捆仙七化學成分研究*

丁超 吳瑩 黃欣悅 孫玉 張化為 姜祎 李玉澤 宋小妹 張東東

(陜西中醫(yī)藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046)

太白“七藥”是秦巴山區(qū)中草藥資源的一大特色，其資源豐富，療效顯著，得到廣大臨床醫(yī)生和科研學者的關注[1]。捆仙七(Herbapachysandraeterminalis)為黃楊科板凳果屬植物頂花板凳果(PachysandraterminalisSieb.et Zucc.)的干燥帶根全草，廣泛分布于我國西北、西南等地區(qū)。其味苦微辛，具有祛風除濕、清熱解毒、通經(jīng)止帶的功效；主要治療風濕性關節(jié)炎、胃痛、支氣管炎等病癥[2]。其主要含有生物堿、甾醇、三萜類、酚類等化學成分[3]；現(xiàn)代藥理學研究表明，其具有抗氧化、抗?jié)僛4-6]、抗腫瘤[7-12]、抗菌[13-14]、殺蟲[15-16]等生物活性。作為太白“七藥”的重要品種，捆仙七藥效物質基礎尚不明確，系統(tǒng)性化學成分研究相對較少。本實驗針對捆仙七80%乙醇[17]提取物的二氯甲烷萃取部位進行系統(tǒng)分離純化，通過理化性質和波譜數(shù)據(jù)共鑒定了9個化合物，分別為4β-methyl-3-methylenepentane-1,2,5-triol(1)、4α-methy-3-methylenepentane-1,2,5-triol(2)、magnolioside(3)、香草醛(4)、3,4-二羥基苯甲酸(5)、apocynin(6)、(E)-methyl 12-hydroxyoctadec-10E-enoate(7)、(E)-11-hydroxy-octadeca-12-enoic acid(8)以及棕櫚酸(9)。其中化合物3、6～9為首次從板凳果屬中分離得到。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Burker AVANCE 400型核磁共振波譜儀(瑞士Burker公司)；WFH-203三用紫外分析儀(上海精科實業(yè)有限公司)；OB204電子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)；EYELAN-1100旋轉蒸發(fā)儀、KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Sephadex LH-20(美國GE公司)；島津LC-6AD型半制備液相色譜儀(島津紫外可見光檢測器SPD-20A)；CAPCELL PAK C18MGⅡ半制備色譜柱,(10 mm×250 mm，5 μm)；柱色譜硅膠(100～200目)、薄層色譜用硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)。

1.2試藥 捆仙七藥材于2019年采自陜西省寶雞市眉縣境內(nèi)，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學王薇教授鑒定為黃楊科板凳果屬植物頂花板凳果PachysandraterminalisSieb.et Zucc.的帶根全草；色譜甲醇(天津市科密歐化學試劑有限公司)；分析甲醇、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷(天津科密歐公司)；顯色劑為20%硫酸乙醇溶液；娃哈哈純凈水。

2 提取與分離

取自然干燥的捆仙七藥材50 kg，粉碎，80%乙醇回流提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液，濃縮得浸膏，分別以石油醚、二氯甲烷、正丁醇萃取3次，得二氯甲烷部位(190 g)，正丁醇部位(1500 g)。二氯甲烷部位(190 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇1∶0 ～ 0∶1)系統(tǒng)洗脫，得到F1～F13共13個組分。

