• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鹽度對隱秘小環(huán)藻生長、沉降及藻殼物理性質(zhì)的影響?

    2022-09-05 04:33:12程云飛王路路朱葆華潘克厚
    關鍵詞:藻液硅藻微藻

    程云飛, 王路路, 李 赟, 朱葆華, 潘克厚

    (海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室(中國海洋大學), 山東 青島 266003)

    鹽度是影響微藻生長的重要因素之一[1]。在海洋環(huán)境中,特別在河口和海岸地區(qū),鹽度波動很大,這對浮游藻類的代謝反應和分布模式影響極顯著,這也是影響河口和沿海濕地多數(shù)硅藻分布的重要因素[2-4]。Pseudo-nitzschiaaustralis和Ditylumbrightwellii的細胞密度和生長速率的增加與鹽度的增加直接相關[5-6],而Thalassiosirapseudonana和Cyclotellameneghiniana的最大生長速率均在較低鹽度條件下出現(xiàn),從最適鹽度向最適鹽度的兩端生長速率持續(xù)下降[7]。不僅如此,鹽度還顯著影響微藻的形態(tài),如T.weissflogii[8]、C.meneghinia-na[7]和T.pseudonana[9]的細胞體積隨鹽度增大而減小,Actinocyclusnormanii[10]細胞體積則隨鹽度增大而增大。多數(shù)微藻的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和碳水化合物含量受鹽度水平的影響,調(diào)控鹽度是生產(chǎn)具有高附加值產(chǎn)物的有效手段[11-12],如低鹽度時T.weissflogii和Chaetoceroscf.wighamii的多糖、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)含量較高[13-14];C.vulgaris和A.obliquus增加鹽度(氯化鈉)后不僅提高了脂肪酸含量,也改變了脂肪酸組成[15],鹽度(氯化鈉)對Naviculasp.的脂質(zhì)和脂肪酸組成也產(chǎn)生了影響,隨著鹽度增加其脂質(zhì)含量增加,但鹽度超過一定值后其脂質(zhì)含量逐漸下降[16]。在大規(guī)模微藻培養(yǎng)過程中,由于持續(xù)地蒸發(fā)及頻繁地添加營養(yǎng)鹽,培養(yǎng)液的鹽度普遍出現(xiàn)增高趨勢,有必要廣泛分析鹽度增加對微藻的形態(tài)特征、生長以及生化組分的影響。

    隱秘小環(huán)藻(Cyclotellacryptica)是隸屬于圓篩藻科小環(huán)藻屬的單細胞硅藻,細胞呈圓柱狀,鹽度適應性強,生長快速,富含巖藻黃素[17]和不飽和脂酸,其藻殼具有顯著的止血能力[18],是開發(fā)新型止血劑的理想材料,其開發(fā)前景廣闊。我們在實驗室條件下研究了不同鹽度條件對隱秘小環(huán)藻生長狀況的影響,發(fā)現(xiàn)不同鹽度下細胞沉降能力有明顯差別,為探究引起差別的原因,本文研究不同鹽度對隱秘小環(huán)藻細胞大小以及硅藻殼特性的影響。本研究可為隱秘小環(huán)藻藻種的培養(yǎng)以及綜合利用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 隱秘小環(huán)藻培養(yǎng)及鹽度梯度設置

    隱秘小環(huán)藻來自中國海洋大學應用微藻生物學實驗室藻種庫,f/2培養(yǎng)液用水為青島沿海區(qū)域海水,pH為8.0±0.3,鹽度為30,用0.45 μm混合纖維素酯膜過濾,高溫滅菌(20 min,121 ℃)后加入f/2培養(yǎng)基母液[19],按照1 000∶1的比例進行混合。藻種培養(yǎng)溫度為20 ℃,光照強度為25 μmol·m-2·s-1,光暗周期為L∶D=12 h∶12 h。

    結合預實驗結果,調(diào)整海水、淡水(RO)比例,設置5個鹽度梯度5、10、20、30和40,每一梯度設置3個平行組,將鹽度30條件下培養(yǎng)的藻細胞接種到滅菌后的各鹽度梯度f/2培養(yǎng)液(500 mL三角錐瓶加300 mL培養(yǎng)液)中,培養(yǎng)期間每天定期搖勻藻液。

