水蛭素通過(guò)調(diào)控p38 MAPK/NF-κB信號(hào)通路抗肺纖維化的作用及機(jī)制研究

賀 彬，曾 騫，劉 偉，劉理靜，曾飛元，印 瓊，王 慧

(1.湖南醫(yī)藥學(xué)院護(hù)理學(xué)院，湖南 懷化 418000；2.中南大學(xué)湘雅護(hù)理學(xué)院， 湖南 長(zhǎng)沙 410000；3. 長(zhǎng)沙民政職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410000)

肺纖維化(pulmonary fibrosis，PF)是一種慢性、進(jìn)展性、致死性的肺間質(zhì)疾病，以肺泡間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞大量增殖和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白過(guò)度沉積為特征，最終導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)破壞[1]，是一系列慢性肺部疾病的共同結(jié)局。近些年來(lái)，PF的發(fā)病率和死亡率在世界各地均呈上升趨勢(shì)，有數(shù)據(jù)顯示，PF確診后的生存中位數(shù)2.9年，5年生存率<50%，對(duì)人類(lèi)健康帶來(lái)嚴(yán)重危害[2]。目前，除肺移植之外尚缺乏有效的治療手段。因此，以肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)為切入點(diǎn)，研發(fā)靶向治療藥物對(duì)于改善肺纖維化預(yù)后具有十分重要的價(jià)值。

水蛭素是從吸血水蛭唾液腺中提取的一種活性成分，為單鏈環(huán)肽化合物，由65個(gè)氨基酸殘基組成，是天然的凝血酶抑制劑，能與凝血酶以1 ∶1特異性結(jié)合[3]，具有抗凝、抗炎、抗腫瘤、抗風(fēng)濕等生物學(xué)作用[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，水蛭素通過(guò)抑制大鼠腎間質(zhì)NF-κB的活化延緩單側(cè)輸尿管結(jié)扎誘導(dǎo)的大鼠腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展[5]，減少NF-κB的激活來(lái)保護(hù)大鼠背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元免受高糖誘導(dǎo)的損傷[6]。雖有研究報(bào)道水蛭素通過(guò)減少TGF-β1的表達(dá)減輕大鼠肺纖維化，然而，水蛭素抗纖維化的機(jī)制仍未完全闡明。本研究通過(guò)氣管內(nèi)注射博萊霉素構(gòu)建肺纖維化大鼠模型，通過(guò)檢測(cè)肺組織炎癥因子和纖維化相關(guān)蛋白表達(dá)，旨在揭示p38MAPK/NF-κB信號(hào)通路在水蛭素抗肺纖維化中的作用，為其臨床應(yīng)用于肺纖維化的治療提供新的視角。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠60只，♂，6周齡，體質(zhì)量(200～220) g，購(gòu)于湖南省長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(湘)2019-0014。飼養(yǎng)于中南大學(xué)動(dòng)物學(xué)部，環(huán)境溫度 (23±2)℃，濕度 60%±10%，12 h ∶12 h晝夜比周期循環(huán)，不限制食物和水的攝入，構(gòu)建動(dòng)物模型前先進(jìn)行1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)動(dòng)物死亡，未觀察到不良反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)方案已通過(guò)湖南醫(yī)藥學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑及儀器注射用博萊霉素A5購(gòu)自天津太和制藥有限公司(批號(hào)：180901)，水蛭素購(gòu)自廣西科康科技集團(tuán)有限公司(批號(hào)：20190901)，醋酸潑尼松片購(gòu)自安陽(yáng)市華安藥業(yè)有限公司(批號(hào)：181111)，ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，TRIzol試劑購(gòu)自艾科瑞生物(貨號(hào)：AG21102，編號(hào)：A3A0028)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自賽默飛公司(貨號(hào)：K16622，批號(hào)：01036205)，由上海生工生物工程公司合成qRT-PCR所需引物，SYBR Green Real Time PCR Master Mix 購(gòu)自于Promega公司(貨號(hào)：A6001，批號(hào)：0000467613)，p-p38 MAPK抗體(貨號(hào)：4511T，批號(hào)：13)、p38MAPK抗體(貨號(hào)：8690T，批號(hào)：9)，NF-κB p-p65抗體(貨號(hào)：333T)、NF-κB p65抗體(貨號(hào)：8242T)購(gòu)自CST公司，p-IκB抗體(貨號(hào)：abs130622)、IκB抗體(貨號(hào)：abs122175)購(gòu)自Absin公司，GAPDH抗體(貨號(hào)：#37985，批號(hào)：4023)SAB公司，Ⅰ型膠原蛋白(type Ⅰ collagen,COLⅠ)抗體(貨號(hào)：14695AP，批號(hào)：00096972)購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)抗體(貨號(hào)：ab5649，批號(hào)：GR3263275-6)購(gòu)自Abcam。Syngene Gnome XQR印跡掃描儀(英國(guó)Syngene公司)，PCR儀(美國(guó)Thermo公司)，熒光定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司)，Varioskan LUX多功能微孔板讀數(shù)儀(美國(guó)Thermo公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組進(jìn)行1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，使用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)抽取10只大鼠作為對(duì)照組，余50只大鼠隨機(jī)分為模型組、水蛭素低、中、高濃度組和醋酸潑尼松組，每組10只。

