歐前胡素固體分散體凝膠骨架緩釋片的制備及藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)

徐志杰

歐前胡素固體分散體凝膠骨架緩釋片的制備及藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)

徐志杰

威海海洋職業(yè)學(xué)院，山東 威海 264300

制備歐前胡素固體分散體（imperatorin solid dispersion，IMP-SD）凝膠骨架緩釋片（hydrogel matrix sustained-release tablets）（IMP-SD-HMSRT），并研究口服藥動(dòng)學(xué)行為及體內(nèi)外相關(guān)性。溶劑揮發(fā)法制備IMP-SD。在單因素考察的基礎(chǔ)上，選擇HPMC K15M用量、聚乙二醇（PEG）400比例和PEG總用量為主要影響因素，緩釋片在2、6、12 h累積釋放率的綜合評(píng)分為響應(yīng)值，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化IMP-SD-HMSRT最佳處方，并考察在家兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為。利用Loo-Rigelman法評(píng)價(jià)其體內(nèi)外相關(guān)性。IMP-SD-HMSRT最佳處方為HPMC K15M用量為48 mg/片、PEG 400比例為58%、PEG總量為26.5 mg/片。HMSRT的12 h累積釋放率達(dá)到95.54%。藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示IMP-SD- HMSRT的max波動(dòng)小，max延后至（4.08±0.43）h，與歐前胡素普通片相比IMP-SD-HMSRT的相對(duì)生物利用度提高至219.76%。IMP-SD-HMSRT在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中體外釋藥行為與體內(nèi)吸收存在相關(guān)性。IMP-SD-HMSRT釋藥緩慢，促進(jìn)了藥物吸收，體內(nèi)吸收與體外釋藥具有良好的相關(guān)性。

歐前胡素；固體分散體；凝膠骨架緩釋片；Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法；藥動(dòng)學(xué)

歐前胡素（imperatorin）主要存在于白芷、歐前胡、防風(fēng)、獨(dú)活等中藥植物中，屬于香豆類化合物，研究表明它具有抗炎、抗抑郁、鎮(zhèn)痛等作用[1]，在心血管系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)中應(yīng)用較多[2-3]。據(jù)報(bào)道[4]，歐前胡素脂溶性較好，但水中溶解度僅為2.45 μg/mL，溶出度差，導(dǎo)致藥物難以吸收。尚曙玉等[5]將其制備成固體分散體后口服生物利用度提高至2.03倍。但歐前胡素具有一定的毒性[6]，固體分散體的快速釋藥使歐前胡素的血藥濃度波動(dòng)較大，容易加劇毒副作用，因此有必要進(jìn)一步制備成緩釋制劑。另外，歐前胡素在胃腸道均有吸收[7]，適合制備成緩釋制劑。凝膠骨架緩釋片（hydrogel matrix sustained-release tablets，HMSRT）具有釋藥變異小、制備工藝簡(jiǎn)單、適合大規(guī)模生產(chǎn)、輔料成本低廉等優(yōu)勢(shì)，是緩釋制劑研究熱點(diǎn)之一[8-10]，可有效抑制血藥濃度波動(dòng)，減少患者服藥次數(shù)、增強(qiáng)順應(yīng)性及藥效[11]。為解決歐前胡素固體分散體（imperatorin solid dispersion，IMP-SD）血藥濃度波動(dòng)較大缺點(diǎn)，提高其安全性及有效性，本研究采用HPMC K15M為凝膠骨架緩釋片的緩釋材料，聚乙二醇（PEG）類物質(zhì)（PEG 400和PEG 4000混合物）作為釋藥速率調(diào)節(jié)劑，將IMP-SD進(jìn)一步制備成凝膠骨架緩釋片（hydrogel matrix sustained-release tablets，IMP- SD-HMSRT），并對(duì)體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行研究，為歐前胡素新制劑研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Quintix125D-1CN型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司；DF-101S磁力攪拌器，河南天辰儀器設(shè)備有限公司；1100型高效液相色譜儀，安捷倫公司；RC-6D型藥物溶出試驗(yàn)儀，天津創(chuàng)興電子設(shè)備有限公司；YP-1型壓片機(jī)，寧波天辰機(jī)械設(shè)備有限公司；HB-800型超聲儀，張家港市海博設(shè)備有限公司；RF01型旋蒸蒸發(fā)儀，上海況勝實(shí)業(yè)公司；YD-4片劑硬度儀，天津創(chuàng)興電子設(shè)備有限公司。

