楓香樹(shù)不同部位中蘆丁含量的測(cè)定及楓香樹(shù)葉的生藥學(xué)研究

周燕霞，樂(lè)志燕

(江西醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校藥學(xué)院，江西 上饒 334000)

0 引言

楓香樹(shù)系金縷梅科楓香屬植物，因其外形與楓樹(shù)極為相似且有芳香味而得名，為1996年版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載的中藥品種[1]。主要分布于我國(guó)河南、山東、江西、四川、云南等地，多生于平地。具有祛風(fēng)除濕、利水除濕、解毒止痛、止血生肌等功效，臨床上常用于治療傷暑腹痛、創(chuàng)傷出血、泄瀉咳血等疾病[2]。研究顯示，楓香樹(shù)中含有色素、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油、酚酸類(lèi)、環(huán)烯醚萜類(lèi)等成分[3-4]，其中黃酮類(lèi)化合物是楓香樹(shù)藥材中主要活性成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗抑郁以及抗腫瘤等多種藥理活性，常作為質(zhì)量控制指標(biāo)性成分[5]。據(jù)報(bào)道，楓香樹(shù)全身都是寶，其樹(shù)脂能入藥以解毒止痛、止血生肌，根、莖、葉及果實(shí)亦可入藥以祛風(fēng)除濕、通絡(luò)活血[6-7]。目前，對(duì)于楓香樹(shù)不同部位中黃酮類(lèi)成分的含量測(cè)定研究較少，僅有學(xué)者對(duì)楓香樹(shù)葉中黃酮類(lèi)成分進(jìn)行了HPLC含量測(cè)定研究，根和莖中黃酮類(lèi)成分的含量測(cè)定研究還尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。因此，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用楓香樹(shù)藥材，本文以蘆丁為指標(biāo)成分，建立了楓香樹(shù)不同藥用部位(根、莖、葉)中蘆丁的HPLC含量測(cè)定方法，對(duì)其進(jìn)行性狀、顯微特征研究，以期為楓香樹(shù)藥材的資源開(kāi)發(fā)、綜合利用和質(zhì)量控制研究提供依據(jù)、奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有 限 公 司 )；phenomonex-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(上海精瑞科學(xué)儀器有限公司)；sartorius BS-124S電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)；PH100-3B41L-IPL顯微鏡(江西鳳凰光學(xué)股份有限公司)；XL-02A中藥粉碎機(jī)(濟(jì)南歐萊博科學(xué)儀器有限公司)；檢驗(yàn)篩(滬江儀器紗篩廠)，酒精燈及其他顯微鑒定為實(shí)驗(yàn)室常用儀器。

1.2 試藥

對(duì)照品蘆丁(批號(hào)111869-201802，純度99.6%)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。楓香樹(shù)藥材購(gòu)買(mǎi)于揭陽(yáng)中藥市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為楓香屬植物楓香Liquid-ambar formosana Hance的根莖葉；甲醇、磷酸、無(wú)水乙醇、水合氯醛、間苯三酚、稀甘油、碘試液等均為分析純，乙腈為色譜純，水為去離子水。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2 方法與結(jié)果

2.1 不同部位中蘆丁含量的測(cè)定

2.1.1 色譜條件

采用phenomonex-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈(20)-0.1%磷酸水溶液(80)為流動(dòng)相等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為 360 nm；流速為 1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。理論塔板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算，應(yīng)不得低于3000，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品16.0 mg，至50 mL容量瓶中，加70%乙醇溶解，定容，搖勻，配得質(zhì)量濃度分別為0.32 mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.1.3 供試品溶液制備

精密稱(chēng)取干燥粉碎后的楓香樹(shù)根、莖、葉各1.0 g，分別置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇10 mL，稱(chēng)重，超聲提取30 min，冷卻后稱(chēng)重，用70%乙醇補(bǔ)足失重，得供試品溶液。

2.1.4 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mL置 10 mL的容量瓶中，加入甲醇溶液并定容至刻度。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積Y對(duì)進(jìn)樣濃度X計(jì)算得回歸方程Y=206685X+149.51(r=0.999 8)，表明蘆丁在濃度范圍0.008-0.32 mg·mL-1內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算峰面積。結(jié)果蘆丁峰面積RSD為1.73%，表明儀器的精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取楓香樹(shù)莖樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制成溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算峰面積。結(jié)果蘆丁峰面積RSD為1.38%，表明方法的重復(fù)性好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取楓香樹(shù)莖樣品，分別在 0、2、4、8、12、24 h 下進(jìn)樣測(cè)定分析。結(jié)果蘆丁峰面積RSD為2.05%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的楓香樹(shù)莖樣品6份，每份約0.5 g，按約1:1的比例加入對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備成溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2，表明所建立的方法可行。