1.4 動(dòng)物模型建立與處理腹腔注射3 mL·kg-1濃度為100 g·L-1水合氯醛對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，麻醉后的大鼠呈仰臥位固定于鼠板上，頸部脫毛，75%乙醇消毒頸部皮膚，縱行切開(kāi)頸部皮膚，鈍性分離暴露氣管，用1 mL注射器向氣管內(nèi)一次性準(zhǔn)確注入溶解了博萊霉素A5(5 mg·kg-1)的生理鹽水0.2 mL，對(duì)照組注入生理鹽水0.2 mL；注射完畢立即將大鼠垂直豎立，左右旋轉(zhuǎn)鼠板約1 min，使藥物在肺部分布均勻，縫合切口，觀察待麻醉蘇醒后正常喂養(yǎng)。大鼠肺纖維化的模型構(gòu)建參照文獻(xiàn)[7]。d 2起，水蛭素各干預(yù)組的濃度根據(jù)課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和文獻(xiàn)[8]設(shè)定，分別給予水蛭素(25、50、100 AT-U·mL-1，1 mL·kg-1)溶解于生理鹽水后皮下注射，潑尼松組給予5 mg·kg-1溶解于生理鹽水中的醋酸潑尼松溶液2 mL灌胃，對(duì)照組給予2 mL生理鹽水灌胃，給藥次數(shù)均為1次·d-1。所有大鼠在d 28處死，取右肺組織放入液氮中凍存，供羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)、炎癥因子含量和相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測(cè)。4%多聚甲醛經(jīng)主支氣管向左肺注入，肺泡展開(kāi)后再放入4%多聚甲醛中固定，24 h后進(jìn)行石蠟包埋，用于后續(xù)肺組織病理學(xué)檢查。

1.5 肺組織病理學(xué)檢查取固定后的大鼠左肺組織脫水透明、浸蠟包埋、切片進(jìn)行HE染色和Masson染色，顯微鏡下觀察肺組織病理變化，通過(guò)Image-ProPlus 6.0圖像分析軟件評(píng)價(jià)肺泡炎癥和肺纖維化程度，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[7]。

1.6 肺組織HYP含量測(cè)定稱取100 mg大鼠肺組織，充分勻漿后，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液，嚴(yán)格按照試劑盒提供的檢測(cè)方法對(duì)HYP含量進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)試劑盒提供的公式進(jìn)行計(jì)算，以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.7 qRT-PCR檢測(cè)COL-Ⅰ、α-SMA mRNA水平稱取50 mg大鼠肺組織與無(wú)酶鋼柱一同放入研磨管中，加入1 mL TRIzol充分研磨，取上層備用，加入異丙醇沉淀，乙醇洗除雜質(zhì)，加入30 μL DEPC水輕柔混勻，用紫外分光光度計(jì)對(duì)每個(gè)樣本總RNA的濃度、純度進(jìn)行測(cè)定，各樣本A260/280比值在1.8～2.0之間，符合實(shí)驗(yàn)要求。取RNA 2 μL，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒提供的步驟合成cDNA。取10 μL cDNA進(jìn)行PCR反應(yīng)，以GAPDH為內(nèi)參，計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。各引物序列見(jiàn)Tab 1。

