LncRNA DANCR 靶向miR-656-3p 調(diào)控急性髓系白血病細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲

孔文燕 呂秋玲 肖 琛 （山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，濟(jì)南 250001）

急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）是一種常見的以骨髓和外周血中未分化的祖細(xì)胞累積為主要特征的血液惡性腫瘤，主要治療方法有化療和干細(xì)胞移植［1］。目前，AML 的治療取得一定進(jìn)展，但對(duì)于難治復(fù)發(fā)患者治療效果較差［2］。AML的發(fā)生、發(fā)展與基因突變和基因的異常表達(dá)有關(guān)，探究AML 患者體內(nèi)異常表達(dá)的分子及其對(duì)AML 發(fā)生發(fā)展的影響可為該疾病的治療提供新靶點(diǎn)［3］。長鏈非編碼RNA（long noncading DNA，LncRNA）可作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA與微小RNA（microRNA，miRNA）靶向結(jié)合，調(diào)控miRNA 靶基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、分化和凋亡等活動(dòng)，參與腫瘤發(fā)展進(jìn)程［4］。研究顯示，LncRNA DANCR 在化療耐藥白血病干細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，敲低其表達(dá)可降低白血病干細(xì)胞的自我更新能力，可能參與白血病的發(fā)展進(jìn)程［5］。研究顯示，LncRNA DANCR 在肝細(xì)胞癌和肺癌等腫瘤中表達(dá)升高，敲低其表達(dá)可降低腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，在腫瘤中發(fā)揮促癌基因作用［6-7］。但目前，LncRNA DANCR 對(duì)白血病細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲等表型的影響還不清楚。

Starbase 生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)顯示，LncRNA DANCR 可能與miR-656-3p 存在靶向調(diào)控關(guān)系。有報(bào)道稱，miR-656-3p 在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung conter，NSCLC）患者癌組織中的表達(dá)明顯降低，過表達(dá)miR-656-3p 對(duì)NSCLC 細(xì)胞增殖和遷移發(fā)揮抑制作用［8］。但目前，miR-656-3p 是否影響白血病細(xì)胞的表型尚不清楚。因此，本研究首先檢測(cè)了53 例AML 患者外周血和細(xì)胞系中LncRNA DANCR和miR-656-3p的表達(dá)，并觀察了LncRNA DANCR 和miR-656-3p 對(duì)AML 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及LncRNA DANCR 能否靶向miR-656-3p 發(fā)揮作用，以期為AML的治療提供新的分子靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 臨床資料 選取2017年2月至2019年10月于山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院確診的53 例AML患者為研究對(duì)象（AML 組），其中男性32 例，女性21 例，平均年齡（46.23±12.02）歲；WHO 分型M1 型7例、M2型19例、M3型13例、M4型8例、M5型6例。另選取同時(shí)期健康體檢者為對(duì)照組，其中男性30例，女性23 例，平均年齡（48.26±13.28）歲。兩組患者年齡、性別等一般資料無顯著性差異，具有可比性。

1.1.2 細(xì)胞和試劑 AML細(xì)胞系（U-937、HL-60和NB4）及骨髓基質(zhì)HS-5 細(xì)胞，上海邦景實(shí)業(yè)有限公司；RPMI1640 培養(yǎng)基、細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）、Annexin V-FITC/PI 細(xì)胞凋亡試劑盒、二喹啉甲酸（BCA）蛋白檢測(cè)試劑盒，北京索萊寶公司；胎牛血清（FBS），杭州四季青；LipofectamineTM2000 試劑盒，美國Invitrogen 公司；PCR 引物、LncRNA DANCR 小干擾RNA（si-LncRNA DANCR）、亂序無意義陰性序列（si-NC）、miR-656-3p 模擬物（mimcs）及其抑制劑（anti-miR-656-3p）、模擬對(duì)照序列（miR-NC）及miR-656-3p 抑制劑陰性序列（anti-miR-NC）、LncRNA DANCR 野生型質(zhì)粒（WT-LncRNA DANCR）和突變型質(zhì)粒（MUT-LncRNA DANCR），上海生工生物工程有限公司；RNA 抽提試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒，大連生物工程有限公司；雙熒光素酶活性檢測(cè)試劑盒，上海碧云天公司；兔抗人細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、活化的半胱天冬酶-3（cleaved-caspases-3），美國Santa Cruz公司。