1.2 材料

歐前胡素對(duì)照品，批號(hào)110826-202021，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.6%，中國食品藥品檢定研究院；羥丙基甲基纖維K15M（HPMC K15M），批號(hào)181208，西安天正藥用輔料有限公司；歐前胡素原料藥，批號(hào)20191025，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%，南京春秋生物工程有限公司；淀粉，批號(hào)190910，曲阜市天利藥用輔料有限公司；聚乙二醇400（PEG 400），批號(hào)20200315，山東瑞生藥用輔料有限公司；聚乙二醇4000（PEG 4000），批號(hào)20191224，山東瑞生藥用輔料有限公司；聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30），Sigma-Aldrich公司；硬脂酸鎂，批號(hào)151026，湖北興銀河化工有限公司；甲醇，色譜級(jí)，德國Merck公司。

1.3 動(dòng)物

日本大耳兔，雌雄兼用，體質(zhì)量1.8～2.4 kg，購自吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心［許可證號(hào)：SCXK（吉）2016-007］。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵循威海海洋職業(yè)學(xué)院有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用的規(guī)定，均符合3R原則。

2 方法與結(jié)果

2.1 IMP-SD-HMSRT的制備

2.1.1 IMP-SD的制備及晶型分析 參考文獻(xiàn)方法[5]制備IMP-SD。取10 g歐前胡素原料藥和50 g PVP K30置于1000 mL圓底燒瓶中，加入600 mL無水乙醇得混懸液。置于45 ℃水浴中磁力攪拌5 h（轉(zhuǎn)速為800 r/min），減壓旋蒸除去有機(jī)溶劑得殘留物，收集并研磨成細(xì)粉，即得IMP-SD，過24目篩，置于干燥器中保存。

取歐前胡素原料藥、PVP K30、物理混合物（比例同IMP-SD）和IMP-SD粉末約8 mg，置于玻璃槽中，壓制平整，進(jìn)行X射線粉末衍射（X-ray powder diffraction，XRPD）分析。掃描條件為銅靶，掃描速度：5°/min，掃描范圍（2）：3°～45°，結(jié)果見圖1。歐前胡素在3°～45°有大量的晶型衍射峰，在物理混合物的XRPD圖譜中仍可觀察歐前胡素原料藥到在9.6°、9.9°、16.1°、18.0°、19.8°、24.1°、35.2°等處的特征晶型衍射峰，說明簡(jiǎn)單混合未改變歐前胡素存在狀態(tài)。在IMP-SD的XRPD圖譜中歐前胡素的晶型衍射峰均消失不見，說明歐前胡素轉(zhuǎn)變成為無定型物質(zhì)，同時(shí)也證明IMP-SD制備成功。

2.1.2 IMP-SD-HMSRT的制備 IMP-SD-HMSRT的處方工藝研究均按200片進(jìn)行制備。保持IMP-SD含量為240 mg/片（以歐前胡素計(jì)40 mg/片），加入處方量的HPMC K15M和釋藥速率調(diào)節(jié)劑（PEG 400與PEG 4000混合物）等輔料，加入淀粉補(bǔ)充片質(zhì)量至0.5 g/片，混勻。6%淀粉漿制軟材，20目篩制粒，真空干燥12 h，20目篩整粒，加入0.8%硬脂酸鎂，混勻后壓制成直徑1.1 cm片劑，即得IMP-SD-HMSRT。

圖1 XRPD結(jié)果

2.2 HPLC法測(cè)定歐前胡素含量

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫為30 ℃；流動(dòng)相為甲醇-水（60∶40）；檢測(cè)波長為300 nm；體積流量為1.0 mL/min。理論塔板數(shù)以歐前胡素計(jì)不低于8000，色譜圖見圖2，結(jié)果表明輔料不干擾歐前胡素含量測(cè)定，專屬性高。

圖2 陰性溶液(A)、歐前胡素對(duì)照品(B) 和IMP-SD- HMSRT樣品(C) 的HPLC圖

2.2.2 對(duì)照品溶液的配制及線性關(guān)系考察 采用甲醇配制質(zhì)量濃度為500 μg/mL的歐前胡素對(duì)照品儲(chǔ)備液。取適量，流動(dòng)相稀釋至20、10、5、1、0.1、0.05 μg/mL，各質(zhì)量濃度平行3份。進(jìn)樣，記錄歐前胡素各質(zhì)量濃度（）的峰面積（），作線性回歸得回歸方程＝18.106 5＋0.774 6，＝0.999 7，線性范圍為0.05～20 μg/mL。