    1.2 生長、光合潛力及生物量測定

    每個鹽度梯度設置3個平行,實驗期間每天定時取1 mL藻液,使用紫外分光光度計(U-3310,日本)測定藻液OD750值,采用相對生長速率[20]計算公式 μ=(lnNt-lnN0)/t計算不同鹽度條件下隱秘小環(huán)藻的相對生長速率,式中Nt為第t天細胞OD750值,N0為初始細胞OD750值。

    每天同一時間各取2 mL藻液,暗處理7 min,使用脈沖振幅調(diào)制式熒光計(Water-PAM fluorometer, Walz, Effeltrich, Germany)測定葉綠素熒光參數(shù)Fv/Fm(PSⅡ的最大光能轉(zhuǎn)化效率)和Y(Ⅱ)(PSⅡ的實際光能轉(zhuǎn)化效率)。

    在實驗周期末(第7天)進行生物量的測定。取各鹽度3個平行組的搖勻后的藻液10 mL(V),使用提前烘至恒重(m0)的GF/C膜(WhatmanTM)抽濾藻細胞,并使用蒸餾水沖洗2~3次,60 ℃烘至恒重后進行稱量(m1),采用下式計算生物量(g/L),生物量=(m1-m0)÷V×1 000。

    1.3 細胞大小測定

    在實驗周期第3天取出搖勻后的各鹽度培養(yǎng)條件下若干體積的藻液,該藻液用于細胞大小的測量,使用光學顯微鏡(CX22LED,OLYMPUS,日本)目微尺測量35個藻細胞的高度(h)和直徑(D),將細胞視為圓柱體來計算細胞體積(V)。

    1.4 沉降率測定

    為比較鹽度對試驗微藻沉降速率的影響,待藻細胞培養(yǎng)到平臺期時,每一鹽度水平各準備12支玻璃試管,每支試管加入搖勻藻液4 mL,之后將藻液放置于靜置環(huán)境中使其自然沉降。實驗初始保持各鹽度水平細胞密度一致(OD750值),分別靜置1、2、4和7 h后取樣,于每個取樣時間點在試管固定位置取1 mL藻液,使用紫外分光光度計(U-3310,日本)測定取樣藻液OD750值。沉降率計算方法如下:沉降率=(OD750值(初始)-OD750值(t))÷OD750值(初始),式中OD750值(初始)為初始時藻液吸光值,OD750值(t)為第t小時藻液吸光值。

    1.5 藻殼物理性質(zhì)測定

    將培養(yǎng)至一定濃度的隱秘小環(huán)藻離心(4 000 r/min,5 min,5840R,Eppendorf,Germany)并棄上清,用于提取藻殼。具體方法為:藻泥中加入20 mL濃硫酸,60 ℃水浴1 h,然后加入等體積濃硝酸于60 ℃水浴24 h,篩絹(2 500目)過濾、無水乙醇洗滌,烘干后觀察藻殼形態(tài)及分析物理特性[18]。使用冷場發(fā)射掃描電子顯微鏡(日立S-4800,日本)觀察藻殼形態(tài)。使用自動氣體吸附分析儀(Autosorb-IQ,Konta,美國)進行N2-解吸等溫線測量藻殼比表面積、孔容和孔徑[18],隨后根據(jù)吸脫附數(shù)據(jù)進行自動計算。

    1.6 數(shù)據(jù)分析

    首先計算每個處理的三次重復平均值和標準誤差。用Excel 2019繪圖。使用SPSS 25進行單向方差分析(One-way ANOVA),在方差分析結果顯著或極顯著時(P<0.05或P<0.01),采用多重比較(LSD法)進行組間的顯著性比較。

    2 結果

    2.1 鹽度對隱秘小環(huán)藻的生長、光合系統(tǒng)及生物量的影響

    5個鹽度水平下培養(yǎng)的隱秘小環(huán)藻的相對生長速率見表1。表1顯示,不同鹽度(5、10、20、30和40)培養(yǎng)條件下最大相對生長率的差異并不顯著(P>0.05),但達到最大相對生長率所需的時間不同,與接種前培養(yǎng)液的鹽度(30)相差越大,達到最大相對生長率所需的時間就越長。