F7(87.0 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇80∶1～0∶1)梯度洗脫得到F7-1～F7-7，F(xiàn)7-2(3.3 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇80∶1～0∶1)洗脫，析出無色針狀結晶為化合物3(15.6 mg)，再經(jīng)半制備液相(甲醇-水35∶65)純化得化合物1(26.0 mg，tR=25.0 min)、化合物2(19.0 mg，tR=27.3 min)；F-3(2.9 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷-甲醇1∶1)洗脫，再經(jīng)半制備液相(甲醇-水32∶68)純化得化合物4(20.3 mg，tR=35.5 min)、化合物5(21.5 mg，tR=38.0 min)；F7-4(3.1 g)經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱(二氯甲烷-甲醇1∶1)洗脫得化合物6(14.0 mg)；7-5(2.4 g)經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇80∶1 ～0∶1)洗脫，再經(jīng)半制備液相(甲醇-水30∶70)純化得化合物7(22 mg，tR=25.0 min)；F7-6經(jīng)硅膠柱色譜(二氯甲烷-甲醇80∶1)洗脫得化合物8(16.2 mg)，再經(jīng)半制備液相(甲醇-水25∶75)純化得化合物9(14.1 mg，tR=45.0 min)?；衔?～9的化學結構見圖1。

圖1 化合物1～9結構圖

3 結構鑒定

化合物1：為淡黃色油狀物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:1.03 (3H，d，J=7.0 Hz，7-CH3)，2.37 (1H，dd，J=7.0，14.0 Hz，4-H)，3.63 (2H，m，1-H)，3.50 (2H，m，5-H)，4.21 (1H，m，2-H)，5.08 (1H，s，6a-H)，5.23 (1H，s，6b-H);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:17.5 (C-7)，37.8 (C-4)，65.5 (C-5)，68.1 (C-1)，74.7 (C-2)，112.5 (C-6)，151.5 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道基本一致，因此鑒定化合物為4β-methyl-3-methylenepentane-1,2,5-triol。

化合物2：為淡黃色油狀物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:1.07 (3H，d，J=7.0 Hz，7-CH3)，2.43 (1H，dd，J=7.0，12.7 Hz，4-H)，3.56 (2H，m，5-H)，3.69 (2H，m，1H)，4.21 (1H，m，2-H)，5.09 (1H，s，6a-H)，5.28 (1H，s，6b-H);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:17.2 (C-7)，38.5 (C-4)，65.6 (C-5)，67.9 (C-1)，75.0 (C-2)，111.7 (C-6)，151.6(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道基本一致，因此鑒定化合物為4α-methy-3-methylenepentane-1,2,5-triol。

化合物3：為白色粉末，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.66 (1H，d，J=9.5 Hz，4-H)，7.55 (1H，s，8-H)，7.08 (1H，s，5-H)，6.34 (1H，d，J=9.5 Hz，3-H)，5.80 (1H，d，J=7.1 Hz，1′-H)，4.20～4.83 (6H，m，2′～6′-H)，3.74 (3H，s，OCH3);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:161.55 (C-2)，113.40 (C-3)，144.00 (C-4)，110.32 (C-5)，150.20 (C-6)，147.49 (C-7)，104.65 (C-8)，114.55 (C-9)，151.77 (C-10)，102.31 (C-1′)，75.13 (C-2′)，79.63 (C-3′)，71.60 (C-4′)，79.01 (C-5′)，62.74 (C-6′)，56.84 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[19]報道基本一致，因此鑒定化合物為magnolioside。

化合物4：為白色粉末，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:3.91 (3H，s，OCH3)，7.40 (1H，d，J=2.0 Hz，2-H)，6.92 (1H，d，J=8.0 Hz，5-H)，7.43 (1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，6-H)，9.74 (1H，s，CHO);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:129.2 (C-1)，109.9 (C-2)，148.3 (C-3)，153.4 (C-4)，114.9 (C-5)，126.6 (C-6)，191.5 (C-7)，54.9 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]報道基本一致，因此鑒定化合物為香草醛。

化合物5：白色粉末，易溶于甲醇。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6)δ:7.32 (1H，d，J=2.2 Hz，H-2)，6.76 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.27 (1H，dd，J=2.2，8.2 Hz，H-6)；13C-NMR (100 MHz，DMSO-d6)δ:167.7 (C-1′)，150.5 (C-4)，145.2 (C-3)，122.3 (C-1)，121.7 (C-6)，116.5 (C-5)，115.4 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻[21]報道基本一致，因此鑒定化合物為3,4-二羥基苯甲酸。

