TLR4、VEGF在皮膚黑色素瘤組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

王麗娜 朱艷 張麗

(1.漢中市人民醫(yī)院皮膚科,陜西 漢中 723000；2.陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合外科學(xué)，陜西 咸陽 712000；3.陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院皮膚科,陜西 咸陽 712000)

皮膚黑色素瘤(CMM)是一種廣泛浸潤皮膚表皮、皮下組織及其黏膜深層組織的皮膚腫瘤，具有發(fā)病率高、惡性程度高、預(yù)后差等特點(diǎn)，近年來發(fā)病率和病死率呈上升趨勢[1]。研究[2]發(fā)現(xiàn)，CMM的發(fā)生與遺傳、過度光照、摩擦刺激、個人免疫抑制等因素有關(guān)。Toll樣受體4(TLR4)是啟動細(xì)胞內(nèi)炎癥信號傳導(dǎo)的關(guān)鍵因子，在免疫調(diào)節(jié)和全身炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[3]。有研究[4]指出，血管新生是腫瘤發(fā)展的重要病理特征，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種由正常細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞及其相關(guān)間質(zhì)細(xì)胞生成分泌的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因素，在血管生成中發(fā)揮著重要作用。本文主要探討TLR4、VEGF在CMM組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇本院2019年4月至2021年5月收治并行手術(shù)治療的88例CMM患者為研究組，其中男48例，女40例；年齡(47.55±8.31)歲；Clark分級：I級19例，Ⅱ級13例，Ⅲ級10例，Ⅳ級26例，V級20例。另選擇同期收治的行手術(shù)治療的71例皮內(nèi)痣患者為對照組。對照組中男46例，女42例；年齡(47.94±8.25)歲。納入患者臨床及病理資料均完整；均經(jīng)組織病理學(xué)確診為CMM；入院前未接受任何治療。已排除合并其他惡性腫瘤者；除皮膚外其他部位有黑色素瘤者；肝腎功能不全、風(fēng)濕免疫性疾病、嚴(yán)重感染性疾病患者。兩組臨床資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。患者及家屬均知情同意。

1.2方法 兔抗人TLR4多克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)、兔抗人VEGF單克隆抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，免疫組織化學(xué)染色試劑盒、光學(xué)顯微鏡、DAB顯色液等均由實(shí)驗(yàn)室提供。將病理蠟塊按照常規(guī)連續(xù)切片，切片厚3μm，均按照試劑盒說明書進(jìn)行TLR4、VEGF免疫組化染色。

1.3結(jié)果判斷 染色判讀：TLR4陽性為細(xì)胞質(zhì)或胞膜著色呈棕黃色，VEGF細(xì)胞質(zhì)胞漿或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)均勻棕黃色顆粒為陽性。細(xì)胞免疫組化結(jié)果均由兩位病理科醫(yī)師在雙盲條件下進(jìn)行獨(dú)立判斷，每張切片隨機(jī)選取5個高倍視野(×200)，每個視野分別記錄50個腫瘤細(xì)胞的染色強(qiáng)度與染色密度，采用半定量計數(shù)法判定染色結(jié)果，染色強(qiáng)度：無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；染色密度：著色細(xì)胞比例≤5%0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分。兩者記分相乘，≤3分為陰性表達(dá)，>3分為陽性表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1陽性表達(dá) TLR4、VEGF在CMM組織中的陽性表達(dá)明顯高于皮內(nèi)痣(P<0.05)。見表1。

表1 TLR4、VEGF在CMM和皮內(nèi)痣組織中的陽性表達(dá)

2.2臨床病理特征的關(guān)系 不同Clark分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CMM患者TLR4、VEGF陽性表達(dá)比較有差異(χ2=19.471、4.718，P<0.05)。見表2。

表2 TLR4、VEGF表達(dá)與CMM臨床病理特征的關(guān)系

2.3相關(guān)性分析Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，VEGF表達(dá)陽性和TLR4計數(shù)同樣呈正相關(guān)。見表3。

表3 CMM組織TLR4與VEGF的相關(guān)性

3 討 論

既往研究[5]指出，CMM發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，多與遺傳、環(huán)境、免疫缺陷等因素有關(guān)，容易造成某一細(xì)胞基因水平生長調(diào)控失常，使細(xì)胞增殖與凋亡出現(xiàn)異常，進(jìn)而出現(xiàn)癌變。腫瘤細(xì)胞的免疫活性可識別腫瘤逃避集體免疫系統(tǒng)，在腫瘤發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。研究[6]顯示，腫瘤細(xì)胞上表達(dá)的TLRs的激活對抑制免疫細(xì)胞的抗腫瘤作用具有重要作用，同時其能夠通過介導(dǎo)炎癥因子和細(xì)胞因子，提高炎癥反應(yīng)，造成腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞聚集，進(jìn)一步釋放更多的促血管生長因子和細(xì)胞生長，加重腫瘤嚴(yán)重程度。TLR4是參與炎癥和感染調(diào)控過程中的細(xì)胞表面受體，高TLR4水平與細(xì)胞的增殖和高蛋白合成存在密切關(guān)聯(lián)[7]。研究[8]發(fā)現(xiàn)，TLR4可通過My888進(jìn)一步激活ERK1/2入核調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄蛋白活性，進(jìn)而促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長和膠原沉積。有研究指出[9]，慢性炎癥會增加腫瘤發(fā)生和發(fā)展的概率，而TLR4在炎癥反應(yīng)中，發(fā)揮著啟動適應(yīng)性免疫反應(yīng)的重要作用，不僅在免疫細(xì)胞上有表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞上同樣有表達(dá)。細(xì)胞因子和生長因子是參與CMM發(fā)病、發(fā)展中的重要因子，痔細(xì)胞可通過產(chǎn)生生長因子和趨化因子，進(jìn)而上調(diào)生長因子VEGF表達(dá)，進(jìn)而引發(fā)CMM細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移[10]。胡燕燕等[11]研究發(fā)現(xiàn)，血管新生在CMM垂直生長期的轉(zhuǎn)移侵襲活動中發(fā)揮著重要作用，而VEGF是調(diào)節(jié)病理性和生理性血管新生的重要信號通路因子，血管新生腫瘤良好血供的解剖學(xué)基礎(chǔ)，因此VEGF在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。

本文結(jié)果顯，TLR4、VEGF在CMM組織中的陽性表達(dá)明顯高于皮內(nèi)痣，提示相較于正常皮膚組織，CMM組織中TLR4、VEGF陽性表達(dá)呈現(xiàn)高水平。此外不同Clark分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CMM患者TLR4、VEGF陽性表達(dá)比較有差異，提示TLR4、VEGF在CMM腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。研究[12]顯示，CMM的侵襲和轉(zhuǎn)移是多因素的復(fù)雜過程，其中TLR家族和VEGF家族中的細(xì)胞因子和蛋白高表達(dá)在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。同時VEGF表達(dá)陽性和TLR4計數(shù)同樣呈正相關(guān)，推測原因可能是腫瘤微環(huán)境中的VEGF可通過下調(diào)TLR4的表達(dá)進(jìn)而負(fù)向調(diào)控腫瘤細(xì)胞的免疫功能。