1.2 方法

1.2.1 RT-qPCR 檢測(cè)外周血中LncRNA DANCR 和miR-656-3p 表達(dá) 采集對(duì)照組和AML 組患者外周血，用RNA 抽提試劑盒提取外周血中總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，行PCR 擴(kuò)增。擴(kuò)增程序?yàn)?5 ℃5 min；95 ℃10 s，58 ℃30 s，72 ℃30 s，共35 個(gè)循環(huán)。引物序列：LncRNA DANCR 正向引物5'-GC?CACTATGTAGAGGGTTTC-3'，反 向 引 物5'-ACCT?GCGCTAAGAACTGAGG-3'；miR-656-3p 正 向 引 物5'-CCGATACGAGCTGCAGAAG-3'，反 向 引 物5'-CGATACGACGCGCTCGACGAGAGG-3'；U6 正 向 引物5'-CGACTATACCCGCGCTAGCG-3'，反向引物5'-CGCTAGACGACGCTAAGAAG-3'；β-actin 正向引物5'-GTACGACTACGACGACGAG-3'，反向引物5'-CGACTACGACAACGGCTC-3'。2-ΔΔCt法 計(jì) 算LncRNA DANCR 相對(duì)于β-actin、miR-656-3p 以及β-actin、miR-656-3p相對(duì)于U6的表達(dá)水平。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) 復(fù)蘇U-937、HL-60、NB4及HS-5細(xì)胞，均用含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)生長期的各細(xì)胞均以5.0×105個(gè)/孔接種于6 孔板中，培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞。RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞中LncRNA DANCR 和miR-656-3p 表 達(dá) 水 平，方 法 同1.2.1 并選擇較HS-5 細(xì)胞表達(dá)差異最顯著的AML細(xì)胞系U-937進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 U-937 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 將U-937 細(xì)胞接種于6 孔板中（5.0×105個(gè)/孔），用LipofectamineTM2000 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，分別轉(zhuǎn)染si-LncRNA DANCR（si-LncRNA DANCR 組）、si-NC（si-NC 組）、miR-656-3p mimcs（miR-656-3p 組）、miR-NC（miR-NC 組）、共轉(zhuǎn)染si-LncRNA DANCR 與miR-656-3p 抑制劑（si-LncRNA DANCR+anti-miR-656-3p 組）、si-LncRNA DANCR 與miR-NC（si-LncRNA DANCR+anti-miR-NC 組），轉(zhuǎn)染時(shí)間為6 h。然后更換培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h 后，收集細(xì)胞，RT-qPCR法檢測(cè)細(xì)胞中LncRNA DANCR 或miR-656-3p 表達(dá)水平，驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果，并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)設(shè)置對(duì)照組（NC 組），細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，不進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作。

1.2.4 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖 將各組細(xì)胞接種于96 孔板中（2.5×104個(gè)/孔），培養(yǎng)24 h。加10 μl CCK-8試劑。再孵育2 h，于酶標(biāo)儀450 nm處測(cè)吸光度（A）值。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 將各組細(xì)胞接種于6孔板中（5.0×105個(gè)/孔），培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞，PBS 清洗2 次。利用Annexin V-FITC/PI 試劑盒，上流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

1.2.6 Transwell 檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲 調(diào)整各組細(xì)胞密度為5.0×104個(gè)/ml。遷移實(shí)驗(yàn)：Transwell 小室置于24 孔板中，上室加100 μl 細(xì)胞懸液，下室加500μl 培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h 后，棄培養(yǎng)基。經(jīng)多聚甲醛固定30 min、結(jié)晶紫染色15 min 后，顯微鏡觀察，隨機(jī)取5 個(gè)視野，計(jì)數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)：預(yù)先在Transwell上室鋪Matrigel 基質(zhì)膠，自然晾干后，加100μl 細(xì)胞懸液，后續(xù)操作同遷移實(shí)驗(yàn)。