2.1.9 樣品含量測(cè)定

按“2.2”項(xiàng)下方法制備楓香樹(shù)根莖葉不同部位的供試品溶液，每批均平行制備3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果楓香樹(shù)不同部位中蘆丁的含量分別為：根0.0192 mg/g，莖0.0948 mg/g，葉中未檢測(cè)出蘆丁成分。

2.2 楓香樹(shù)葉的生藥學(xué)研究

2.2.1 原植物形態(tài)

為落葉喬木，多生長(zhǎng)于山谷、山麓中，常與山毛櫸科、樟科、榆科等樹(shù)種混生?？蛇_(dá)20-30 m的高度，胸徑最大者可達(dá)1m。小枝干后灰色，被柔毛，略有皮孔；芽體卵形，長(zhǎng)1.0 cm左右，鱗狀苞片敷有樹(shù)脂，干后會(huì)呈現(xiàn)棕黑色，并且伴有光澤，具體形態(tài)特征如圖2所示。

圖2 楓香樹(shù)原植物

2.2.2 性狀鑒定

葉薄革質(zhì)，其容易破碎，完整的葉片呈闊卵形，掌狀3裂，長(zhǎng)大約在5-12 cm，寬大約在7-17 cm，兩側(cè)裂片平展；基部心形，邊緣有細(xì)鋸齒，干后灰綠色；下面有短柔毛，或變禿凈僅在脈腋間有毛；常狀脈3-5條，在葉下面明顯突起；齒尖有腺狀突；葉柄長(zhǎng)大約7-11 cm，基部鞘狀，具體見(jiàn)圖3。

圖3 楓香樹(shù)葉藥材圖

2.2.3 顯微特征

藥材粉末灰綠色或淡棕色，非腺毛較多，單細(xì)胞，為厚壁非腺毛，細(xì)長(zhǎng)；表皮細(xì)胞表面觀成不規(guī)則形，細(xì)胞壁彎曲，主為平軸式，副衛(wèi)細(xì)胞大多為四個(gè)；導(dǎo)管主要為螺紋導(dǎo)管；草酸鈣方晶較小，分布不均；淀粉粒較小，單粒類(lèi)球形，臍點(diǎn)明顯，復(fù)粒2~3分粒組成，具體見(jiàn)圖4。

圖4 楓香樹(shù)葉顯微鑒定圖

3 討論

隨著“健康中國(guó)”戰(zhàn)略的實(shí)施，大健康產(chǎn)業(yè)已得到廣泛認(rèn)同和快速發(fā)展，中醫(yī)藥在大健康領(lǐng)域的作用越來(lái)越大，中藥材種植生產(chǎn)的規(guī)模也在逐步擴(kuò)大。但中藥材在生產(chǎn)加工過(guò)程中，往往取單一部位入藥，剩余部位被廢棄，得不到科學(xué)合理的利用，既造成資源浪費(fèi)，也嚴(yán)重污染環(huán)境[8]。近年來(lái)，隨著中藥被廣泛用于脫貧攻堅(jiān)和鄉(xiāng)村振興，為使中藥資源利用最大化，很多學(xué)者對(duì)中藥傳統(tǒng)非藥用部位化學(xué)成分、藥理作用以及不同部位之間的藥理活性評(píng)價(jià)、有效成分比較、活性成分制備等方面開(kāi)展了深入研究，并取得了豐碩的成果，為中藥非藥用部位的潛在藥用價(jià)值和資源開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

楓香樹(shù)不僅可以藥用，在環(huán)保方面也極具價(jià)值，既可改善生長(zhǎng)地的土地質(zhì)量、防止水土過(guò)度流失、凈化空氣質(zhì)量、保護(hù)生態(tài)環(huán)境，還因樹(shù)葉鮮紅極具觀賞性，常在城市規(guī)劃中被用以環(huán)境美化[9]。此外，楓香樹(shù)作為傳統(tǒng)中藥，其全身是寶，均可藥用，樹(shù)脂能入藥以解毒止痛、止血生肌，根、莖、葉及果實(shí)亦可入藥以祛風(fēng)除濕、通絡(luò)活血，是極具開(kāi)發(fā)意義和價(jià)值的中藥。本研究一方面建立了HPLC法測(cè)定楓香樹(shù)不同部位中蘆丁含量并比較了含量差異，所建立的方法簡(jiǎn)便可行、準(zhǔn)確靈敏。另一方面利用現(xiàn)代顯微數(shù)碼成相系統(tǒng)及其他影像資料，對(duì)楓香樹(shù)葉的原植物形態(tài)、性狀、粉末的顯微特征進(jìn)行了系統(tǒng)研究，研究結(jié)果清晰直觀、真實(shí)的顯示和反映了楓香樹(shù)葉藥材的原始形態(tài)、細(xì)胞特征，闡明了楓香樹(shù)葉藥材的鑒別要點(diǎn)，為后期楓香樹(shù)葉藥材的生藥學(xué)研究、資源開(kāi)發(fā)利用以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善提供參考依據(jù)。