    表1 不同鹽度培養(yǎng)條件下隱秘小環(huán)藻的相對生長率

    與相對生長率的比較結果不同,初始鹽度為5、10、20、30和40時,隱秘小環(huán)藻第0天的Fv/Fm分別為0.273、0.340、0.510、0.634和0.478,One-way ANOVA表明不同鹽度組的Fv/Fm差異極顯著(P<0.01,見圖1a)。經(jīng)過2 d的適應后,鹽度5、10、20和40條件下Fv/Fm逐漸達到最大值,隨后各鹽度培養(yǎng)下微藻的Fv/Fm均逐漸下降。整個培養(yǎng)期間各鹽度條件下試驗微藻的Y(Ⅱ)一直呈下降趨勢(圖1b)。至培養(yǎng)末期,各實驗組Fv/Fm值和Y(Ⅱ)均差異極顯著(P<0.01),鹽度5、鹽度10組均顯著高于鹽度20、鹽度30、鹽度40組。

    圖1 不同鹽度培養(yǎng)條件下隱秘小環(huán)藻葉綠素熒光參數(shù)變化

    隱秘小環(huán)藻的生物量隨培養(yǎng)環(huán)境鹽度的增加而增大。結果如圖2所示,鹽度5~40水平下隱秘小環(huán)藻的生物量分別為0.170、0.223、0.250、0.343和0.367 g/L,One-way ANOVA分析表明各鹽度組藻細胞生物量差異極顯著(P<0.01)。

    (圖中字母為多重比較結果,鹽度水平間字母相同為差異不顯著、字母不同為差異顯著。The letters represent the multiple comparison results, representing not significantly when same letter exists between the salt levels and significantly when no same letter.)

    2.2 鹽度對隱秘小環(huán)藻沉降性能的影響

    圖3顯示不同鹽度培養(yǎng)條件下隱秘小環(huán)藻沉降率的變化。在細胞密度一致的條件下靜置1 h,鹽度40實驗組的細胞沉降率為33.2%,其他實驗組細胞并未沉降,相反存在因擴散導致沉降率下降的現(xiàn)象(數(shù)據(jù)未列出)。靜置2 h,鹽度40實驗組沉降率已達到60%以上,其他鹽度實驗組才開始沉降,但沉降率最大也未超過20%。從靜置4 h開始,各實驗組均開始快速沉降,隨著試驗組鹽度的升高,試驗微藻的沉降率也越高。這說明高鹽度可以促進試驗微藻的快速沉降。

    (字母為多重比較結果,同一取樣時間下鹽度水平間字母相同為差異不顯著,字母不同為差異顯著。The letters represent the multiple comparison results, representing not significantly when same letter exists between the salt levels and significantly when no same letter at same sampling time.)

    2.3 鹽度對隱秘小環(huán)藻細胞大小的影響

    隱秘小環(huán)藻細胞大小隨培養(yǎng)環(huán)境鹽度水平增加而增大。統(tǒng)計測量結果如表2所示,鹽度5實驗組與鹽度40實驗組的相比較,藻細胞的高(h)增加約2.1 μm、直徑(D)增加約2.5 μm、體積(V)增加約487 μm3。對鹽度5~40條件下的藻細胞大小進行One-way ANOVA分析表明,藻細胞的高、直徑、體積均差異極顯著(P<0.01)。

    表2 不同鹽度培養(yǎng)條件下隱秘小環(huán)藻細胞大小

    2.4 鹽度對隱秘小環(huán)藻藻殼物理性質(zhì)的影響

    掃描電鏡顯示,隱秘小環(huán)藻殼面呈圓盤形(見圖4a1—a5),平均直徑約為10 μm(鹽度30左右時),表面由殼孔區(qū)、中心區(qū)、肋以及管狀突出結構等組成。藻殼局部(見圖4b1—b5)清晰顯示,殼孔區(qū)所有孔都呈徑向有序排列,大小與形狀存在一定差異,相鄰孔區(qū)之間有呈放射狀分布的肋,多數(shù)肋在殼面邊緣具有管狀突出結構,殼面中心部分相對平整,具有一個或兩個管狀突出結構。局部進一步放大(見圖4c1—c5)顯示,藻殼具有兩層結構,內(nèi)層孔徑比外層小。比較發(fā)現(xiàn),鹽度并未明顯影響隱秘小環(huán)藻殼面的形態(tài)特征。

    (a,b,c分別代表殼面整體、局部、局部放大;1,2,3,4,5分別代表鹽度5,10,20,30,40。a,b,c represent the frustules entirety, part, partial enlargement respectively; 1, 2, 3, 4, 5 represent salinity 5, 10, 20, 30, 40 respectively.)