1.8 Western blot法檢測(cè)肺組織p38 MAPK/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平及COL-Ⅰ、α-SMA的表達(dá)水平稱取100 mg大鼠肺組織加入到含蛋白酶、磷酸酶抑制劑的RIPA 裂解液中，充分研磨，冰盒上裂解30 min充分裂解組織，離心取上清備用，使用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，加入等體積5%巰基乙醇的 2×loading buffer，放入金屬蛋白浴100 ℃，15 min，使蛋白變性。制備10% SDS-PAGE，取30 μg蛋白上樣，進(jìn)行電泳并轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶或BSA封閉兩小時(shí)后分別加入稀釋的山羊抗兔p38 MAPK、p-p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB p-p65、p-IκB、ⅠκB抗體(1 ∶1 000)，4 ℃孵育過(guò)夜；TBST洗膜3次，加入稀釋后的二抗(1 ∶5 000)，室溫孵育1 h；最后用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行顯色和曝光，使用ImageJ軟件分析得出目的蛋白灰度值(A)，目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白/內(nèi)參GAPDH。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺組織中炎癥因子IL-6、TNF-α濃度ELISA試劑盒使用前常溫下平衡20 min，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL，樣本孔先加待測(cè)肺組織勻漿液后加樣本稀釋液。各孔再加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，37 ℃恒溫箱溫育60 min。洗板，加入底物A、B液，37 ℃避光孵育15 min。加入終止液，15 min內(nèi)在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值，通過(guò)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IL-6、TNF-α濃度。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 肺組織病理學(xué)改變實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有大鼠均無(wú)死亡，未發(fā)現(xiàn)出血現(xiàn)象。HE染色結(jié)果和Masson染色顯示，對(duì)照組大鼠肺組織未發(fā)現(xiàn)肺泡炎性滲出及纖維化病變，肺泡結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠肺間質(zhì)內(nèi)有較多的片狀實(shí)變區(qū)，肺泡壁明顯增寬，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，成纖維細(xì)胞大量增生，可見(jiàn)大量藍(lán)色膠原積聚在肺間質(zhì)內(nèi)，形成廣泛纖維化病灶(Fig 1A，1B)。

Fig 1 Effect of hirudin on histopathological changes in BLM induced PF rats (×200)

定量分析顯示模型組大鼠肺泡炎癥及纖維化得分均高于對(duì)照組(P<0.05)，與模型組相比，水蛭素各濃度干預(yù)組和潑尼松組肺泡炎癥及纖維化得分明顯降低(P<0.05)，并以中、高濃度組和潑尼松組改善尤為明顯，見(jiàn)Tab 2。

2.2 肺組織HYP的含量與對(duì)照組相比，模型組肺組織HYP的含量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組相比，水蛭素干預(yù)組和潑尼松組肺組織HYP含量均減少，且呈濃度依賴效應(yīng)，并以中、高濃度水蛭素組和潑尼松組最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)Tab 2。

Tab 2 Comparison of pulmonary inflammation and fibrosis scores and HYP contents among groups

2.3 肺組織COL-Ⅰ、α-SMA mRNA與蛋白的表達(dá)水平與對(duì)照組相比，模型組大鼠肺組織COL-Ⅰ、α-SMA mRNA與蛋白的表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，水蛭素干預(yù)組與潑尼松組大鼠肺組織COL-Ⅰ、α-SMA mRNA與蛋白表達(dá)水平明顯減輕(P<0.05)，以中、高濃度組更為明顯(Fig 2、3)。

Fig 2 Expression of collagen Ⅰ，α-SMA proteins detected by

Fig 3 Relative signal intensity of α-SMA ，collagen Ⅰ mRNA by qRT-PCR

2.4 p38 MAPK/NF-κB p65信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)

2.4.1水蛭素對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化中p38 MAPK 磷酸化的影響 與對(duì)照組相比，模型組肺組織p-p38 MAPK表達(dá)水平明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，水蛭素干預(yù)組和潑尼松組明顯降低肺纖維化大鼠肺組織p-p38 MAPK的表達(dá)(P<0.05)，且呈濃度依賴效應(yīng)，尤其以中、高濃度組最為明顯(Fig 4)。

2.4.2水蛭素抑制肺組織中NF-κB 的活化 與對(duì)照組相比，模型組NF-κB p-p65、p-IκB表達(dá)水平明顯增多(P<0.05)；與模型組相比，水蛭素干預(yù)組和潑尼松組明顯降低肺纖維化大鼠肺組織NF-κB p-p65、p-IκB的表達(dá)(P<0.05)，且呈濃度依賴效應(yīng)，尤其以中、高濃度組最為明顯(Fig 4)。