2.2.3 供試品溶液的配制 取10片IMP-SD- HMSRT，研磨至細(xì)粉，稱取0.5 g置于100 mL量瓶中，加入50 mL甲醇震蕩混勻，超聲10 min，放置20 min，并用甲醇-水（60∶40）定容。取適量過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液0.5 mL置于25 mL量瓶中，甲醇-水（60∶40）定容，即得IMP-SD-HMSRT供試品溶液。

2.2.4 重復(fù)性考察 按照“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份IMP-SD-HMSRT供試品溶液，分別進(jìn)HPLC測(cè)定歐前胡素含量，計(jì)算其RSD為1.62%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.2.5 精密度考察 取質(zhì)量濃度為0.05、5、20 μg/mL的歐前胡素對(duì)照品溶液分別作為低、中、高質(zhì)量濃度，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行分析。結(jié)果顯示低、中、高質(zhì)量濃度的RSD值分別為0.95%、0.69%、0.74%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 取IMP-SD-HMSRT供試品溶液置于室溫，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣分析，計(jì)算得歐前胡素質(zhì)量濃度的RSD為1.12%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 加樣回收率考察 取9份0.25 g的IMP-SD- HMSRT細(xì)粉置于100 mL量瓶中，分成低、中、高3組，分別加入歐前胡素對(duì)照品10、20、30 mg，按照“2.2.3”項(xiàng)下所述方法分別制備IMP-SD-HMSRT的供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定歐前胡素含量。結(jié)果顯示，歐前胡素平均加樣回收率為99.43%，RSD為1.24%。

2.3 IMP-SD-HMSRT釋放度測(cè)定方法

轉(zhuǎn)籃法考察體外釋藥情況。設(shè)置溶出儀轉(zhuǎn)速為75 r/min，溫度為（37.0±0.5）℃，取6片IMP-SD- HMSRT同時(shí)放入900 mL蒸餾水的溶出杯中。分別于0、2、4、6、8、10、12 h取樣3 mL至離心管中，密封，并補(bǔ)加3 mL蒸餾水（溫度為37 ℃）。0.45 μm微孔濾膜（水膜）過濾樣品，進(jìn)樣測(cè)定歐前胡素含量，計(jì)算各點(diǎn)累積釋放率，繪制體外釋藥曲線。

2.4 單因素試驗(yàn)考察各因素對(duì)IMP-SD-HMSRT釋藥的影響

2.4.1 骨架材料型號(hào)對(duì)IMP-SD-HMSRT釋藥的影響 固定IMP-SD含量為240 mg/片，骨架材料用量為45 mg/片，PEG 400與PEG 4000用量比為1∶1，PEG總用量為20 mg/片等條件不變，分別考察骨架材料型號(hào)（HPMC K4M、HPMC K15M、HPMC K30M）對(duì)IMP-SD-HMSRT體外釋藥的影響，結(jié)果見圖3。HPMC K4M相對(duì)分子質(zhì)量較小，藥物釋藥容易，因而體外釋藥相對(duì)較快；而HPMC K30M相對(duì)分子質(zhì)量較大，形成的凝膠層相對(duì)較厚，導(dǎo)致體外釋藥相對(duì)較慢。HPMC K15M作為骨架材料時(shí)由于分子量適中，制得的IMP-SD-HMSRT體外釋藥行為相對(duì)理想，故后續(xù)研究均采用HPMC K15M作為IMP-SD-HMSRT的骨架材料。

2.4.2 HPMC K15M用量的考察 固定IMP-SD含量為240 mg/片，HPMC K15M為骨架材料，PEG 400與PEG 4000用量比為1∶1，PEG總用量為20 mg/片等條件不變，分別考察HPMC K15M用量（30、45、60 mg/片）對(duì)IMP-SD-HMSRT釋藥行為的影響，結(jié)果見圖4。當(dāng)HPMC K15M用量為30 mg/片時(shí)體外釋藥相對(duì)較快，用量為60 mg/片體外釋藥相對(duì)較慢，而用量為45 mg/片時(shí)IMP-SD- HMSRT體外釋藥相對(duì)適中，可見其用量對(duì)IMP-SD- HMSRT體外釋藥影響較大，后續(xù)需要進(jìn)一步優(yōu)化。