化合物6：為無色針狀結晶，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:3.83 (3H，s，OCH3)，2.50 (3H，s，COCH3)，6.86 (1H，d，J=8.2 Hz，5-H)，7.44 (1H，d，J=2.0 Hz，2-H)，7.50 (1H，dd，J=8.2，2.0 Hz，6-H);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:129.2 (C-1)，111.7 (C-2)，147.9 (C-3)，152.3 (C-4)，115.4 (C-5)，124.0 (C-6)，196.5 (C-7)，26.3 (C-8)，56.1 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[22]報道基本一致，因此鑒定化合物為apocynin。

化合物7：為無色油狀物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:0.87 (3H，t，J=7.1 Hz，CH3-18)，1.25-1.40 (18H，m，H-3～8、15～17)，1.42-1.70 (4H，m，H-2、14)，2.00 (2H，m，H-13)，2.32 (2H，m，H-9)，3.69 (3H，s，OCH3)，4.05 (1H，m，H-12)，5.45 (1H，ddd，J=15.5，7.0，1.3 Hz，H-10)，5.64 (1H，dt，J=15.5，7.0 Hz，H-11);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:174.4 (C-1)，34.1 (C-2)，24.9 (C-3)，29.0 (C-4)，29.1 (C-5)，29.1 (C-6)，29.2 (C-7)，29.2 (C-8)，31.8 (C-9)，133.0 (C-10)，132.1 (C-11)，73.2 (C-12)，37.3 (C-13)，31.1 (C-14)，29.2 (C-15)，25.5 (C-16)，22.6 (C-17)，14.1 (C-18)，51.4 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[23]報道基本一致，因此鑒定化合物為(E)-methyl 12-hydroxyoctadec-10E-enoate。

化合物8：為無色油狀物，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:0.88 (3H，t，J=6.4 Hz，H-18)，1.20-1.40 (20H，m，H-4～10、15～17)，1.50 (2H，m，H-3)，1.95 (2H，m，H-14)，2.21 (2H，m，H-2)，3.85 (1H，m，H-11)，5.51 (1H，m，H-13)，5.35 (1H，m，H-12);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:174,1 (C-1)，33.4 (C-2)，24.4 (C-3)，28.7 (C-4)，29.1 (C-5)，28.8 (C-6)，28.9 (C-7)，28.3 (C-8)，25.0 (C-9)，37.5 (C-10)，71.0 (C-11)，129.1 (C-12)，134.6 (C-13)，31.6 (C-14)，28.9 (C-15)，31.1 (C-16)，22.2 (C-17)，13.9 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻[24]報道基本一致，因此鑒定化合物為(E)-11-hydroxy-octadeca-12-enoic acid。

化合物9：為白色粉末，易溶于甲醇，1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:0.92 (3H，t，J=6.9 Hz，H-16)，2.23 (2H，m，H-2)，1.57 (2H，m，H-3)，1.31-1.40 (24H，m，H-4～15);13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:178.0 (C-1)，35.4 (C-2)，26.1 (C-3)，29.3 (C-4，13)，29.4 (C-5，12)，29.7 (C-6～11)，32.8 (C-14)，23.2 (C-15)，14.6 (C-16)。以上數(shù)據(jù)與文獻[25]報道基本一致，因此鑒定化合物為棕櫚酸。

4 結論

本實驗從捆仙七中共分離得到9個化合物，其中化合物3、6～9為首次從板凳果屬中分離得到，進一步豐富了捆仙七的化學成分，為后續(xù)的質量標準及藥理活性研究提供物質基礎。捆仙七中報道的化學成分以C21甾體類生物堿為主，非生物堿成分報道相對較少，后續(xù)值得繼續(xù)深入系統(tǒng)研究。