達(dá)格列凈對(duì)非糖尿病慢性心力衰竭兔的心功能及心肌重構(gòu)影響

陳學(xué)鋒，趙明，張瑜，郝自強(qiáng)，白文樓，孟存良，齊曉勇△

心力衰竭（HF）是多種原因引起心臟結(jié)構(gòu)和（或）功能的異常改變，進(jìn)而導(dǎo)致心室收縮和（或）舒張功能發(fā)生障礙。盡管HF 的治療近年來(lái)取得較大進(jìn)展，但患者病死率和再住院率仍較高［1］。鈉葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2（SGLT2）抑制劑（SGLT2i）是一種新型降糖藥物，通過(guò)抑制腎臟近曲小管介導(dǎo)葡萄糖重吸收的SGLT2 而促進(jìn)葡萄糖從尿液中排出。關(guān)于SGLT2i 心血管安全性的研究顯示SGLT2i 可以減少主要不良心血管事件和降低心力衰竭再住院風(fēng)險(xiǎn)，且此獲益的出現(xiàn)時(shí)間明顯早于降糖作用所致獲益的時(shí)間，表明其機(jī)制可能并非通過(guò)降糖所致［2-4］。對(duì)非糖尿病患者亞組的分析結(jié)果顯示，SGLT2i達(dá)格列凈仍可降低主要心血管事件包括因心血管疾病死亡、心力衰竭再住院及心力衰竭急性發(fā)作的發(fā)生率［5］。鑒于上述研究結(jié)果，2021年歐洲急性和慢性心力衰竭診斷和治療指南將達(dá)格列凈和恩格列凈列為射血分?jǐn)?shù)降低的HF 患者治療的Ⅰ類推薦以降低心力衰竭患者住院和死亡的風(fēng)險(xiǎn)［6］。然而，目前有關(guān)其改善心力衰竭患者預(yù)后的主要機(jī)制方面的研究較少，尚未達(dá)成共識(shí)。本研究采用升主動(dòng)脈縮窄法建立非糖尿病慢性心力衰竭兔模型，探討達(dá)格列凈對(duì)其心功能的影響及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 18 只6 月齡普通級(jí)健康成年雄性新西蘭大白兔，體質(zhì)量3.0～3.5 kg，購(gòu)自河北省望都縣彤輝養(yǎng)殖有限公司，許可證號(hào)：SCXK（冀）2016-002。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于河北省人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心動(dòng)物室單籠飼養(yǎng)，室溫（17±3）℃，攝水?dāng)z食不限。

1.2 主要試劑和儀器 戊巴比妥鈉、4%多聚甲醛購(gòu)自北京索萊寶公司；生理鹽水購(gòu)自石家莊四藥有限公司；青霉素鈉購(gòu)自華北制藥有限公司，達(dá)格列凈（10 mg/片）購(gòu)自阿斯利康制藥有限公司；兔N端前腦鈉肽（NT-proBNP）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)自江蘇晶美生物科技有限公司；膠原纖維（Collagen）Ⅰ、CollagenⅢ抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。EPIQ7 超聲診斷系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Philip 公司，光學(xué)顯微鏡購(gòu)自日本尼康公司。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組及模型建立 將18只大白兔按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、心力衰竭組和達(dá)格列凈組，每組6只。兔經(jīng)3%戊巴比妥鈉（1 mL/kg）麻醉后仰臥位固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，取胸骨左緣第二、三肋間，逐層切開胸部組織，暴露升主動(dòng)脈。假手術(shù)組只開胸不手術(shù)，心力衰竭組和達(dá)格列凈組開胸后，以絲線標(biāo)記并使用游標(biāo)卡尺精確測(cè)量升主動(dòng)脈周長(zhǎng)，在距離升主動(dòng)脈根部以遠(yuǎn)1.0 cm處結(jié)扎升主動(dòng)脈，使縮窄后周長(zhǎng)為原周長(zhǎng)的60%。逐層關(guān)胸至皮膚。術(shù)后常規(guī)青霉素80萬(wàn)單位肌內(nèi)注射3 d。術(shù)后12周行超聲心動(dòng)圖檢查，以左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）≤0.40 視為心力衰竭模型制作成功。術(shù)后13周，達(dá)格列凈組滿足上述心力衰竭標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)強(qiáng)飼法予以達(dá)格列凈1 mg/（kg·d），假手術(shù)組及心力衰竭組給予等量生理鹽水經(jīng)口強(qiáng)飼，共干預(yù)10 周。對(duì)各組動(dòng)物的精神、活動(dòng)及進(jìn)食等一般情況進(jìn)行觀察。