圖3 骨架材料型號(hào)的考察(, n = 3)

圖4 HPMC K15M用量的考察(, n = 3)

2.4.3 PEG 400用量比例的考察 固定IMP-SD含量為240 mg/片，HPMC K15M為骨架材料，用量為45 mg/片，PEG總用量為20 mg/片（PEG 400與PEG 4000混合物）等條件不變，分別考察PEG 400所占PEG總用量比例（30%、50%、70%）對(duì)IMP-SD- HMSRT釋藥的影響，結(jié)果見圖5。PEG 400和PEG 4000的相對(duì)分子質(zhì)量不同，因而兩者比例不同時(shí)對(duì)IMP-SD-HMSRT體外釋藥產(chǎn)生一定影響。PEG 400用量比例相對(duì)較大時(shí)（70%）體外釋藥相對(duì)較快，比例相對(duì)較小時(shí)（30%）為體外釋藥相對(duì)較慢，當(dāng)用量為50%時(shí)IMP-SD-HMSRT體外釋藥相對(duì)適中?？梢奝EG 400用量比例對(duì)IMP-SD-HMSRT體外釋藥影響較大，后續(xù)需要進(jìn)一步優(yōu)化。

2.4.4 PEG用量的考察 固定IMP-SD含量為240 mg/片，HPMC 15M為緩釋材料，PEG 400用量比例為50%等條件不變，分別考察PEG總用量（30、20、10 mg/片）對(duì)IMP-SD-HMSRT釋藥行為的影響，結(jié)果見圖6。PEG物質(zhì)在IMP-SD-HMSRT中起到調(diào)節(jié)釋藥速率的作用，當(dāng)PEG用量較大時(shí)（30 mg/片）體外釋藥相對(duì)較快，比例相對(duì)較小時(shí)（10 mg/片）為體外釋藥相對(duì)較慢，后續(xù)需對(duì)PEG用量進(jìn)一步優(yōu)化。

圖5 PEG 400用量比例的考察(, n = 3)

圖6 PEG用量的考察(, n = 3)

2.5 Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化IMP-SD-HMSRT處方

2.5.1 實(shí)驗(yàn)方案 根據(jù)單因素考察結(jié)果，選擇HPMC K15M用量（30、45、60 mg/片，1）、PEG 400所占PEG總用量的比例（30%、50%、70%，2）和PEG總用量（10、20、30 mg/片，3）作為主要影響因素，各影響因素的水平見表1。

對(duì)于IMP-SD-HMSRT來講，在2 h的累積釋放率（2）應(yīng)防止出現(xiàn)突釋或遲釋，6 h的累積釋放率（6）應(yīng)防止出現(xiàn)釋藥不足或過度釋藥，12 h累積釋放率（12）應(yīng)達(dá)基本釋放完畢要求。采用綜合評(píng)分（）進(jìn)行評(píng)價(jià)，公式為＝|2－0.3|×100＋|6－0.7|×100＋|12－0.95|×100，以綜合評(píng)分為響應(yīng)值，采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化IMP-SD- HMSRT處方，根據(jù)實(shí)驗(yàn)組合分別制備不同處方的IMP-SD-HMSRT，并分別測(cè)定2、6、12 h的累積釋放率，計(jì)算值，結(jié)果見表1。

2.5.2 模型的擬合及最佳處方 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，得出的2次多元回歸方程為＝6.48＋2.811＋2.592－13.233－0.6812－5.6513－0.8523＋8.5712＋5.1222＋11.7032，方差分析見表2。擬合結(jié)果顯示，2＝0.987 1，adj2＝0.970 6，說明擬合值與實(shí)測(cè)值相關(guān)性良好。模型＜0.000 1（具極顯著性意義），失擬項(xiàng)的＝0.148 3＞0.05（無顯著性意義），說明該模型未知因素干擾小。根據(jù)方差分析結(jié)果，方程中1、2、3、13、12、22和32各項(xiàng)均具顯著性或極顯著意義（＜0.05、0.01）。固定HPMC K15M用量、PEG 400比例和PEG總量的某一因素，得其他2因素對(duì)綜合評(píng)分的三維曲面圖，見圖7。

表1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果(n = 3)

Table 1 Experiments results of Box-Behnken (n= 3)

