超高效液相色譜法同時測定布洛偽麻片中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量

王曉雯，丁大中，欒成章

（山東省青島市食品藥品檢驗研究院·國家藥品監(jiān)督管理局海洋中藥質(zhì)量研究與評價重點實驗室，山東 青島 266071）

布洛偽麻片為布洛芬和鹽酸偽麻黃堿組成的復方制劑，主要用于治療感冒或過敏性鼻炎引起的發(fā)熱、頭痛、咽喉痛、四肢酸痛、關節(jié)痛、鼻塞、流涕、打噴嚏等癥狀［1］。目前，該制劑含量測定的法定檢驗標準為2020 年版《中國藥典（二部）》［2］，也有文獻報道了幾種改進的液相色譜檢測方法［3-5］，但均存在流動相添加離子對試劑而造成操作煩瑣、色譜平衡時間長、損傷色譜柱，以及因處方中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量差異而造成色譜圖中兩者峰面積差異過大的問題。本研究中建立了同時測定布洛偽麻片中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量的超高效液相色譜法［6-12］，為控制該制劑質(zhì)量提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀，包含Empower 色譜工作站（美國Waters公司）；AG285型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司，精度為十萬分之一）。

1.2 試藥

布洛偽麻片（山東新華制藥股份有限公司，批號分別為2011040，2011041，2011039，規(guī)格為每片含布洛芬0.2 g，鹽酸偽麻黃堿30 mg）；布洛芬對照品（批號100179 - 201707，含量99.9%），鹽酸偽麻黃堿對照品（批號171237-201510，含量99.8%），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，氯乙酸、氨水均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters BEH Phenyl 柱（150 mm × 2.1 mm，1.7μm）；流動相：氯乙酸溶液（pH3.0）-乙腈（52∶48，V/V）；流速：0.5 mL/ min；檢測波長：257 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：2 μL。

2.2 溶液制備

取布洛芬對照品100 mg、鹽酸偽麻黃堿對照品15 mg，精密稱定，置同一500 mL容量瓶中，加流動相溶解并定容，搖勻，即得布洛芬、鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量濃度分別為0.2，0.03 mg/mL 的混合對照品溶液。取樣品 20 片，研細，稱取細粉適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并定容，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL 置50 mL 容量瓶中，加流動相定容，搖勻，即得供試品溶液。以流動相作為空白對照溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別取2.2 項下3 種溶液適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果布洛芬峰與鹽酸偽麻黃堿峰分離良好，且空白對照溶液在與對照品溶液保留時間相同處無干擾峰，表明專屬性良好。詳見圖1。

圖1 超高效液相色譜圖Fig.1 UPLC chromatograms

線性關系考察：精密吸取2.2項下混合對照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分進樣量（X，mg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸。得布洛芬回歸方程Y1= 0.000 013X1- 0.000 3（r= 0.999 6），鹽酸偽麻黃堿回歸方程Y2=0.000 016X2-0.000 219（r=0.999 9）。結(jié)果表明，布洛芬、鹽酸偽麻黃堿進樣量分別在0.201～0.602 mg 和 0.030～0.091 mg 范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2.2 項下混合對照品溶液適量，按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果布洛芬及鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.11%及0.12%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液適量，室溫下分別于第 0，1，3，6，12，24 h 時按 2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果布洛芬及鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.11%及0.14%（n= 6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：稱取樣品粉末（批號為2011040），精密稱定，共6 份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結(jié)果布洛芬及鹽酸偽麻黃堿含量的RSD分別為0.33%及0.42%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號2011040），研細，取粉末適量，共9份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對照品溶液各適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測定

取3 批樣品各適量，分別按2.2 項下方法制備供試品溶液，并按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，同時與2020 年版《中國藥典（二部）》中含量測定方法所得結(jié)果進行比較。結(jié)果布洛芬、鹽酸偽麻黃堿的平均含量分別為99.20%和100.77%，與采用藥典方法得出含量的RSD均不超過0.3%（見表2）。

表2 樣品含量測定結(jié)果Tab.2 Results of content determination of pseudoephedrine hydrochloride and ibuprofen in samples

3 討論

采用藥典中相關方法及根據(jù)相關文獻報道，于流動相中添加十二烷基硫酸鈉的離子對試劑會造成色譜平衡時間長、損傷色譜柱等問題。本研究通過預試驗設計并篩選出氯乙酸溶液搭配乙腈的流動相系統(tǒng)，避免了離子對試劑的使用。

全波長掃描可知，布洛芬與鹽酸偽麻黃堿的最大吸收波長分別為224 nm 和219 nm，藥典中選擇檢測波長為兩個主成分最大吸收波長附近的215 nm，但存在末端吸收基線噪音高、色譜圖中兩主峰面積差異巨大等缺陷。預試驗設計了兩種波長方案：一是選擇兩主成分吸收曲線的交叉點，分別為220 nm 和237 nm，其中220 nm 與215 nm 更接近，存在相同缺陷，而在237 nm波長下，鹽酸偽麻黃堿的吸光度相比215 nm降低80%以上，因其處方含量小，相同質(zhì)量濃度下的吸光度大幅降低會影響該成分檢測的靈敏度和準確性；二是選擇鹽酸偽麻黃堿的次強吸收波長257 nm，避免了末端吸收造成基線噪音過高，該波長處吸光度約為215 nm 處的60%，足以保證檢測的準確性，同時布洛芬在此波長下吸光度雖低，但處方中含量高，也能保證足夠的檢測靈敏度和準確性。故最終確定了257 nm的檢測波長。

藥典及相關文獻報道使用C18柱或氰基柱，經(jīng)查詢分析，本研究中兩個主成分均為含苯環(huán)的小分子化合物，選擇苯基柱是因為其具備的p-p共軛相互作用能增強極性芳香族化合物的分離和保留能力。故本研究中選擇苯基柱。

遵循樣品溶劑與流動相盡量一致的原則，預試驗中使用了新篩選的流動相提取樣品，并平行對比藥典中的樣品提取方法，結(jié)果兩種方案均能將目標組分完全提取出來，兩個主成分在溶劑中的穩(wěn)定性也滿足試驗需求。本研究結(jié)果表明，所建方法能滿足各項試驗的要求，且使用新建方法與現(xiàn)行藥典中方法檢測樣品含量的結(jié)果基本一致。

本研究中使用UPLC 法替代了現(xiàn)行藥典中的高效液相色譜（HPLC）法，由于UPLC 儀器的管路孔徑及適用的色譜柱填料粒度均遠小于常規(guī)HPLC 法，樣品質(zhì)量濃度、進樣體積、液相流速均需進行相應縮減，同時流動相和進樣溶液推薦使用0.2 mm 濾膜濾過，流動相建議當天配制當天使用。

綜上所述，本研究中建立了可同時檢測布洛偽麻片中布洛芬和鹽酸偽麻黃堿含量的UPLC 法，彌補了現(xiàn)有方法的缺陷，具有準確、快速、便捷、合理的特點，對其他劑型中布洛芬與鹽酸偽麻黃堿的含量測定及相關制劑的質(zhì)量控制也有借鑒意義。