1.3.2 超聲心動(dòng)圖檢查 分別于術(shù)前、術(shù)后12周、干預(yù)10周后對(duì)各組動(dòng)物行超聲心動(dòng)圖檢查，測(cè)定室間隔厚度（IVS）、左心室舒張末內(nèi)徑（LVEDD）、左心室后壁厚度（LVPW）、左心室收縮末內(nèi)徑（LVESD）和LVEF。以上各測(cè)量值均取連續(xù)3次測(cè)量的平均值。

1.3.3 血液學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 藥物干預(yù)10周后，從各組兔耳緣靜脈取血3～4 mL，使用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)兔血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量。使用生化分析儀檢測(cè)總蛋白、白蛋白、鉀、鈉、隨機(jī)血糖、血漿滲透壓水平。分別于術(shù)后12周及藥物干預(yù)10 周后，經(jīng)耳緣靜脈取血，使用ELISA 法測(cè)定各組NTproBNP水平。

1.3.4 體質(zhì)量和心臟質(zhì)量測(cè)量 藥物干預(yù)10周后，測(cè)量各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體質(zhì)量。處死動(dòng)物后取出心臟精確測(cè)量全心質(zhì)量，剪去左心房、右心房及右心室后測(cè)量左心室質(zhì)量，并計(jì)算左心室質(zhì)量/體質(zhì)量比值。

1.3.5 病理學(xué)染色 實(shí)驗(yàn)?zāi)┨幩缹?shí)驗(yàn)動(dòng)物，取左心室前壁近心尖處心肌組織于4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，生物切片機(jī)切取4μm 厚組織切片，行HE 染色觀察心肌細(xì)胞形態(tài)；Masson染色觀察心肌纖維化程度，染色結(jié)果中膠原纖維呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、紅細(xì)胞呈紅色；免疫組化染色觀察心肌組織CollagenⅠ、CollagenⅢ表達(dá)水平，其蛋白陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物呈棕黃色顆粒。應(yīng)用Image J 軟件分析圖像，計(jì)算膠原組織分?jǐn)?shù)（心肌纖維化面積/心肌組織面積×100%）以及CollagenⅠ或CollagenⅢ陽(yáng)性面積百分比（CollagenⅠ或CollagenⅢ陽(yáng)性面積/心肌組織面積×100%）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用±s表示，方差齊時(shí)多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用Tukey檢驗(yàn)；若方差不齊，多組間比較采用Welch 方差分析，組間多重比較使用Games-Howell 檢驗(yàn)，組內(nèi)干預(yù)前后NT-proBNP 比較使用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組一般情況 假手術(shù)組6只大白兔均存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；心力衰竭組和達(dá)格列凈組術(shù)中、術(shù)后無(wú)死亡。術(shù)后12周經(jīng)超聲心動(dòng)圖篩選，心力衰竭組和達(dá)格列靜組各5只符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，并存活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。所有動(dòng)物術(shù)后均出現(xiàn)食欲減退、精神萎靡、活動(dòng)減少、呼吸急促；假手術(shù)組術(shù)后3 d上述癥狀逐漸恢復(fù)；心力衰竭組從術(shù)后3 d始上述癥狀亦有所好轉(zhuǎn)，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；心力衰竭組的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況均較假手術(shù)組差，達(dá)格列凈組一般情況介于心力衰竭組和假手術(shù)組之間。