    為進一步分析鹽度對隱秘小環(huán)藻硅質(zhì)壁物理性質(zhì)的影響,本研究選取鹽度5和40這兩個鹽度差別最大的實驗組,對這兩個實驗組的微藻硅質(zhì)壁的3個物理參數(shù)進行比較,比較結果如表3所示,雖然這兩個鹽度下硅質(zhì)壁的平均孔徑?jīng)]有差別,但鹽度40實驗組中藻殼的孔容為0.47 cm3/g,是鹽度5實驗組中藻殼孔容(0.15 cm3/g)的3倍以上,說明高鹽度下藻殼的孔數(shù)量大幅增加。由于孔數(shù)量增加,鹽度40實驗組微藻硅質(zhì)壁的比表面積為256.31 m2/g,也是鹽度5實驗組藻殼比表面積(83.40 m2/g)的3倍左右。

    表3 鹽度5和40培養(yǎng)條件下隱秘小環(huán)藻藻殼物理性質(zhì)

    3 討論

    通常認為鹽度是決定河口硅藻分布的一個重要因素,對鹽度變化的耐受性是河口和沿海濕地多數(shù)硅藻生存的先決條件[4]。已有的研究表明[21],有些微藻可耐受廣泛的鹽度,并表現(xiàn)出對較低鹽度的偏好。我們的實驗結果表明,本研究的隱秘小環(huán)藻藻株具有廣泛的鹽度適應性,對低鹽度(5、10、20)表現(xiàn)出更好的適應性。當細胞從接種前鹽度30轉(zhuǎn)移到各設定鹽度時,受鹽度變化的影響,在恢復生長前需要一定時間的代謝調(diào)整,實驗鹽度與接種前鹽度30相差越大,適應時間越長。伴隨著鹽度適應期,可見到接種微藻初始光合能力受到顯著影響。這說明長期適應自然環(huán)境變化的隱秘小環(huán)藻具有突出的應對鹽度波動的調(diào)節(jié)能力[22-23]。在本實驗鹽度條件設置范圍內(nèi),隱秘小環(huán)藻的生物量隨鹽度梯度增加而增高。

    有研究表明,T.pseudonana和T.weissflogii細胞隨鹽度升高而減小[9,14],而A.normanii則隨鹽度升高而增大[10],這說明鹽度對微藻細胞體積的影響存在藻種的差異性。本實驗測量了各實驗鹽度下35個藻細胞的高度、直徑和體積,發(fā)現(xiàn)均具有隨培養(yǎng)環(huán)境鹽度增加而增大的現(xiàn)象,其中鹽度水平差別最大(5和40)的兩組細胞的這三項指標分別相差0.25、0.34和1.26倍,根據(jù)多重比較(LSD法)結果分析,可將差異來源分為三組,即鹽度5、鹽度10和20、鹽度30和40。細胞大小作為微藻的基本特征之一,從營養(yǎng)獲取到光合生理特征都隨細胞大小而變化[24-25],由于水生食物網(wǎng)在很大程度上是由被捕食者(如微藻)形態(tài)大小決定的,初級生產(chǎn)者形態(tài)大小的改變可能會影響能量向更高營養(yǎng)水平的傳遞[26-27]。

    對于細胞大小與藻細胞沉降的關系,本研究發(fā)現(xiàn)隱秘小環(huán)藻的沉降率隨著鹽度增加而增大。在實驗第4 h時,鹽度40組沉降率為88.9%,鹽度5組則僅為12.4%。這說明隱秘小環(huán)藻的大小似乎與藻細胞的沉降存在一定的關系。一般來說,下沉速率是隨著細胞大小的增加而增大[28]。培養(yǎng)微藻的沉降特性的重要性僅次于生長速率,沉降率不僅決定微藻的采收效率,也是微藻與環(huán)境相互作用、與其他群落營養(yǎng)聯(lián)系的關鍵生理生態(tài)參數(shù)[29]。為了滿足對光照和營養(yǎng)的需求,沉降是浮游微藻在整個生命周期及其面對不同生態(tài)環(huán)境不斷調(diào)整其浮游狀態(tài)的重要方式[30]。除細胞大小外,在實驗期間我們發(fā)現(xiàn),沉降前細胞先在一定時間內(nèi)聚集成絮團,隨后以絮團的形式沉降,且在高鹽度下容易形成絮團。由于細胞表面許多官能團都是電負性的,已有研究通過外加成分,提高培養(yǎng)液的電子強度從而加快藻細胞的沉降[31]。我們推測培養(yǎng)液鹽度的增加,提高了培養(yǎng)液的電子強度,中和了細胞表面的電負性,使得高鹽度下藻細胞更容易形成絮團。