序號(hào)X1/(mg?片?1)X2/%X3/(mg?片?1)L2/%L6/%L12/%Y序號(hào)X1/(mg?片?1)X2/%X3/(mg?片?1)L2/%L6/%L12/%Y 130 (?1)30 (?1)20 (0)33.765.488.216.11045701024.750.480.239.7 245 (0)50 (0)2031.473.294.45.31145703034.676.297.112.9 345502033.670.796.55.91260302022.757.884.619.9 460 (+1)5010 (?1)15.853.475.150.71345502030.673.597.36.4 53070 (+1)2045.176.594.821.81445301021.962.478.732.0 645502034.674.195.69.31545303033.272.398.18.6 760702023.458.390.422.91660503023.874.994.511.6 8305030 (+1)35.877.694.314.11745502032.771.696.25.5 930501026.254.883.430.6

當(dāng)固定某一因素不變時(shí)，隨著其他2因素的增加總評(píng)分均呈現(xiàn)先下降后上升趨勢(shì)，總評(píng)分越小，表明釋藥過程越理想。得到的IMP-SD-HMSRT最佳處方為HPMC K15M用量48.18 mg/片，PEG 400比例58.26%，PEG總量26.62 mg/片；預(yù)測(cè)的總評(píng)分為4.7。

表2 方差分析

Table 2 Analysis of variance

因素方差自由度均方F值P值因素方差自由度均方F值P值 模型2 746.409305.1659.64＜0.000 1X12309.421309.4260.480.000 1 X163.28163.2812.370.009 8X22110.481110.4821.590.002 4 X253.56153.5610.470.014 3X32576.13135.82112.60＜0.000 1 X31 399.2011399.20273.47＜0.000 1殘差35.8275.12 X1X21.8211.820.360.569 4失擬度25.1738.293.150.148 3 X1X3127.691127.6924.960.001 6純誤差10.6542.66 X2X32.8912.890.560.476 8總誤差2 782.2216

圖7 各因素與響應(yīng)值的三維圖

2.6 工藝驗(yàn)證

為便于操作，將IMP-SD-HMSRT最佳處方調(diào)整為HPMC K15M用量為48 mg/片，PEG 400比例為58%，PEG總量為26.5 mg/片。平行制備3批IMP-SD-HMSRT，分別測(cè)定2、6、12 h的累積釋放率，并按照“2.5.1”項(xiàng)下方法計(jì)算綜合評(píng)分。3批IMP-SD-HMSRT體外釋藥結(jié)果見圖8，說明確定的最佳處方工藝重復(fù)性良好，綜合評(píng)分分別為5.1、4.6、4.8，均與預(yù)測(cè)值4.7接近，且12 h平均累積釋放率達(dá)到95.54%。

圖8 IMP-SD-HMSRT體外釋藥曲線(, n = 6)

2.7 歐前胡素普通片及IMP-SD片的制備和體外釋藥比較

取歐前胡素和IMP-SD粉末適量，分別加入淀粉混合均勻，6%淀粉漿制軟材，20目篩制粒，真空干燥12 h，20目篩整粒，加入0.8%硬脂酸鎂，混勻后壓制成直徑1.1 cm片劑，即得歐前胡素普通片及IMP-SD片。

按“2.3”項(xiàng)下方法比較歐前胡素普通片、IMP- SD片和IMP-SD-HMSRT體外釋藥情況，結(jié)果見圖9。IMP-SD片在0～4 h釋藥速率較快，在4 h基本釋放完畢。將IMP-SD制備成IMP-SD-HMSRT后釋藥緩慢，12 h累積釋放率為96.07%，而歐前胡素普通片在12 h累積釋放率僅為33.40%。由于IMP-SD- HMSRT具有明顯的緩釋特征，為與后續(xù)藥動(dòng)學(xué)研究保持一致，因此增加了18 h取樣點(diǎn)。

圖9 歐前胡素普通片、IMP-SD片和IMP-SD-HMSRT體外釋藥曲線(, n = 6)

2.8 藥動(dòng)學(xué)研究

2.8.1 給藥及取血方案 取18只健康家兔，分為歐前胡素普通片組、IMP-SD片組和IMP-SD-HMSRT組，給藥前禁食0.5 d，但可自由飲水。用開口器將片劑送入家兔口中，溫水送服。歐前胡素普通片組于0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8 h于耳緣靜脈處取血約1 mL置于肝素化離心管中。IMP-SD片和IMP-SD-HMSRT組分別增加取血點(diǎn)至12 h和18 h。血漿樣品均于3500 r/min離心3 min，取血漿密封，置于?18 ℃冰箱保存。