2.2 各組超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果比較 各組術(shù)前IVS、LVEDD、LVPW、LVESD、LVEF 比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后12 周，與假手術(shù)組相比，心力衰竭組和達(dá)格列凈組LVESD 增加，LVEF 降低（P＜0.05），而心力衰竭組和達(dá)格列凈組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥物干預(yù)10 周，達(dá)格列凈組LVEF 較心力衰竭組明顯升高，且較術(shù)后12 周明顯升高（t=7.140，P＜0.05）。見表1。

2.3 各組血液學(xué)指標(biāo)比較 3 組間白細(xì)胞計(jì)數(shù)、總蛋白、白蛋白、血清鉀、鈉、隨機(jī)血糖、血漿滲透壓比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與假手術(shù)組相比，心力衰竭組及達(dá)格列凈組血紅蛋白降低（P＜0.01），達(dá)格列凈組與心力衰竭組血紅蛋白差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

Tab.1 Comparison of cardiac ultrasound results before operation,12 weeks after operation and 10 weeks after drug intervention between the three groups表1 各組術(shù)前、術(shù)后12周及藥物干預(yù)10周心臟超聲結(jié)果比較 （±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較；b與心力衰竭組比較；c與術(shù)后12周比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F n 6 5 5術(shù)前IVS（mm）2.83±0.09 3.02±0.29 2.89±0.14 1.317 LVEDD（mm）13.05±1.27 12.88±0.85 13.19±3.12 0.032 LVPW（mm）2.77±0.19 3.02±0.17 2.71±0.28 2.840 LVESD（mm）7.97±0.85 7.88±0.51 8.33±2.29 0.149 LVEF 0.73±0.04 0.74±0.02 0.71±0.05 0.427組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F術(shù)后12周IVS（mm）2.81±0.11 2.97±0.17 3.09±0.21 7.436 LVEDD（mm）13.18±1.33 13.16±0.78 12.70±1.20 0.295 LVPW（mm）2.79±0.09 2.91±0.24 2.84±0.06 7.459 LVESD（mm）8.29±0.87 11.02±0.61a 10.62±0.99a 17.235＊＊LVEF 0.71±0.02 0.38±0.01a 0.38±0.01a 1 326.354＊＊組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F藥物干預(yù)10周IVS（mm）2.92±0.17 2.92±0.17 2.79±0.30 0.594 LVEDD（mm）12.07±1.16 13.24±1.81 12.86±2.84 0.496 LVPW（mm）2.79±0.09 2.79±0.10 2.71±0.23 7.578 LVESD（mm）7.65±0.71 11.16±1.54a 9.55±2.57 5.713＊LVEF 0.71±0.03 0.37±0.02a 0.56±0.06abc 120.097＊＊

Tab.2 Comparison of blood indexes between the three groups表2 各組血液學(xué)指標(biāo)比較 （±s）

Tab.2 Comparison of blood indexes between the three groups表2 各組血液學(xué)指標(biāo)比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F n 6 5 5白細(xì)胞計(jì)數(shù)（×109/L）8.59±1.59 8.86±1.96 8.92±1.16 0.069血紅蛋白（g/L）129.83±4.71 116.40±7.44a 116.80±2.17a 12.174＊＊總蛋白（g/L）60.18±7.65 61.62±4.51 58.94±4.50 0.257白蛋白（g/L）38.02±3.41 39.96±2.25 38.32±1.89 0.804組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F鉀（mmol/L）4.62±0.46 4.14±0.34 4.54±0.25 2.520鈉（mmol/L）143.17±1.47 143.00±1.58 141.60±1.14 1.927隨機(jī)血糖（mmol/L）6.13±0.50 6.08±0.28 6.38±0.42 0.757血漿滲透壓（mOsm/L）305.81±3.58 307.88±3.38 304.09±5.10 1.084

2.4 各組NT-proBNP 比較 術(shù)后12 周，心力衰竭組和達(dá)格列凈組NT-proBNP 水平較假手術(shù)組均明顯升高（P＜0.05），而達(dá)格列凈組和心力衰竭組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥物干預(yù)10周，心力衰竭組NTproBNP 水平較術(shù)后12 周升高，達(dá)格列凈組NTproBNP 水平較術(shù)后12 周下降，但仍高于假手術(shù)組，而較心力衰竭組則明顯降低（P＜0.05）。見表3。

