重度子癇前期孕婦中MCP-1、IL-37的表達及臨床意義

閆肖肖 林小滿 孫禮強 韓秋峪

子癇前期(preeclampsia，PE)可累及多個器官功能受損，與孕產(chǎn)婦的不良妊娠結(jié)局密切相關(guān)[1]。就目前來看，PE的發(fā)病機制還不能明確，比如血管內(nèi)皮功能受到損傷、發(fā)生氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)等均在PE的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[2]。在SPE發(fā)病機制的前提條件中，胎盤炎性反應(yīng)起著重要作用[3]。MCP-1在機體免疫調(diào)節(jié)、炎性反應(yīng)中發(fā)揮作用得因于其能夠趨化、激活單核-吞噬細胞[4]。IL-37是近年來發(fā)現(xiàn)的一種抗炎性細胞因子，具有抑制炎性細胞因子表達的作用，在抑制炎性反應(yīng)方面發(fā)揮作用[5,6]。本研究將對重度子癇前期和正常妊娠孕婦血清及胎盤組織中MCP-1、IL-37的表達水平進行分析比較，為重度子癇前期的早期識別及治療提供幫助。

資料與方法

1.研究對象：收集2020年12月～2021年6月在徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的90例產(chǎn)婦為研究對象。按照第9版《婦產(chǎn)科學(xué)》妊娠期高血壓疾病診斷分類標(biāo)準(zhǔn)，分為早發(fā)型重度子癇前期(早發(fā)組)30例，晚發(fā)型重度子癇前期(晚發(fā)組)30例，選取30例同期正常產(chǎn)婦作為對照組[7]。本研究納入的產(chǎn)婦均為住院行剖宮產(chǎn)分娩的單胎妊娠，無高血壓、心臟病、糖尿病等慢性疾病史，無自身免疫相關(guān)疾病，無感染、炎癥及合并有其他內(nèi)外科疾病。本研究獲得筆者醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)(倫理學(xué)審批號：XYFY2021-KL294-01)，所有患者均簽署知情同意書。

2.樣本采集與保存：所有研究對象住院后，在未進行任何治療操作前抽取空腹肘靜脈血3ml，室溫下放置30min后以3000r/min離心10min，用冷存管取離心上清液放于-80℃冰箱中待測。在行子宮下段剖宮產(chǎn)術(shù)時，胎盤娩出后10min內(nèi)，采集母體面中央部位一塊約1.0cm×1.0cm×1.0cm大小、無出血、無鈣化灶的胎盤組織，0.9%氯化鈉溶液沖洗干凈后固定于10%甲醛溶液中，進行石蠟包埋切片。

3.實驗方法：ELISA試劑盒(上海雅吉生物有限公司)測定血清上清液中MCP-1、IL-37的濃度，MCP-1、IL-37抗體試劑盒分別購自武漢賽維爾生物科技有限公司、三鷹生物科技有限公司。對胎盤組織進行IHC測定，嚴格按照各試劑盒說明書進行ELISA和IHC。IHC圖片采用Image-pro-plus 6.0軟件進行定量分析。

結(jié) 果

1.研究人群的特征：3組孕婦的年齡、體重指數(shù)(BMI)及孕次之間比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。將每組產(chǎn)婦在分娩時的孕周進行比較，早發(fā)組、晚發(fā)組分娩孕周早于對照組，早發(fā)組早于晚發(fā)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表1)。

表1 3組孕婦一般資料比較

2.ELISA法檢測MCP-1、IL-37的表達水平：血清IL-37在早發(fā)組、晚發(fā)組中表達水平低于對照組，且早發(fā)組比晚發(fā)組IL-37表達水平低(P<0.05)；MCP-1在早發(fā)組、晚發(fā)組中表達水平比對照組高，且早發(fā)組比晚發(fā)組表達水平高(P<0.05，表2)。

表2 3組孕婦血清中MCP-1、IL-37水平的比較

3.免疫組化法測定MCP-1、IL-37蛋白表達水平：在SPE和正常妊娠產(chǎn)婦的胎盤組織中，MCP-1、IL-37均有表達，其中在合體滋養(yǎng)層細胞的胞質(zhì)內(nèi)集中表達IL-37，可見到黃色或棕黃色顆粒沉淀，MCP-1集中表達在絨毛血管內(nèi)皮細胞以及滋養(yǎng)細胞的胞質(zhì)內(nèi)，可見到黃色或棕黃色顆粒沉淀(圖1、圖2)。進行定量分析可采用Image-pro-plus 6.0軟件，可以得到與對照組比較，IL-37在早發(fā)組及晚發(fā)組中的表達水平更低，且早發(fā)組低于晚發(fā)組(P均<0.05)；MCP-1在早發(fā)組及晚發(fā)組中的表達水平更高，且早發(fā)組高于晚發(fā)組(P均<0.05，表3)。

圖1 3組孕婦胎盤組織中IL-37的表達(DAB染色，×200)A.早發(fā)組；B.晚發(fā)組；C.對照組

圖2 3組孕婦胎盤組織中MCP-1的表達(DAB染色，×200)A.早發(fā)組；B.晚發(fā)組；C.對照組

表3 3組孕婦胎盤組織中MCP-1、IL-37表達的比較

4.血清及胎盤組織中MCP-1、IL-37表達間的相關(guān)性：MCP-1與IL-37進行Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，可以看出血清中IL-37的表達與MCP-1呈負相關(guān)(r=-0.902，P<0.01)，胎盤組織中IL-37的表達與MCP-1呈負相關(guān)(r=-0.510，P<0.01，圖3、圖4和表4)。