2.8.2 血漿樣品的處理[5]甲醇配制質(zhì)量濃度為800 ng/mL的異歐前胡素作為內(nèi)標(biāo)溶液。常溫解凍后吸取血漿樣品100 μL置離心管中，加入內(nèi)標(biāo)溶液40 μL，醋酸乙酯-石油醚（1∶1）2 mL，渦旋6 min，5000 r/min離心5 min。取上層有機(jī)相，置于空白離心管中，45 ℃的氮?dú)饩徛蹈桑跉堅(jiān)尤?00 μL甲醇復(fù)溶，繼續(xù)于5000 r/min離心5 min即得血漿樣品，待測(cè)。

2.8.3 溶液配制及線性曲線考察 采用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為1000、500、250、100、50、25 ng/mL的歐前胡素對(duì)照品溶液，分別取100 μL，45 ℃的氮?dú)饩徛蹈?，加?00 μL空白血漿，渦旋6 min，即得歐前胡素血漿對(duì)照品溶液。按照“2.8.2”項(xiàng)下所述方法處理樣品，進(jìn)HPLC測(cè)定歐前胡素與內(nèi)標(biāo)的峰面積。歐前胡素與內(nèi)標(biāo)的峰面積比（）對(duì)歐前胡素質(zhì)量濃度（）進(jìn)行線性回歸后得回歸方程為＝1.426 8＋10.265 9，＝0.992 2，因此，歐前胡素血漿對(duì)照品在20～1000 ng/mL線性關(guān)系良好。

2.8.4 專屬性考察 取空白血漿、歐前胡素＋空白血漿和血漿樣品分別進(jìn)HPLC，色譜圖見圖10，可見，血漿內(nèi)源性物質(zhì)不干擾歐前胡素及內(nèi)標(biāo)色譜峰，因此專屬性較高。

2.8.5 穩(wěn)定性考察 取歐前胡素普通片給藥1.5 h的血漿樣品，于0、1、3、6、9、12 h進(jìn)HPLC測(cè)定，計(jì)算歐前胡素與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD為7.64%，所以血漿樣品穩(wěn)定性較好。

2.8.6 精密度考察 取質(zhì)量濃度為25、250、1000 ng/mL血漿對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得歐前胡素與內(nèi)標(biāo)異歐前胡素峰面積之比的RSD分別為6.35%、7.09%、5.78%，所以日內(nèi)精密度良好。取質(zhì)量濃度為25、250、1000 ng/mL血漿對(duì)照品溶液，每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定6 d，計(jì)算得歐前胡素與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD分別為9.15%、10.26%、7.78%，所以日間精密度良好。

圖10 空白血漿(A)、歐前胡素＋空白血漿(B) 和血漿樣品(C) 的HPLC圖

2.8.7 回收率考察 取質(zhì)量濃度為25、250、1000 ng/mL的歐前胡素對(duì)照品溶液，按照“2.8.2”項(xiàng)下所述方法制備血漿對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定歐前胡素與內(nèi)標(biāo)的峰面積，計(jì)算兩者峰面積比值，帶入＝1.426 8＋10.265 9計(jì)算歐前胡素的測(cè)得質(zhì)量濃度，并與實(shí)際質(zhì)量濃度相比計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，平均回收率為95.64%，RSD為7.71%。

2.8.8 藥動(dòng)學(xué)結(jié)果 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)采用藥動(dòng)學(xué)分析軟件DAS 2.0進(jìn)行擬合，結(jié)果見表3。歐前胡素不同片劑的藥-時(shí)曲線見圖11。IMP-SD片的達(dá)峰時(shí)間（max）、達(dá)峰濃度（max）、藥時(shí)曲線下面積（AUC0～t）等與歐前胡素普通片相比具有顯著性差異（＜0.05、0.01），其中max顯著性提前，max顯著性提高，波動(dòng)幅度較大，相對(duì)生物利用度提高至191.47%。IMP-SD-HMSRT的max顯著性延后至（4.08±0.43）h，max降低至（344.67±43.81）ng/mL，血藥濃度波動(dòng)幅度明顯降低，體內(nèi)平均滯留時(shí)間（MRT）顯著延長（＜0.01），與歐前胡素普通片相比相對(duì)生物利用度提高至219.76%，其生物利用度提高幅度高于IMP-SD片。

表3 主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(, n = 6)

Table 3 Main pharmacokinetic parameters (, n = 6)