Tab.3 Comparison of NT-proBNP levels 12 weeks after operation and 10 weeks after drug intervention between the three groups表3 各組術(shù)后12周及藥物干預(yù)10周NT-proBNP水平比較 （ng/L，±s）

Tab.3 Comparison of NT-proBNP levels 12 weeks after operation and 10 weeks after drug intervention between the three groups表3 各組術(shù)后12周及藥物干預(yù)10周NT-proBNP水平比較 （ng/L，±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a 與假手術(shù)組比較，b 與心力衰竭組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F n6 5 5術(shù)后12周99.88±12.80 366.97±42.66a 379.56±59.55a 81.864＊＊藥物干預(yù)10周104.40±9.72 449.70±21.26a 298.55±14.31ab 692.032＊＊t 0.900 3.824＊2.887＊

2.5 各組體質(zhì)量及心臟質(zhì)量比較 心力衰竭組較假手術(shù)組心臟外形增大、變形，達(dá)格列凈組心臟外形較假手術(shù)組增大，但明顯小于心力衰竭組，見圖1。各組體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。心力衰竭組的全心質(zhì)量、左心室質(zhì)量以及左心室質(zhì)量/體質(zhì)量較假手術(shù)組明顯升高（P＜0.05），而達(dá)格列凈組上述指標(biāo)均低于心力衰竭組（P＜0.05），與假手術(shù)組相比，達(dá)格列凈組全心質(zhì)量、左心室質(zhì)量以及左心室質(zhì)量/體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表4。

Tab.4 Comparison of body weight and heart weight between the three groups表4 各組體質(zhì)量及心臟質(zhì)量比較 （±s）

Tab.4 Comparison of body weight and heart weight between the three groups表4 各組體質(zhì)量及心臟質(zhì)量比較 （±s）

＊＊P＜0.01；a與假手術(shù)組比較，b與心力衰竭組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組心力衰竭組達(dá)格列凈組F n 6 5 5體質(zhì)量（kg）3.58±0.17 3.49±0.23 3.45±0.19 0.639全心質(zhì)量（g）7.78±0.83 12.31±1.21a 8.31±0.26b 6.700＊＊左心室質(zhì)量（g）6.05±0.62 9.74±1.17a 6.56±0.27b 7.069＊＊左心室質(zhì)量/體質(zhì)量（g/kg）1.69±0.22 2.79±0.39a 1.84±0.07b 6.621＊＊

2.6 各組心臟病理染色結(jié)果 HE染色示假手術(shù)組心肌纖維排列有序，細(xì)胞形態(tài)一致，胞質(zhì)染色均勻；而心力衰竭組心肌纖維粗大，心肌細(xì)胞排列不整齊，心肌細(xì)胞間連接松散；與假手術(shù)組比較，達(dá)格列凈組心肌細(xì)胞增粗，但較心力衰竭組明顯改善，見圖2。Masson 染色示假手術(shù)組心肌組織膠原纖維含量較少，而心力衰竭組膠原纖維明顯增多，達(dá)格列凈組心肌組織膠原纖維較心力衰竭組明顯減少，見圖3。心力衰竭組膠原組織分?jǐn)?shù)高于假手術(shù)組，而達(dá)格列凈組膠原組織分?jǐn)?shù)則較心力衰竭組明顯降低（P＜0.05），見表5。免疫組化染色顯示，與假手術(shù)組相比，心力衰竭組心肌組織中CollagenⅠ及CollagenⅢ陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物明顯增加，達(dá)格列凈組CollagenⅠ及CollagenⅢ陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物比心力衰竭組明顯減少，見圖4、5。心力衰竭組CollagenⅠ、CollagenⅢ陽(yáng)性面積百分比均明顯高于假手術(shù)組，而達(dá)格列凈組心肌組織CollagenⅠ、CollagenⅢ陽(yáng)性面積百分比較心力衰竭組降低（P＜0.05），見表5。

Fig.1 Cardiac shape of each group圖1 各組心臟外形

Fig.2 HE staining of myocardial tissue in each group(×200)圖2 各組心肌組織HE染色（×200）

Fig.3 Masson staining of myocardial tissue in each group(×200)圖3 各組心肌組織Masson染色（×200）