Fig 4 Expression of p38 MAPK/NF-κB P65 signaling pathway related proteins detected by Western blot

2.5 肺組織炎癥因子TNF-α、IL-6濃度與對(duì)照組相比，模型組大鼠肺組織TNF-α與IL-6的濃度明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，水蛭素干預(yù)組與潑尼松組TNF-α與IL-6的濃度明顯減輕(P<0. 05)，以中、高濃度組更為明顯(Fig 5)。

Fig 5 Contents of IL-6 and TNF-α in lung

3 討論

肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過(guò)程復(fù)雜，免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒類(lèi)藥物是目前治療肺纖維化的主要藥物，但無(wú)論是哪種治療方法，療效均不佳，并且由于長(zhǎng)時(shí)間使用可出現(xiàn)嚴(yán)重的毒副作用，特發(fā)性肺纖維化指南2015版將吡非尼酮(pirfenidone，PFD)和尼達(dá)尼布(nintedanib，BIBF 1120)列為有條件的推薦[9]，然而，兩種藥物不良反應(yīng)較多且成本較高，未有可靠的證據(jù)證實(shí)兩種藥物能明顯改善患者預(yù)后。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)不良反應(yīng)少，價(jià)格相對(duì)低廉的中醫(yī)藥來(lái)補(bǔ)充現(xiàn)階段西藥治療肺纖維化的不足。近年來(lái)，中醫(yī)藥及天然產(chǎn)物在治療肺纖維化方面取得了很大的進(jìn)展，如白藜蘆醇、紫檀芪、黃芪甲苷等，以其多途徑、多靶點(diǎn)、副作用少、療效明顯成為當(dāng)下肺纖維化治療的新視角。水蛭入藥始載于東漢時(shí)期《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有較強(qiáng)的破血通經(jīng)、逐瘀消癥的作用[10]。水蛭素為其主要有效成分，近些年來(lái)，除了抗凝、抗血栓作用外，水蛭素一些新的生物活性作用逐漸凸顯。

博萊霉素氣管內(nèi)注射誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型在肺組織病理學(xué)改變及肺功能等方面與人類(lèi)肺纖維化最為相近，是目前應(yīng)用最為廣泛的動(dòng)物模型[11]。本課題組肺纖維化大鼠造模方法已非常成熟，經(jīng)HE染色、Masson染色可見(jiàn)模型組肺泡間隔增寬，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺間質(zhì)可見(jiàn)大量藍(lán)色膠原沉積，說(shuō)明建模成功；水蛭素不同濃度組干預(yù)后肺組織膠原沉積程度和范圍明顯減小，肺泡炎及纖維化評(píng)分明顯降低，尤其以中、高濃度組最為明顯，說(shuō)明水蛭素能減輕肺部炎癥和肺纖維化。

正常情況下，細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的合成與分解處于動(dòng)態(tài)平衡，有助于維持肺組織的正常結(jié)構(gòu)與功能，COL Ⅰ、COL Ⅲ是ECM的主要組成成分，二者由肺成纖維細(xì)胞和轉(zhuǎn)分化后的肌成纖維細(xì)胞合成，當(dāng)肺組織受損時(shí)，肺成纖維細(xì)胞增殖并分化為肌成纖維細(xì)胞，產(chǎn)生過(guò)多的ECM，并在肺間質(zhì)內(nèi)過(guò)度蓄積，造成肺實(shí)質(zhì)廣泛損傷和重塑，觸發(fā)肺纖維化[12]。α-SMA是肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志，它分泌ECM的能力比肺成纖維細(xì)胞高4～5倍。HYP為膠原中特有的氨基酸，其含量常用作評(píng)價(jià)膠原蛋白含量的重要指標(biāo)。因此，檢測(cè)肺組織中HYP含量，COLⅠ、α-SMA mRNA及蛋白的表達(dá)水平能準(zhǔn)確反映出肺組織中ECM合成與分解代謝情況，評(píng)價(jià)肺纖維化的嚴(yán)重程度。減少HYP含量，減少COLⅠ、α-SMA mRNA及蛋白的表達(dá)是肺纖維化減輕的標(biāo)志[13]。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，水蛭素干預(yù)后HYP含量及COLⅠ、α-SMA mRNA及蛋白的表達(dá)水平明顯低于模型組，表明水蛭素對(duì)肺纖維化進(jìn)程中細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度合成具有抑制作用，能有效改善膠原蛋白的積聚，減輕肺纖維化。