參數(shù)單位歐前胡素片IMP-SD片IMP-SD-HMSRT Tmaxh1.53±0.260.94±0.23*4.08±0.43**## Cmaxng?mL?1405.08±57.33789.66±157.74**344.67±43.81*## T1/2h4.17±0.383.81±0.338.25±1.63**## AUC0～tng?h?mL?11 249.16±184.242 391.73±387.09**2 745.15±416.94**# AUC0～￥ng?h?mL?11 302.85±198.612 483.22±414.84**2 849.18±427.13**# MRTh2.32±0.312.71±0.373.54±0.46**## F%?191.47219.76

與歐前胡素普通片比較：*＜0.05**＜0.01；與IMP-SD片比較：#＜0.05##＜0.01

*< 0.05**< 0.01imperatorin tablets;#< 0.05##< 0.01IMP-SD tablets

2.9 體內(nèi)外相關(guān)性評(píng)價(jià)

采用Loo-Rigelman法計(jì)算IMP-SD-HMSRT體內(nèi)吸收率（a）[12-13]。

式中(A)表示時(shí)間體內(nèi)藥量，(A)￥為體內(nèi)總藥量，ρ表示時(shí)間血藥濃度，10表示藥物從中央室消除速率常數(shù)，d表示時(shí)間內(nèi)的血藥濃度曲線下面積，e為周邊室內(nèi)藥物量，p表示周邊室藥量

按此公式計(jì)算a，并作為因變量，以各時(shí)間點(diǎn)的累積釋放率F為自變量進(jìn)行線性回歸，評(píng)價(jià)IMP-SD-HMSRT體內(nèi)外相關(guān)性。結(jié)果顯示（表4），IMP-SD-HMSRT在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中相關(guān)系數(shù)最高（＝0.981 9），回歸方程為a＝2.008 4F－11.697 3。因此IMP-SD-HMSRT可采用pH 6.8磷酸鹽緩沖液（轉(zhuǎn)籃法，75 r/min）來預(yù)測(cè)體外釋放及體內(nèi)吸收情況。

3 討論

緩釋材料HPMC型號(hào)（K4M、K15M、K30M）對(duì)IMP-SD-HMSRT體外釋藥影響較大，當(dāng)HPMC K4M和HPMC K30M作為緩釋材料時(shí)容易出現(xiàn)釋藥過快或釋藥過慢情況[14-16]，可能是由于相對(duì)分子質(zhì)量太大或太小時(shí)，均影響了凝膠層的緩釋效果。HPMC K15M相對(duì)分子質(zhì)量適中，故選為緩釋材料，其用量對(duì)體外釋藥影響較大[16-17]，結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)，確定其優(yōu)化范圍為30～60 mg/片。

圖11 歐前胡素普通片、IMP-SD片和IMP-SD-HMSRT 藥-時(shí)曲線(, n = 6)

HMSRT一般是通過擴(kuò)散及溶蝕機(jī)制釋放藥物，因此，需加入一定量的PEG作為釋藥速率調(diào)節(jié)劑[10]，PEG型號(hào)（PEG 400或PEG 4000）對(duì)釋藥影響也較大，單獨(dú)采用PEG 400或PEG 4000時(shí)釋藥速率均不理想，因而采用兩者混合物作為釋藥速率調(diào)節(jié)劑[9-10,18]。結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定PEG400所占比例優(yōu)化范圍為30%～70%，PEG總量優(yōu)化范圍為10～30 mg/片。

表4 IMP-SD-HMSRT的評(píng)價(jià)結(jié)果(n = 6)

Table 4 Evaluation results of IMP-SD-HMSRT (n = 6)

溶出介質(zhì)溶出條件回歸方程相關(guān)系數(shù) 0.01 mol?L?1鹽酸溶液轉(zhuǎn)籃法，75 r?min?1Fa＝1.794 1 Ft－9.971 50.769 6 pH 4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液轉(zhuǎn)籃法，75 r?min?1Fa＝2.312 8 Ft－17.248 00.908 5 水轉(zhuǎn)籃法，75 r?min?1Fa＝2.205 7 Ft－16.078 40.968 2 pH 6.8磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)籃法，75 r?min?1Fa＝2.008 4 Ft－11.697 30.981 9