    對于多數(shù)硅藻,其原生質(zhì)體外有剛性的、具有一定厚度的硅質(zhì)壁保護[32],可以推斷硅藻細胞大小的變化必然影響硅質(zhì)壁的性質(zhì),這說明環(huán)境條件變化(如鹽度),會影響硅藻的硅化作用。對T.punctigera和T.weissflogii的研究表明,不同鹽度培養(yǎng)條件下外部離子強度可改變硅藻生物二氧化硅納米結構,認為外部離子濃度是影響生物硅形成的重要非生物因素[33]。眾多實驗研究[34-37]表明鹽度變化能夠改變許多硅藻的殼面形態(tài)。隱秘小環(huán)藻體表具有硅質(zhì)細胞壁,細胞大小發(fā)生變化后硅質(zhì)細胞壁也應該會發(fā)生改變。但本研究的結果顯示,在本實驗鹽度水平下隱秘小環(huán)藻藻殼的殼面特征幾乎無顯著變化,對硅質(zhì)壁進行N2-解吸等溫線測量表明鹽度雖沒有影響孔徑大小,但鹽度40條件下該藻藻殼的比表面積和孔容均顯著大于鹽度5條件下的藻殼。有關藻殼特征與藻細胞沉降的關系尚未見報道,根據(jù)本研究結果推測,由比表面積增大導致的藻細胞表面吸附力增強可能是高鹽度下隱秘小環(huán)藻藻細胞容易沉降的原因。

    4 結語

    本文主要研究了不同鹽度培養(yǎng)條件對隱秘小環(huán)藻的生長、沉降和藻殼物理性質(zhì)的影響。研究結果表明,隱秘小環(huán)藻對鹽度的適應性相當強,實驗鹽度對其相對生長率未產(chǎn)生顯著影響,但同時也看到不同鹽度條件下,隱秘小環(huán)藻的光合潛能存在顯著變化,表明該藻株的光合系統(tǒng)具有應對鹽度變化的調(diào)適能力。不同鹽度培養(yǎng)條件下,隱秘小環(huán)藻的沉降率表現(xiàn)出隨鹽度增加而增快的現(xiàn)象。雖然通過掃描電鏡觀察并未發(fā)現(xiàn)藻殼表面物理特征發(fā)生明顯改變,但藻細胞體積、藻殼總孔體積、藻殼比表面積均隨著鹽度的增加而顯著增大,這表明高鹽度造成的藻細胞體積變大及藻殼物理性質(zhì)變化是隱秘小環(huán)藻藻細胞容易下沉的原因。