肺纖維化的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)十分復(fù)雜的病理生理過(guò)程，雖然其發(fā)生機(jī)制尚未完全研究透徹，但過(guò)度的肺部炎癥反應(yīng)已被證實(shí)在其發(fā)生發(fā)展中起重要作用，是肺纖維化的啟動(dòng)者和驅(qū)動(dòng)力，大量研究證明，抑制炎癥反應(yīng)可以有效抑制肺纖維化[13]。組織損傷后，上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，引發(fā)抗纖溶性凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致血栓的形成，白細(xì)胞被招募，隨后被趨化因子、生長(zhǎng)因子激活并誘導(dǎo)增殖。活化的白細(xì)胞進(jìn)一步分泌、釋放促纖維化細(xì)胞因子如TGF-β等[14]。炎癥因子不僅直接導(dǎo)致肺泡上皮細(xì)胞損傷，還能激活炎癥反應(yīng)形成惡性循環(huán)，加重肺損傷，加速肺纖維化的進(jìn)展[13]。NF-κB是細(xì)胞內(nèi)重要的核轉(zhuǎn)錄因子，參與了多種細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，在炎癥反應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)中起重要作用[15-16]。阻斷NF-κB 激活及炎癥因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是肺纖維化防治的重要手段。NF-κB通常以p50-p65二聚體形式與IκB結(jié)合成復(fù)合體，呈失活狀態(tài)存在于胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到促炎因子、抗原、TNF-α、損傷DNA的化學(xué)物質(zhì)和輻射等信號(hào)刺激時(shí)[16]，激活I(lǐng)κB激酶，IκB與NF-κB解離，游離的NF-κB迅速?gòu)陌|(zhì)移入胞核，在核內(nèi)與目的基因如IL-6、TNF-α、IL-17中特異性序列結(jié)合，強(qiáng)烈誘導(dǎo)促炎介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與釋放，并且NF-κB激活后的產(chǎn)物如TNF-α、IL-1β等又能反向激活NF-κB，從而形成一個(gè)能放大且延續(xù)炎癥反應(yīng)的復(fù)雜調(diào)節(jié)環(huán)路，導(dǎo)致“瀑布效應(yīng)”的發(fā)生[17]。阻斷NF-κB激活是在上游控制炎癥反應(yīng)的有效方法。絲裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)級(jí)聯(lián)反應(yīng)信號(hào)通路是最關(guān)鍵的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑之一，主要分為ERK、JNK和p38MAPK 3個(gè)途徑，參與不同的生物過(guò)程，其中p38 MAPK途徑主要與炎癥、細(xì)胞生長(zhǎng)和應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，p38 MAPK是NF-κB的上游基因[15]。研究發(fā)現(xiàn)，氣管內(nèi)注射博萊霉素可通過(guò)激活p38 MAPK/NF-κB信號(hào)通路導(dǎo)致肺纖維化，抑制該信號(hào)通路能明顯減輕肺纖維化[18]。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，模型組大鼠肺組織p-p38 MAPK、NF-κB p-p65、p-IκB蛋白水平明顯升高，說(shuō)明模型組大鼠肺組織p38 MAPK /NF-κB信號(hào)通路被激活，水蛭素可以有效地逆轉(zhuǎn)這些變化，這些結(jié)果提示水蛭素通過(guò)抑制p38 MAPK /NF-κB信號(hào)通路的激活，減少肺組織IL-6、TNF-α的含量，減輕肺組織炎癥反應(yīng)，減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積，從而緩解肺纖維化的進(jìn)展。

綜上所述，本研究結(jié)果提示，水蛭素對(duì)大鼠肺纖維化有保護(hù)作用，其機(jī)制與調(diào)控p38 MAPK /NF-κB信號(hào)通有關(guān)，該結(jié)果為水蛭素作為治療肺纖維化的潛在藥物提供了新的證據(jù)。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在侗醫(yī)藥研究湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和中南大學(xué)湘雅護(hù)理學(xué)院慢性病基礎(chǔ)研究與健康管理實(shí)驗(yàn)室完成，感謝各位同事和老師的指導(dǎo)與幫助。)