1.2.7 Western blot 法檢測(cè)細(xì)胞中CyclinD1、Cleaved-caspase-3、MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá) 將各組細(xì)胞接種于6 孔板中（5.0×105個(gè)/孔），培養(yǎng)24 h后，收集細(xì)胞。RIPA 試劑提取細(xì)胞中總蛋白，BCA法檢測(cè)蛋白含量后，行10%SDS-PAGE 電泳，并將分離蛋白濕轉(zhuǎn)至PVDF 膜。將PVDF 膜于5%脫脂奶粉中封閉1 h 后，分別于CyclinD1（1∶500）、Cleavedcaspase-3（1∶1 000）、MMP2（1∶500）和MMP9（1∶500）一抗孵育液中，4 ℃孵育過夜。再加山羊抗兔二抗（1∶2 000），37 ℃孵育1 h。加顯影液避光顯影，凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照。

1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 將U-937細(xì)胞以5.0×105個(gè)/孔接種于6 孔板中，利用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，分別共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LncRNA DANCR與miR-656-3p mimcs或miR-NC、MUT-LncRNA DANCR與miR-656-3p mimcs 或miR-NC，轉(zhuǎn)染6 h。然后更換培養(yǎng)基，再培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞并裂解，檢測(cè)熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次。計(jì)量資料以±s表示。兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 在AML 患者外周血中LncRNA DANCR 和miR-656-3p 的表達(dá) 與對(duì)照組比較，AML 患者外周血中LncRNA DANCR 表達(dá)升高（P＜0.05），miR-656-3p表達(dá)降低（P＜0.05）。見表1。

表1 AML 患者外周血中LncRNA DANCR 和miR-656-3p的表達(dá)（xˉ±s，n=53）Tab.1 Expressions of LncRNA DANCR and miR-656-3p in peripheral blood of AML patients（xˉ±s，n=53）

2.2 AML 細(xì)胞系中LncRNA DANCR 和miR-656-3p的表達(dá) 與HS-5 細(xì)胞比較，AML 細(xì)胞系中LncRNA DANCR 表達(dá)升高（P＜0.05），miR-656-3p 表達(dá)降低（P＜0.05）。見表2。

表2 AML 細(xì) 胞 系 中LncRNA DANCR 和miR-656-3p 的表達(dá)（xˉ±s，n=9）Tab.2 Expressions of LncRNA DANCR and miR-656-3p in AML cell lines（xˉ±s，n=9）

2.3 敲減LncRNA DANCR 對(duì)AML 細(xì)胞系U-937 增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響 與NC 組或si-NC 組比較，si-LncRNA DANCR 組U-937 細(xì)胞中LncRNA DANCR 表達(dá)水平降低（P＜0.05），細(xì)胞A 值、遷移和侵襲數(shù)量及細(xì)胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05），凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。NC組與si-NC組各檢測(cè)指標(biāo)比較均無顯著差異（P＞0.05）。見圖1、表3。

表3 敲減LncRNA DANCR 對(duì)U-937細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響（xˉ±s，n=9）Tab.3 Effects of knocking down LncRNA DANCR on proliferation，apoptosis，migration and invasion of U-937 cells（xˉ±s，n=9）

圖1 敲減LncRNA DANCR后U-937細(xì)胞凋亡及CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3蛋白表達(dá)情況Fig.1 Apoptosis of U-937 cells and protein expression of CyclinD1，MMP2，MMP9 and Cleaved-caspase-3 after knocking down LncRNA DANCR

2.4 過表達(dá)miR-656-3p 對(duì)U-937 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響 與miR-NC組比較，miR-656-3p組miR-656-3p 水平升高（P＜0.05），細(xì)胞A 值、遷移和 侵 襲 數(shù) 量 降 低（P＜0.05），CyclinD1、MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），凋亡率和Cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)升高（P＜0.05）。見圖2、表4。