Fig.4 Collagen Ⅰimmunohistochemical staining of myocardial tissue in each group(×200)圖4 各組心肌組織CollagenⅠ免疫組化染色（×200）

Fig.5 Collagen Ⅲimmunohistochemical staining of myocardial tissue in each group(×200)圖5 各組心肌組織CollagenⅢ免疫組化染色（×200）

Tab.5 Comparison of myocardial collagen tissue fraction and positive area percentages of Collagen Ⅰ,Collagen Ⅲbetween the three groups表5 各組心肌膠原組織分?jǐn)?shù)和CollagenⅠ、CollagenⅢ陽(yáng)性面積百分比比較

3 討論

目前有研究［7-8］認(rèn)為，SGLT2i保護(hù)心臟的機(jī)制可能與降低血糖和體質(zhì)量、減輕炎癥反應(yīng)、改善貧血、改善心臟能量代謝等因素相關(guān)。但具體機(jī)制并未達(dá)成一致。SGLT2i 恩格列凈可通過(guò)抑制糖尿病小鼠心肌纖維化而改善心臟結(jié)構(gòu)和功能，其機(jī)制可能與激活核轉(zhuǎn)錄因子E2/抗氧化反應(yīng)原件（Nrf2/ARE）通路及抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGFβ）/SMAD 通路有關(guān)［9］。Santos-Gallego 等［10］研究顯示，恩格列凈可以促使心肌從主要利用葡萄糖供能轉(zhuǎn)向主要利用酮體、游離脂肪酸和支鏈氨基酸以增加心肌腺苷三磷酸含量，改變心肌能量代謝，改善非糖尿病豬缺血性心力衰竭的左心室重構(gòu)，增強(qiáng)左心室收縮功能。Lee等［11］使用球囊擴(kuò)張導(dǎo)管對(duì)高膽固醇飼料喂養(yǎng)的非糖尿病新西蘭大白兔腹主動(dòng)脈擴(kuò)張并損傷后，使用達(dá)格列凈或安慰劑干預(yù)8 周，結(jié)果顯示達(dá)格列凈可以通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)和巨噬細(xì)胞活性發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。體外研究表明，恩格列凈可以抑制心臟成纖維細(xì)胞（CF）產(chǎn)生細(xì)胞基質(zhì)CollagenⅠ，并抑制α-平滑肌肌動(dòng)蛋白、組織生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等促纖維化標(biāo)志物的表達(dá)［12］。而目前有關(guān)SGLT2i對(duì)心肌重構(gòu)的研究較少。

心肌重構(gòu)在慢性心力衰竭的進(jìn)展中起著非常重要的作用并且與預(yù)后密切相關(guān)［13］。心肌重構(gòu)包括心臟幾何形狀和功能的改變，體現(xiàn)為L(zhǎng)VEF 降低和左心室體積或質(zhì)量增加［14］。心臟大小、形狀的改變可預(yù)測(cè)心力衰竭的預(yù)后并評(píng)估對(duì)治療的反應(yīng)［15-16］。左心室質(zhì)量與體質(zhì)量的比值稱為左心室質(zhì)量指數(shù)，左心室質(zhì)量指數(shù)較單純的左心室質(zhì)量更能反映心肌重構(gòu)的程度，也可預(yù)測(cè)心力衰竭的長(zhǎng)期預(yù)后［17］。本研究采用主動(dòng)脈縮窄法建立非糖尿病兔心力衰竭模型，其病理生理改變類似于高血壓性心力衰竭患者。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，心力衰竭組LVEF 降低，NT-proBNP升高，心臟外形增大、細(xì)胞連接松散，全心質(zhì)量、左心室質(zhì)量以及左心室/體質(zhì)量比值均明顯增加，使用達(dá)格列凈干預(yù)10 周，可改善動(dòng)物心力衰竭相關(guān)癥狀，提高LVEF 并降低NT-proBNP，與臨床研究結(jié)果一致［18］。進(jìn)一步研究顯示，達(dá)格列凈可減輕心臟外形增大，降低全心質(zhì)量、左心室質(zhì)量和左心室質(zhì)量指數(shù)，表明其可通過(guò)抑制心力衰竭動(dòng)物心肌重構(gòu)來(lái)改善預(yù)后。