    猜你喜歡
    藻液硅藻微藻
    硅藻——海里的“生物寶石”
    大自然探索(2023年7期)2023-11-14 13:07:36
    硅藻實驗室“打工記”
    代食品運動中微藻的科研與生產(chǎn)
    塔爾油對富營養(yǎng)化水體混合藻的抑制效果研究
    天津造紙(2021年2期)2021-11-29 11:50:08
    NS-ZS602 沉入式濁度數(shù)字傳感器在微藻智能定量中的應用
    硅藻指數(shù)在水環(huán)境監(jiān)測與評價中的應用分析
    椰子油提取物在絮凝收集柵藻中的應用
    硅藻泥涂料的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢
    上海建材(2018年1期)2018-04-18 12:15:16
    絮凝法采收生物燃料微藻的研究進展
    曝氣間隔對普通小球藻生物質(zhì)積累的影響
    化工進展(2014年10期)2014-07-05 16:06:08
    婷婷丁香在线五月| 日韩免费av在线播放| 国产av国产精品国产| 亚洲欧洲日产国产| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 日本黄色日本黄色录像| tube8黄色片| 999久久久国产精品视频| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久久国产欧美日韩av| 国产1区2区3区精品| 一进一出抽搐动态| av视频免费观看在线观看| 99国产精品99久久久久| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜福利在线观看吧| 黄片小视频在线播放| 一区福利在线观看| av线在线观看网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品国内亚洲2022精品成人 | 在线观看66精品国产| 最新美女视频免费是黄的| 在线看a的网站| 国产伦理片在线播放av一区| 十八禁高潮呻吟视频| 午夜免费鲁丝| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 免费在线观看影片大全网站| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜成年电影在线免费观看| 久久久国产成人免费| 性色av乱码一区二区三区2| 成人三级做爰电影| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲国产看品久久| 999久久久国产精品视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品一区二区三区av网在线观看 | 免费av中文字幕在线| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲人成电影免费在线| 男女下面插进去视频免费观看| 香蕉丝袜av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美日本中文国产一区发布| 美女高潮到喷水免费观看| www.999成人在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久中文看片网| 在线天堂中文资源库| 久久国产精品大桥未久av| 欧美日本中文国产一区发布| 久久天堂一区二区三区四区| 国产亚洲精品第一综合不卡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久视频综合| 99香蕉大伊视频| 中亚洲国语对白在线视频| 丝袜美腿诱惑在线| 99精品欧美一区二区三区四区| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品久久久久久精品古装| 岛国在线观看网站| 丝袜美足系列| 91老司机精品| 大片电影免费在线观看免费| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一级片免费观看大全| 国产男女超爽视频在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久国产精品影院| 亚洲专区字幕在线| 在线观看舔阴道视频| 人人澡人人妻人| 亚洲国产中文字幕在线视频| 三级毛片av免费| 免费观看a级毛片全部| 欧美精品一区二区大全| 99国产综合亚洲精品| 啦啦啦 在线观看视频| 国产免费av片在线观看野外av| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲中文字幕日韩| 老司机在亚洲福利影院| 一本大道久久a久久精品| 日日爽夜夜爽网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲综合色网址| av网站在线播放免费| 精品国产一区二区久久| 波多野结衣一区麻豆| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 免费观看人在逋| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲,欧美精品.| 丝袜喷水一区| 黄色 视频免费看| 在线 av 中文字幕| 老司机在亚洲福利影院| 国产亚洲av高清不卡| 免费在线观看日本一区| 国产亚洲欧美精品永久| av福利片在线| 国产精品 国内视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 久久久国产一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日韩有码中文字幕| 日韩有码中文字幕| 久久午夜亚洲精品久久| 两性夫妻黄色片| 黄片大片在线免费观看| 男女边摸边吃奶| 亚洲av日韩在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产精品一区二区在线观看99| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 女警被强在线播放| 国产区一区二久久| 热99re8久久精品国产| 女警被强在线播放| 精品国产一区二区久久| 亚洲国产av影院在线观看| 久久这里只有精品19| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美日本中文国产一区发布| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 色老头精品视频在线观看| av电影中文网址| 一本大道久久a久久精品| 一本久久精品| 国产在视频线精品| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲av成人一区二区三| 午夜日韩欧美国产| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜91福利影院| 欧美乱码精品一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 一区二区三区乱码不卡18| 精品少妇内射三级| 日日爽夜夜爽网站| 一本综合久久免费| 日韩免费高清中文字幕av| netflix在线观看网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲午夜理论影院| 亚洲国产欧美网| 亚洲成人手机| 男男h啪啪无遮挡| 丝袜美足系列| 精品国产国语对白av| 丝袜美足系列| 一区二区三区乱码不卡18| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 咕卡用的链子| 757午夜福利合集在线观看| 91九色精品人成在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 色老头精品视频在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 国产亚洲一区二区精品| 欧美日韩黄片免| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本五十路高清| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲伊人色综图| 国产在线观看jvid| 少妇被粗大的猛进出69影院| 他把我摸到了高潮在线观看 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av网站在线播放免费| 制服人妻中文乱码| 日日夜夜操网爽| 午夜日韩欧美国产| 欧美人与性动交α欧美软件| 黄色视频在线播放观看不卡| 一级黄色大片毛片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 老熟女久久久| 在线观看一区二区三区激情| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 精品一品国产午夜福利视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美黄色片欧美黄色片| 免费观看人在逋| 久久久久久久精品吃奶| 国产成人影院久久av| 成年人黄色毛片网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一级片'在线观看视频| 国产高清国产精品国产三级| 国产精品电影一区二区三区 | 久久99热这里只频精品6学生| 免费在线观看日本一区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 美女国产高潮福利片在线看| 午夜两性在线视频| 中文字幕制服av| 一个人免费看片子| 蜜桃在线观看..