表4 過表達(dá)miR-656-3p對(duì)U-937細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響（xˉ±s，n=9）Tab.4 Effects of over-expressing miR-656-3p on proliferation，apoptosis，migration and invasion of U-937 cells（xˉ±s，n=9）

圖2 Western blot 檢測(cè)CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)Fig.2 Western blot detected protein expressions of CyclinD1，MMP2，MMP9 and Cleaved-caspase-3

2.5 LncRNA DANCR 靶 向 調(diào) 控miR-656-3p Star?base 靶基因預(yù)測(cè)軟件顯示，LncRNA DANCR 與miR-656-3p存在連續(xù)結(jié)合位點(diǎn)，見圖3。共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-Lnc-RNA DANCR 與miR-656-3p mimics 的細(xì)胞熒光素酶活性低于共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LncRNA DANCR 與miR-NC 的細(xì)胞（0.43±0.03vs1.00±0.10，t=16.379，P＜0.05），而共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LncRNA DANCR與miR-656-3p mimics的細(xì)胞熒光素酶活性與共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-LncRNA DANCR與miR-NC 的細(xì)胞比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.98±0.07vs1.03±0.08，t=1.411，P=0.177）。與si-NC 組 比 較，si-LncRNA DANCR 組U-937 細(xì) 胞 中miR-656-3p 表 達(dá) 水 平 升 高（1.97±0.15vs1.00±0.09，t=16.635，P＜0.05）。

圖3 miR-656-3p 和LncRNA DANCR 核苷酸序列的結(jié)合位點(diǎn)Fig.3 Binding sites of nucleotide sequence between miR-656-3p and LncRNA DANCR

2.6 敲減miR-656-3p逆轉(zhuǎn)敲減LncRNA DANCR 對(duì)U-937 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響 與si-LncRNA DANCR+anti-miR-NC 組 比 較，si-LncRNA DANCR+anti-miR-656-3p 組U-937 細(xì)胞中miR-656-3p 表達(dá)降低（P＜0.05），細(xì)胞A 值、遷移和侵襲數(shù)量及細(xì)胞中CyclinD1、MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），凋亡率和Cleaved-caspase-3 蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）。見圖4、表5。

表5 敲減miR-656-3p逆轉(zhuǎn)敲減LncRNA DANCR 對(duì)U-937細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響（xˉ±s，n=9）Tab.5 Knocking down miR-656-3p reversed effect of knocking down LncRNA DANCR on proliferation，apoptosis，migra?tion and invasion of U-937 cells（xˉ±s，n=9）

圖4 Western blot 檢測(cè)CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)Fig.4 Western blot detected protein expression of Cy?clinD1，MMP2，MMP9 and Cleaved-caspase-3

3 討論

LncRNA 是一類長度約為200 個(gè)核苷酸的小分子LncRNA，在真核生物中廣泛存在。LncRNA 參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、分化和凋亡等生命活動(dòng)，探究腫瘤中異常表達(dá)的LncRNA 及其對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響和機(jī)制，可為腫瘤的治療提供分子靶標(biāo)［9］。研究已表明，多種LncRNA 在AML 患者外周血及細(xì)胞系中異常表達(dá)，參與調(diào)控AML 細(xì)胞的增殖和凋亡等惡性表型。例如，LINC00641 在AML 標(biāo)本和細(xì)胞系中呈高表達(dá)，敲低其表達(dá)可降低AML 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲性，并促進(jìn)AML 細(xì)胞凋亡［10］；LncRNA GHET1在AML細(xì)胞系中表達(dá)升高，敲低其表達(dá)可導(dǎo)致AML細(xì)胞增殖受到抑制，而分化和凋亡加?。?1］。這些異常表達(dá)的LncRNA是AML治療的潛在分子靶點(diǎn)。