心肌纖維化是心肌重構(gòu)的重要機(jī)制之一，其主要特征是心肌中細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的過(guò)度沉積，心肌纖維化的程度與左心室功能受損的程度密切相關(guān)［19］。心臟ECM 主要由CollagenⅠ和CollagenⅢ組成［20］。CollagenⅠ約占心肌膠原蛋白的85%，主要構(gòu)成厚纖維以負(fù)責(zé)心臟抗拉強(qiáng)度；CollagenⅢ約占總膠原蛋白的11%，其直徑相對(duì)較小，主要構(gòu)成細(xì)纖維以維持心肌的彈性［21］。CF 是產(chǎn)生ECM 的主要細(xì)胞，負(fù)責(zé)ECM的動(dòng)態(tài)平衡，然而在心臟損傷或應(yīng)激刺激下，靜止的CF 向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，表現(xiàn)出更強(qiáng)的增殖、遷移和收縮能力，且產(chǎn)生ECM 的能力顯著增強(qiáng)［22］，ECM 過(guò)度沉積，從而導(dǎo)致心肌纖維化并損傷心臟功能。心肌纖維化還可導(dǎo)致心臟代謝需要的底物和氧氣向心肌細(xì)胞的擴(kuò)散距離增大，對(duì)心肌能量供需平衡產(chǎn)生負(fù)面影響。此外，心肌纖維化形成的瘢痕組織可因絕緣而形成折返的組織學(xué)基礎(chǔ)，并誘發(fā)惡性心律失常，從而使心力衰竭的患者發(fā)生心臟性猝死［23-24］。本研究通過(guò)對(duì)心肌細(xì)胞HE 及Masson染色顯示，達(dá)格列凈可以顯著抑制心肌細(xì)胞肥大、變性，改變其排列狀態(tài)；抑制心肌膠原組織的增加，從而降低心肌間質(zhì)纖維化程度。免疫組化染色顯示，達(dá)格列凈可通過(guò)抑制心肌纖維化以及心肌中CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制心肌重構(gòu)，這可能是此類藥物減少心力衰竭患者主要不良心血管事件的機(jī)制之一。

此外，本研究同時(shí)探討了達(dá)格列凈對(duì)心力衰竭動(dòng)物模型體質(zhì)量及常見血液學(xué)指標(biāo)的影響，結(jié)果顯示達(dá)格列凈組與假手術(shù)組及心力衰竭組相比，體質(zhì)量、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、總蛋白、白蛋白、鉀、鈉、血糖、血漿滲透壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示達(dá)格列凈改善心力衰竭的機(jī)制可能與降低體質(zhì)量、降糖、利尿等因素關(guān)系不大。心力衰竭組和達(dá)格列凈組血紅蛋白降低，可能由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心力衰竭后胃腸道水腫、食欲下降所致。然而，達(dá)格列凈組和心力衰竭組相比，血紅蛋白差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示達(dá)格列凈改善心力衰竭的機(jī)制可能與糾正貧血關(guān)系不大。

綜上，本研究驗(yàn)證了達(dá)格列凈改善非糖尿病慢性心力衰竭兔心功能的作用，并發(fā)現(xiàn)達(dá)格列凈可顯著抑制心力衰竭后的心肌重構(gòu)，其機(jī)制可能與抑制心肌組織中CollagenⅠ和CollagenⅢ的表達(dá)和心肌纖維化有關(guān)。但因本研究技術(shù)條件所限，未能揭示達(dá)格列凈對(duì)心力衰竭動(dòng)物動(dòng)脈血壓變化的影響；此外，未對(duì)達(dá)格列凈抑制心肌纖維化的分子機(jī)制行深入探討。因此，達(dá)格列凈對(duì)心肌成纖維細(xì)胞活化過(guò)程中相關(guān)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及基因表達(dá)水平的影響有待今后進(jìn)一步研究。