| av有码第一页| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 69精品国产乱码久久久| 99热国产这里只有精品6| 在线av久久热| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 激情视频va一区二区三区| 亚洲国产看品久久| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲天堂av无毛| 人妻久久中文字幕网| 色94色欧美一区二区| 欧美午夜高清在线| 女性生殖器流出的白浆| 大型av网站在线播放| 久久性视频一级片| 少妇的丰满在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 色94色欧美一区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲中文字幕日韩| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久免费观看电影| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品国产国语对白av| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲av美国av| 中亚洲国语对白在线视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久久99热这里只频精品6学生| 一边摸一边做爽爽视频免费| tube8黄色片| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品偷伦视频观看了| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久热在线av| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美日韩黄片免| 搡老岳熟女国产| 国产精品九九99| 男女边摸边吃奶| 免费不卡黄色视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 五月天丁香电影| 免费在线观看影片大全网站| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美在线黄色| 天堂中文最新版在线下载| 99久久精品国产亚洲精品| 精品国产国语对白av| 免费观看a级毛片全部| 99热网站在线观看| 青青草视频在线视频观看| 欧美日韩av久久| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产精品 国内视频| bbb黄色大片| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产不卡一卡二| 1024香蕉在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 三级毛片av免费| 正在播放国产对白刺激| 又紧又爽又黄一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av | 99国产精品一区二区蜜桃av | 亚洲欧洲日产国产| 91老司机精品| 咕卡用的链子| 9色porny在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品免费大片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 国产伦理片在线播放av一区| 交换朋友夫妻互换小说| 免费不卡黄色视频| 精品久久久精品久久久| 91成人精品电影| 久久中文字幕一级| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 久久青草综合色| 自线自在国产av| 十八禁网站网址无遮挡| 国产精品成人在线| 久久99热这里只频精品6学生| 国产日韩欧美视频二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产麻豆69| 亚洲免费av在线视频| av国产精品久久久久影院| 久久精品国产综合久久久| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产精品二区激情视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 正在播放国产对白刺激| 国产精品98久久久久久宅男小说| 精品人妻1区二区| 久久国产精品大桥未久av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久国产亚洲av麻豆专区| 韩国精品一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产在视频线精品| 亚洲三区欧美一区| 人妻 亚洲 视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 后天国语完整版免费观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 黄片播放在线免费| 一本综合久久免费| 三上悠亚av全集在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 人妻 亚洲 视频| 香蕉丝袜av| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 九色亚洲精品在线播放| 国产在线观看jvid| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲国产av新网站| 午夜91福利影院| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日本a在线网址| 亚洲欧洲日产国产| 在线 av 中文字幕| 免费少妇av软件| 中国美女看黄片| 国产精品一区二区免费欧美| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲成a人片在线一区二区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲免费av在线视频| 久久久久网色| 亚洲精品一二三| 免费观看a级毛片全部| 国产免费视频播放在线视频| 国产野战对白在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲熟女毛片儿| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲人成电影免费在线| 精品少妇内射三级| 国产成人系列免费观看| 中亚洲国语对白在线视频| 青青草视频在线视频观看| 日韩免费av在线播放| www.999成人在线观看| 69精品国产乱码久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产精品久久久av美女十八| av网站免费在线观看视频| 伦理电影免费视频| 悠悠久久av| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 99re在线观看精品视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 大片电影免费在线观看免费| 欧美乱码精品一区二区三区| 韩国精品一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 搡老岳熟女国产| 黄色视频,在线免费观看| 桃花免费在线播放| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 十八禁网站免费在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 一本综合久久免费| 国产免费av片在线观看野外av| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲国产欧美网| 久久久精品免费免费高清| 麻豆国产av国片精品| 一本综合久久免费| 黄片小视频在线播放| 精品国产一区二区久久| a级毛片黄视频| 欧美日本中文国产一区发布| 久久久久视频综合| 久热爱精品视频在线9| 十八禁网站网址无遮挡| 国产男女内射视频| 老司机靠b影院| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产男女内射视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 国产xxxxx性猛交| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 捣出白浆h1v1| 2018国产大陆天天弄谢| 777久久人妻少妇嫩草av网站| a级片在线免费高清观看视频| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人精品久久二区二区免费| 午夜福利视频在线观看免费| 交换朋友夫妻互换小说| 欧美久久黑人一区二区| www.