制備的IMP-SD-HMSRT釋藥過程可能是：IMP-SD-HMSRT進(jìn)入水相后緩釋片表層的HPMC高分子材料遇水發(fā)生水化，即在緩釋片表層形成凝膠層，該凝膠層對(duì)內(nèi)部藥物釋放起到阻滯效果。同時(shí)，IMP-SD-HMSRT處方中釋藥速率調(diào)節(jié)劑PEG物質(zhì)遇水發(fā)生溶解，在凝膠阻滯層中留下釋藥通道。隨著時(shí)間的延長骨架材料逐漸溶蝕，直至藥物釋放完畢[17]，體外釋藥示意圖見圖12。

歐前胡素原料藥溶解度較差，在8 h后血藥濃度已低于定量限。IMP-SD在一定程度上促進(jìn)了藥物吸收，但在12 h后血藥濃度已低于定量限。而IMP-SD-HMSRT增加了藥物在胃腸道滯留時(shí)間，有助于藥物被充分吸收，因而18 h時(shí)間點(diǎn)血藥濃度仍在定量限之上，為真實(shí)反映IMP-SD-HMSRT體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為，故IMP-SD-HMSRT測(cè)定時(shí)間點(diǎn)設(shè)定至18 h。

圖12 IMP-SD-HMSRT體外變化過程

家兔口服藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示，IMP-SD片的max顯著性提前，max與歐前胡素普通片相比提高了1.95倍，這與SD提高藥物溶解度、提高藥物溶出速率及累積溶出度有關(guān)，但體內(nèi)血藥濃度波動(dòng)幅度較大，可能會(huì)對(duì)安全性造成影響。而IMP-SD- HMSRT使max大大降低，這是由于緩釋片中的高分子材料HPMC K15M口服遇水后形成凝膠層，控制了IMP-SD中藥物的釋放速率，同時(shí)也影響了入血速度，使max顯著性延后[19]，max波動(dòng)幅度減小，且IMP-SD-HMSRT的生物利用度提高幅度高于IMP-SD片，說明HMSRT有助于藥物被充分吸收，提高生物利用度[19-20]。本研究成功制備了IMP-SD- HMSRT，后期還需對(duì)其劑量[20]、給藥方案、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及藥效學(xué)評(píng)價(jià)等繼續(xù)進(jìn)行研究。

志謝：本研究由山東省職業(yè)教育欒會(huì)妮名師工作室資助（2019）

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Preparation of imperatorin solid dispersion hydrogel matrix sustained-release tablets and pharmacokinetic evaluation

XU Zhi-jie

Weihai Ocean Vocational College, Weihai 264300, China

To prepare imperatorin solid dispersion (IMP-SD) hydrogel matrix sustained-release tablets (IMP-SD- HMSRT), and investigate the pharmacokinetic behavior and-correlation.Solvent evaporation was used to prepare IMP-SD. On the basis of single factor investigation, HPMC K15M dose, PEG 400 proportion and amounts of PEG dose were selected as main influencing factors, composite score of cumulative rate of 2, 6, and 12 h of IMP-SD-HMSRT was used as response value, Box-Behnken design-response surface method was employed to optimize formulation of IMP-SD-HMSRT, and the pharmacokinetic behavior in rabbits was studied. Loo-Rigelman method was used for the evaluation ofandcorrelation.The optimal formulation of IMP-SD-HMSRT: HPMC K15M dose was 48 mg/tablet, PEG 400 proportion was 58%, PEG total dose was 26.5 mg/tablet. The accumulative release of IMP-SD-HMSRT could achieve 95.54% whthin 12 h. Pharmacokinetic results showed thatmaxfluctuated slightly, andmaxwas delayed to (4.08 ± 0.43) h. The relative bioavailability of the IMP-SD-HMSRT was enhanced to 219.76% comparing to imperatorin tablets.release behavior of IMP-SD-HMSRT in pH 6.8 phosphate buffer saline was associated with itspharmacokinetics.The drug release of IMP-SD-HMSRT was slowly, and promoted absorption. The correlation between the absorptionand releaseis fine.

imperatorin; solid dispersion; hydrogel matrix sustained-release tablets; Box-Behnken design-response surface method; pharmacokinetics

R283.6

A

0253 - 2670(2022)17 - 5321 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.17.008

2022-02-17

國家自然科學(xué)青年基金資助項(xiàng)目（51804021）

徐志杰（1984—），女，碩士，講師，研究方向?yàn)楝F(xiàn)代給藥系統(tǒng)與制劑新技術(shù)。Tel: (0631)7697687 E-mail: xzj18669333606@126.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]