Gal-9、CCL23、AI在卵巢上皮性癌患者中的表達(dá)及其影響因素

洪進(jìn)德

卵巢上皮性癌占卵巢腫瘤的50.0%～70.0%[1]。由于子宮頸癌病灶部位較為特殊，多數(shù)患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，隨著病程的延長(zhǎng)，部分患者發(fā)生病灶轉(zhuǎn)移，成為患者死亡的重要原因[2]。病理組織檢查是卵巢上皮性癌患者診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是該檢查方法具有較高的風(fēng)險(xiǎn)性、創(chuàng)傷性，對(duì)儀器及設(shè)備要求較高，難以在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用[3]。血清半乳凝素9（Gal-9）在人體中分布廣泛，可參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖凋亡及細(xì)胞黏附等作用，能直接參與多種實(shí)體瘤的發(fā)生、發(fā)展[4]。既往研究表明，Gal-9 在機(jī)體炎癥反應(yīng)、腫瘤轉(zhuǎn)移及細(xì)胞分化中發(fā)揮了重要作用[5-6]。CC 類趨化因子配體23（CCL23）則能通過誘導(dǎo)白細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，向局部受損部位遷移，直接參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)[7-8]。但Gal-9、CCL23 在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及在疾病中的作用機(jī)制并未闡明[9]。本研究以卵巢上皮性癌患者、卵巢良性疾病患者及健康體檢者為研究對(duì)象，探討Gal-9、CCL23 及AI 在卵巢上皮性癌患者中的表達(dá)及其影響因素，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018 年1 月-2020 年12 月九江市第一人民醫(yī)院收治卵巢上皮性癌患者60 例為觀察組；選擇同期本院治療的卵巢良性腫瘤患者48 例為對(duì)照1 組；選擇同期本院健康體檢女性54 例為對(duì)照2 組。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合卵巢上皮性癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)病理檢查確診；（2）病情穩(wěn)定，能配合檢查。對(duì)照1 組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合卵巢良性腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[10-11]；（2）具有完整的基線資料。對(duì)照2 組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往體健，近期未手術(shù)治療；（2）能進(jìn)行有效的溝通與交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并精神異常、其他部位惡性腫瘤或伴有自身免疫系統(tǒng)疾病者；（2）生化檢查前患者常規(guī)行放化療、生物免疫治療或伴有嚴(yán)重肝腎功能異常者；（3）凝血功能異常、認(rèn)知障礙或研究期間死亡者。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均簽署同意書。

1.2 方法（1）標(biāo)本采集。觀察組、對(duì)照1 組于入院后第2 天早晨9：00、對(duì)照2 組于健康體檢當(dāng)天均空腹采集外周靜脈血3 mL，離心后低溫保存、備用。（2）Gal-9、CCL23 檢測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定各組Gal-9、CCL23 水平，試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。（3）細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）檢測(cè)。采用流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定觀察組與對(duì)照1 組和對(duì)照2 組不同組織中AI 指數(shù)：各組取外周空腹血5 mL，5 min 離心，速度4 500 r/min，去除上清。向標(biāo)本中加入預(yù)冷的70.0%乙醇進(jìn)行固定，4 ℃下過夜。次日5 min 離心后去除上清，并采用PBS1 次漂洗，加入N-糖苷酶F（PNGase F），37 ℃下連續(xù)作用30 min。上述操作完畢后加入1 mL 碘化丙啶（PI）50 μg/mL，4 ℃下避光20 min 染色后過濾，并給予流式細(xì)胞術(shù)（FCM）測(cè)定，從而完成不同組織中AI測(cè)定，所有操作均嚴(yán)格遵循試劑盒說明書完成；查閱觀察組患者病歷資料，記錄患者的年齡、腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織分類，分析不同病理類型下Gal-9、CCL23 和AI 表達(dá)水平，采用單因素及多元線性回歸分析影響因素。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 24.0 軟件處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，三組間比較采用方差分析，其中兩兩間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 觀察組年齡51～76 歲，平均（57.67±5.71）歲；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期35 例，Ⅲ～Ⅳ期25 例；分化類型：低分化25 例，中分化21 例，高分化14 例；組織病理學(xué)分型：卵巢漿液性腺癌23 例，子宮內(nèi)膜樣癌15 例，黏液性腺癌22 例。對(duì)照1 組年齡50～78 歲，平均（59.68±5.98）歲；疾病類型：卵巢黏液性囊腺瘤21 例，單純性卵巢囊腫19 例，卵巢漿液性囊腺瘤8 例。對(duì)照2 組，年齡47～79 歲，平均（58.71±5.79）歲。三組年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 三組Gal-9、CCL23 及AI 比較 觀察組Gal-9、CCL23、AI 均高于對(duì)照1 組與對(duì)照2 組（P＜0.05）；對(duì)照1組中Gal-9、CCL23、AI 均高于對(duì) 照2 組（P＜0.05）。見表1。