圖3 血清MCP-1與IL-37濃度的散點圖

5.血清及胎盤組織中MCP-1、IL-37與孕周的相關(guān)性分析：3組產(chǎn)婦分娩孕周進行比較(P<0.05)，為進一步排除由于孕周不同造成MCP-1、IL-37表達的差異，將3組孕婦血清及胎盤組織的MCP-1、IL-37的表達分別與分娩孕周進行相關(guān)性分析，可以看到通過Pearson相關(guān)分析，3組孕婦IL-37和MCP-1的表達與分娩孕周無相關(guān)性(P>0.05，表5)。

圖4 胎盤組織MCP-1與IL-37平均光密度值散點圖

表4 血清及胎盤組織中MCP-1、IL-37的相關(guān)性分析

表5 血清及胎盤組織中MCP-1、IL-37與孕周的相關(guān)性分析

討 論

PE可導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡，造成母嬰不良結(jié)局[8]。有研究者認為，SPE在發(fā)病機制上早發(fā)型與晚發(fā)型之間存在差異，早發(fā)型SPE由于胎盤某一病理生理方面發(fā)生變化導(dǎo)致子宮螺旋小動脈重鑄不足，胎盤著床較淺，減少血液對胎盤的灌注，打破炎性細胞因子間的平衡，損害血管內(nèi)皮細胞功能; 而晚發(fā)型SPE的胎盤發(fā)育較為正常，但其自身方面可能存在新陳代謝異常[9]。

雖然對于所有的重度子癇前期孕婦都有炎性反應(yīng)和細胞因子分泌增加，但早發(fā)型與晚發(fā)型SPE比較有更顯著的炎性反應(yīng)和細胞因子升高[10]。在子宮胎盤螺旋動脈周圍，正常孕婦幾乎無巨噬細胞浸潤，在重度子癇前期孕婦中巨噬細胞大量浸潤, 但滋養(yǎng)細胞在重度子癇前期孕婦中的表達較低,這顯示子宮螺旋動脈重鑄不足可能與巨噬細胞的過度活化密切相關(guān)。

MCP-1是趨化因子CC亞族成員之一，是一種具有趨化單核-吞噬細胞作用的細胞因子，與其受體CCR2結(jié)合可誘導(dǎo)機體釋放大量炎性細胞因子，引起炎性反應(yīng)。陳巍等[11]研究顯示，NO、ET-1及MCP-1水平失衡在PE進展中起重要作用。MCP-1的激活可引起血管壁中單核-吞噬細胞的聚集、炎性細胞因子的釋放[12]。IL-37是IL-1家族一種新型抗炎性細胞因子，在單核細胞中進行表達，能夠降低促炎性細胞因子的促炎能力，抑制炎癥發(fā)展[13，14]。有研究顯示，IL-37在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心血管鈣化患者血漿中的表達顯著高于對照組正常人群，并且IL-37表達水平的變化隨著疾病活動程度的增加而升高[15，16]。IL-37在濕疹患者中的水平低于對照組[17，18]。聶華等[6]研究表明，IL-37在SPE中的表達明顯低于輕度PE及正常產(chǎn)婦。

在本次對血清及胎盤組織的研究中，MCP-1在早發(fā)組中的表達明顯高于晚發(fā)組及對照組，且晚發(fā)組高于對照組(P均<0.05)；IL-37在早發(fā)組、晚發(fā)組中的表達水平明顯低于對照組，且早發(fā)組低于晚發(fā)組(P均<0.05)。這表明，MCP-1的升高可誘導(dǎo)機體釋放大量炎性細胞因子，導(dǎo)致機體炎性水平的升高，起到促進疾病發(fā)展的作用，可能是由于IL-37抗炎性細胞因子的減少，降低了抗炎效應(yīng)，導(dǎo)致疾病的進展，而且3組孕婦IL-37和MCP-1的表達水平與分娩孕周無相關(guān)性。

綜上所述，筆者認為在SPE發(fā)生、發(fā)展過程中，IL-37表達水平的降低在疾病發(fā)展中抑制了抗炎作用發(fā)揮，可能由于IL-37抑炎作用的降低，在一定程度上促進了MCP-1促炎性細胞因子的表達，導(dǎo)致炎性反應(yīng)的失衡，進而促進了炎性疾病的進展，且PE發(fā)生越早，MCP-1水平升高越明顯，IL-37水平降低越明顯，而且導(dǎo)致炎性細胞因子異常表達的原因與妊娠孕周無關(guān)。PE發(fā)病機制復(fù)雜，是多因素綜合作用伴發(fā)全身多器官功能受損的綜合征。本研究對SPE進行炎性細胞因子表達水平的測定，研究結(jié)果顯示，炎性細胞因子的表達與其病情發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，這可能由于炎性反應(yīng)失衡導(dǎo)致炎性細胞因子表達發(fā)生改變，在一定程度上反映炎性反應(yīng)可能作為發(fā)病機制之一參與SPE病情的發(fā)展。由于本研究樣本量相對較少，后續(xù)將進一步擴大研究樣本量，旨在對重度子癇前期尤其是早發(fā)型重度子癇前期孕婦進行早期診斷和早期治療提供幫助。