自偷自拍.com| 在线看a的网站| 正在播放国产对白刺激| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| svipshipincom国产片| 少妇粗大呻吟视频| 69av精品久久久久久 | 久久久精品免费免费高清| 制服诱惑二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 最新在线观看一区二区三区| 国产亚洲一区二区精品| 日韩视频一区二区在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产在线一区二区三区精| 久久久久国内视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品一二三| 日韩大片免费观看网站| 国产视频一区二区在线看| 国产成人精品在线电影| √禁漫天堂资源中文www| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 在线天堂中文资源库| 最新在线观看一区二区三区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 中文字幕人妻丝袜制服| 青青草视频在线视频观看| 搡老岳熟女国产| 亚洲成a人片在线一区二区| 男人舔女人的私密视频| 69精品国产乱码久久久| 婷婷成人精品国产| 香蕉国产在线看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 免费在线观看黄色视频的| 韩国精品一区二区三区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 18禁观看日本| 视频区图区小说| 好男人电影高清在线观看| 后天国语完整版免费观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 久久毛片免费看一区二区三区| 少妇的丰满在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 99re6热这里在线精品视频| 成人国语在线视频| 午夜激情av网站| 国产精品av久久久久免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 热re99久久精品国产66热6| 叶爱在线成人免费视频播放| √禁漫天堂资源中文www| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲美女黄片视频| 热99re8久久精品国产| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产成人精品无人区| 99九九在线精品视频| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美国产精品一级二级三级| 精品亚洲成国产av| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品98久久久久久宅男小说| 91av网站免费观看| 美女福利国产在线| 99精品欧美一区二区三区四区| 夫妻午夜视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久这里只有精品19| 国产一区二区三区视频了| 免费看十八禁软件| 欧美人与性动交α欧美软件| 视频区欧美日本亚洲| 人人澡人人妻人| 午夜福利一区二区在线看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 97在线人人人人妻| av福利片在线| 日韩一区二区三区影片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 1024香蕉在线观看| 人妻久久中文字幕网| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久午夜亚洲精品久久| 黄色视频在线播放观看不卡| 精品国产乱码久久久久久男人| 日日爽夜夜爽网站| 18禁国产床啪视频网站| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜福利视频在线观看免费| 无人区码免费观看不卡 | 国产亚洲精品久久久久5区| 丁香六月欧美| 天堂动漫精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 他把我摸到了高潮在线观看 | 色在线成人网| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 三上悠亚av全集在线观看| 久久九九热精品免费| 女同久久另类99精品国产91| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 在线 av 中文字幕| 性色av乱码一区二区三区2| 9191精品国产免费久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 两个人看的免费小视频| 国产精品免费一区二区三区在线 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲av片天天在线观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 在线观看免费高清a一片| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久热在线av| 欧美黑人精品巨大| 一级片'在线观看视频| 在线观看一区二区三区激情| 两人在一起打扑克的视频| 嫩草影视91久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲天堂av无毛| 中文亚洲av片在线观看爽 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品 欧美亚洲| av欧美777| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品久久久av美女十八| 老司机午夜福利在线观看视频 | 五月开心婷婷网| 亚洲色图综合在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| av国产精品久久久久影院| 精品少妇黑人巨大在线播放| 91老司机精品| 十八禁网站免费在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 99在线人妻在线中文字幕 | 2018国产大陆天天弄谢| tube8黄色片| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜视频精品福利| 欧美精品一区二区免费开放| 麻豆乱淫一区二区| 成人手机av| 天堂俺去俺来也www色官网| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久99一区二区三区| 不卡av一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 美国免费a级毛片| 国产成人精品无人区| 成年版毛片免费区| 电影成人av| 国产亚洲av高清不卡| 日本av免费视频播放| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 99香蕉大伊视频| 国产国语露脸激情在线看| 91字幕亚洲| 国产97色在线日韩免费| 国产真人三级小视频在线观看| 国产亚洲欧美精品永久|