作為一種LncRNA，LncRNA DANC 參與多種腫瘤的發(fā)展進(jìn)程。研究顯示，LncRNA DANCR 在卵巢惡性組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，敲減其表達(dá)可靶向上調(diào)miR-145 進(jìn)而下調(diào)血管內(nèi)皮生長因子A 的表達(dá)抑制卵巢癌腫瘤血管生成，可能是卵巢癌的新型治療靶標(biāo)［12］；LncRNA DANCR 在宮頸癌組織和細(xì)胞中表達(dá)升高，且與宮頸癌患者不良預(yù)后密切相關(guān)，敲除其表達(dá)可靶向miR-335-5p/ROCK1 軸抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化［13］；LncRNA DANCR在鼻咽癌中表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移［14］。以上研究提示，LncRNA DANCR 在腫瘤中發(fā)揮促癌基因作用，通過采用有效措施降低其表達(dá)可延緩腫瘤發(fā)展進(jìn)程。

本研究顯示，LncRNA DANC 在AML 患者外周血和細(xì)胞系中的表達(dá)均明顯升高，提示其可能也促進(jìn)AML 的發(fā)展進(jìn)程。通過轉(zhuǎn)染LncRNA DANCR 小干擾RNA 敲減AML 細(xì)胞中其表達(dá)后，AML 細(xì)胞A值、遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)降低，而凋亡率升高，說明敲減LncRNA DANCR 可有效減弱AML 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲受多種基因分子的調(diào)控，其中CyclinD1 表達(dá)增加可加速細(xì)胞周期進(jìn)程，增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力［15］；MMP2 和MMP9 參與降解細(xì)胞外基質(zhì)，對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲起促進(jìn)作用［16］；caspase-3是caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控分子，受到上游信號(hào)調(diào)控被活化后生成Cleaved-caspase-3，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［17］。本研究顯示，敲減LncRNA DANCR 降低了AML 細(xì)胞中CyclinD1、MMP2 和MMP9 的蛋白表達(dá)，而促進(jìn)了Cleaved-caspase-3 蛋白表達(dá)，提示LncRNA DANCR 可能通過調(diào)控與增殖、凋亡、遷移和侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)來影響其臨床。

LncRNA可發(fā)揮miRNA分子海綿作用，與miRNA靶向結(jié)合并調(diào)控miRNA 靶基因的表達(dá)，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為［18］。為了進(jìn)一步探究LncRNA DANCR 影響AML 細(xì)胞惡性表型的分子機(jī)制，本研究利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)了LncRNA DANCR 可靶向結(jié)合miR-656-3p，且敲減LncRNA DANCR 促進(jìn)了AML 細(xì)胞中miR-656-3p 的表達(dá)，說明LncRNA DANCR 靶向負(fù)調(diào)控miR-656-3p。研究顯示，miR-656-3p 在鼻咽癌和肝細(xì)胞癌等腫瘤中表達(dá)降低，上調(diào)miR-656-3p 可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移等惡性表型，在腫瘤中起抑癌基因作用［19-20］。本研究顯示，AML患者外周血和細(xì)胞系中miR-656-3p呈低表達(dá)，miR-656-3p 的過表達(dá)可減弱AML 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲性，并加劇AML 細(xì)胞凋亡，說明miR-656-3p 在AML 中也發(fā)揮抑癌基因作用，可作為AML 治療的分子靶點(diǎn)。本研究還顯示，敲減miR-656-3p 可逆轉(zhuǎn)敲減LncRNA DANCR 對(duì)AML 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的抑制作用及凋亡促進(jìn)作用，提示LncRNA DANCR 可能通過靶向負(fù)調(diào)控miR-656-3p來抑制AML細(xì)胞的惡性表型。

綜上，AML 患者外周血和細(xì)胞系中LncRNA DANCR 表達(dá)升高，而miR-656-3p 表達(dá)降低；敲減LncRNA DANCR 可能通過靶向負(fù)調(diào)控miR-656-3p降低AML 細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并加劇細(xì)胞凋亡；LncRNA DANCR/miR-656-3p軸可能為AML的治療提供了新的分子靶點(diǎn)。本研究接下來將進(jìn)一步探究miR-656-3p 靶基因及下游信號(hào)通路在AML發(fā)生發(fā)展中的作用。