例，對側(cè)肺內(nèi)均有8例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

病變組織、正常肺組織分別采用免疫組化二步法，P53蛋白、CDC7蛋白抗體的工作稀釋度分別為1: 200、1: 100、1: 50，以半定量法判定結(jié)果。P53 主要表達(dá)于癌細(xì)胞核，CDC7主要表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿，陽性細(xì)胞呈棕黃色或棕褐色顆粒。每例標(biāo)本隨機(jī)選取5個(gè)不同高倍視野（各計(jì) 100 個(gè)細(xì)胞），計(jì)算腫瘤細(xì)胞中 P53、CDC7表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)。P53、CDC7蛋白陽性細(xì)胞的計(jì)算：1）首先，按陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分： 0%～5%為0分，5%＜1分＜25%，25%＜2分＜50%，50%＜3分＜75%，＞75%為4分。2）再按陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深棕黃/棕褐色為3分。兩者之和所得總分進(jìn)行判斷，0-2分為陰性（-），3-7 分為陽性（+）。每例患者有2個(gè)病灶，將（-、-）記為陰性，（-、+）和（+、+）記為陽性結(jié)果。病變組織、正常肺組織行Western blotting檢測腫瘤組織中P53蛋白、CDC7蛋白的表達(dá)。結(jié)果應(yīng)用 Phoretix ID 軟件灰度掃描，其數(shù)值為相應(yīng)蛋白與內(nèi)參蛋白（GAPDH）相除得到的相對光密度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS 17.0軟件包分析，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組內(nèi)兩兩比較采用t檢驗(yàn)，百分率差異檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 56例NSCLC患者臨床基線資料

見表1。

表1 56例NSCLC患者臨床基線資料

2.2 P53、CDC7蛋白免疫組化檢測結(jié)果

P53 表達(dá)陽性染色主要顯示為細(xì)胞核呈棕色。56例肺癌組織中P53 陽性率為42%。56例正常肺組織中P53、CDC7蛋白不表達(dá)或幾乎不表達(dá)。與正常肺組織相比，P53蛋白的表達(dá)水平差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。CDC7蛋白陽性染色主要顯示為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，陽性率為56%。與正常肺組織相比，CDC7蛋白的表達(dá)水平差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（見圖1）。

圖1 P53蛋白、CDC7蛋白在正常組織及肺癌組織中的表達(dá)

2.3 多原發(fā)肺癌中P53蛋白、CDC7蛋白的表達(dá)水平

見表2。

表2 多原發(fā)肺癌中P53蛋白、CDC7蛋白的表達(dá)水平

3 討論

Spurgers等[3]研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的CDC7和P53缺失相關(guān)，很多研究表明P53的缺失和靶基因的轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)，P53能夠選擇性的抑制靶基因，影響細(xì)胞應(yīng)答，而且這種抑制對于P53誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯是非常重要的。最近的研究表明很多涉及DNA復(fù)制的基因可能都受到P53抑制，包括CDC6、CDC2和 CDC7等。Bonte等[4]引對57個(gè)腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行對比之后發(fā)現(xiàn)，CDC7蛋白表達(dá)和P53突變之間具有顯著相關(guān)性，過表達(dá)CDC7的細(xì)胞系中大約90%都伴有P53突變。許丹丹等[5]報(bào)道CDC7作為一種蛋白激酶，在正常細(xì)胞中表達(dá)很低，但在細(xì)胞周期中發(fā)揮重要的作用。隨著研究的不斷深入，越來越多的證據(jù)表明它與腫瘤密切相關(guān)。寧暉等[6]P53、HER2和K-ras在多原發(fā)性肺癌原發(fā)灶中過度表達(dá)率分別為 37.26%、47.06%和39.22%，38例正常肺上皮組織中P53、HER2、K-ras不表達(dá)或幾乎不表達(dá)。

本研究通過檢測多原發(fā)肺癌中P53、CDC7蛋白的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)多原發(fā)肺癌患者腫瘤組織中P53蛋白和CDC7蛋白的表達(dá)均增高，但P53表達(dá)的水平與患者年齡、性別、吸煙史及腫瘤的分期無關(guān)（P＞0.05）。多原發(fā)肺癌患者腫瘤組織中CDC7蛋白表達(dá)的水平與患者年齡、性別及吸煙史因素?zé)o關(guān)（P＞0.05）。在多原發(fā)肺癌中P53、CDC7的表達(dá)均明顯表達(dá)，說明在多原發(fā)肺癌的發(fā)生過程中至少存在2種蛋白的參與。P53、CDC7蛋白的共同表達(dá)，說明這兩種蛋白可能有協(xié)同致癌作用。多原發(fā)肺癌患者腫瘤組織中CDC7蛋白表達(dá)的水平與患者病理分期因素有關(guān)，中晚期肺癌患者腫瘤組織中CDC7蛋白表達(dá)明顯高于早期。在多原發(fā)肺癌中P53蛋白的表達(dá)水平的高低與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯關(guān)系，CDC7蛋白的表達(dá)水平的高低與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯關(guān)系，CDC7蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的多原發(fā)肺癌組織中，陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。這說明CDC7蛋白的表達(dá)水平高與患者術(shù)后預(yù)后有關(guān)，是多原發(fā)肺癌預(yù)后不良的指標(biāo)。在多原發(fā)肺癌中CDC7的表達(dá)高低是否受P53蛋白的調(diào)節(jié)和影響，暫無法確定，有待于進(jìn)一步研究。