表1 三組Gal-9、CCL23及AI比較（）

表1 三組Gal-9、CCL23及AI比較（）

*與對(duì)照2 組比較，P＜0.05；#與對(duì)照1 組比較，P＜0.05。

2.3 不同病理類型下Gal-9、CCL23 水平比較 不同年齡、不同病理組織學(xué)分類卵巢上皮性癌患者的Gal-9、CCL23 水平表達(dá)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同分化程度、不同腫瘤分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Gal-9、CCL23 水平表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病理類型下Gal-9、CCL23水平比較（）

表2 不同病理類型下Gal-9、CCL23水平比較（）

2.4 Gal-9、CCL23 及AI 指數(shù)在卵巢癌中表達(dá)影響因素分析 多元線性回歸分析結(jié)果表明：腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為卵巢癌患者中Gal-9、CCL23 及AI 的影響因 素（P＜0.05）。見表3、4、5。

表3 Gal-9在卵巢癌中表達(dá)影響多因素分析

表4 CCL23在卵巢癌中表達(dá)影響多因素分析

表5 AI指數(shù)在卵巢癌中表達(dá)影響多因素分析

3 討論

Gal-9 廣泛存在于人體中，不僅能分布在細(xì)胞核中，亦可分布在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞外基質(zhì)中，其廣泛的組織分布提示其具有多樣性功能[12-16]。研究表明，Gal-9 在胃腸道、肝臟及各種免疫細(xì)胞中呈高表達(dá)，且在胃癌、乳腺癌及前列腺癌中亦可測(cè)出Gal-9[17]。因此，Gal-9 能直接參與多種實(shí)體瘤的發(fā)生、發(fā)展，其表達(dá)水平能反映患者的疾病嚴(yán)重程度[18]。CCL23是目前唯一與CC 趨化因子受體相互作用的細(xì)胞因子，其作用與β-防御素屬性相當(dāng)[19]。既往研究表明，CCL23 能直接參與腫瘤的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移[20]。趨化因子及其受體在多種細(xì)胞中表達(dá)，且越來越多證據(jù)表明，CCL23 在多種類型癌癥中能促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，亦可參與癌癥的發(fā)生、血管形成與浸潤(rùn)。本研究中，觀察組卵巢上皮性癌患者中Gal-9、CCL23、AI 均高于對(duì)照1 組與對(duì)照2 組（P＜0.05）；對(duì)照1 組中Gal-9、CCL23、AI 均高于對(duì)照2 組（P＜0.05）；不同年齡、不同病理組織學(xué)分類卵巢上皮性癌患者的Gal-9、CCL23 水平表達(dá)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同分化程度、不同腫瘤分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Gal-9、CCL23 水平表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示Gal-9、CCL23在卵巢上皮性癌中呈高表達(dá)，且與患者的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等存在緊密的聯(lián)系。

卵巢上皮性癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素作用的過程，常伴有腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡。既往研究表明，細(xì)胞凋亡是有核細(xì)胞在一定條件下通過自身內(nèi)部機(jī)制啟動(dòng)而引起的細(xì)胞自然死亡的過程[21]。因此，細(xì)胞凋亡屬于是有絲分裂相反方式的調(diào)節(jié)，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。既往研究表明，卵巢上皮性癌中腫瘤細(xì)胞凋亡水平相對(duì)較低，更多以腫瘤的增殖為主，亦可增加臨床治療難度度。本研究多元線性回歸分析顯示，腫瘤分化程度、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為卵巢上皮性癌患者中Gal-9、CCL23 及AI 的影響因素（P＜0.05），由此看出，卵巢上皮性癌患者中，Gal-9、CCL23、AI 能反映患者的病情嚴(yán)重程度。因此，臨床上對(duì)于卵巢上皮性癌患者中應(yīng)加強(qiáng)患者Gal-9、CCL23 水平測(cè)定，評(píng)估并預(yù)測(cè)患者的AI，了解患者病情發(fā)展情況，為臨床診療提供參考依據(jù)。

綜上所述，Gal-9、CCL23、AI 在卵巢上皮性癌患者中均呈高表達(dá)，其表達(dá)水平能反映患者的疾病嚴(yán)重程度，但患者表達(dá)水平影響因素較多，加強(qiáng)患者Gal-9、CCL23 水平測(cè)定能評(píng)估患者預(yù)后。