法薏苡仁與《中國藥典》收載的炮制品對比研究

楊煥林，王 琪，楊 明，鐘凌云，劉 博，吳云山，陸兔林，劉明貴，曾翠金，柯 瑞，徐蔥蘢，付建武*

(1.江西景德中藥股份有限公司，江西 樂平 333302；2.景德鎮(zhèn)市市場監(jiān)督管理綜合檢驗檢測中心，江西 景德鎮(zhèn) 333000；3.江西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江西 南昌 330004；4.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，廣東省中醫(yī)藥科學(xué)院，廣東 廣州 510006；5.南京中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 南京 210023)

薏苡仁，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，是禾本科植物薏米(Coixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.) Stapf)的干燥成熟種仁，性涼，味甘、淡，具有利水滲濕、健脾止瀉、除痹、排膿、解毒散結(jié)的功能[1-2]?，F(xiàn)2020年版《中國藥典》薏苡仁項下僅收載了薏苡仁和麩炒薏苡仁2個炮制品種[2]。法薏苡仁為薏苡仁采用樟幫特色炮制方法制備而成，目前僅收錄在江西、廣東、貴州等幾個省份的中藥飲片炮制規(guī)范[4-8]。法薏苡仁由薏苡仁生品經(jīng)浸制、蒸制、炒制等多種方法炮制而得，其性由涼轉(zhuǎn)微溫，更適合兒童、老人以及某些特殊病癥人群，且炮制后，法薏苡仁的利水祛濕、健脾止瀉的功效顯著優(yōu)于目前其他的薏苡仁炮制品種[3]。但法薏苡仁炮制前后質(zhì)量差異對比目前尚未見文獻報道，本研究通過比較薏苡仁、麩炒薏苡仁和法薏苡仁中甘油三油酸酯含量與特征圖譜中7個共有峰成分相對含量的差異，為體現(xiàn)薏苡仁古法炮制作用優(yōu)勢及中醫(yī)臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 儀器

液相色譜 Agilent 1260 Infinity II液相色譜儀(Agilent Technologies，Inc，CA，USA)，Agilent 1260 蒸發(fā)光散射(ELSD)檢測器(Agilent Technologies，Inc，CA，USA)，電子天平(MT104E，Sartorius，Germany)，超聲清洗儀(8510E-MT，Bransonic，BRANSON ULTRASONICS CORPORATION，USA)。

1.2 試劑與藥品

甘油三油酸酯對照品購自上海源葉生物科技有限公司(批號：S16M10I88463，純度>99%)；甲醇為HPLC級(默克股份兩合公司，4L)；水為超純水(默克密理博有限公司，ELIX超純水系統(tǒng))。

編號“10～13”樣品購于不同廠家(原藥材源于不同產(chǎn)地)，其他薏苡仁炮制品由江西景德中藥股份有限公司提供，見表1。

表1 不同薏苡仁炮制品

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Poroshell 120 SB-C8柱(4.6 mm×150 mm，2.7 μm)；流動相：甲醇；洗脫方式：等度洗脫；流速：0.3 mL/min；柱溫：30 ℃。蒸發(fā)光散射檢測器參數(shù)：漂移管溫度40 ℃，氣體壓力3.4 bar，Gain 11，F(xiàn)ilter 10 s。

2.2 對照品溶液的制備

取甘油三油酸酯對照品39.682 5 mg，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(90 W，45 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，制得每1 mL含甘油三油酸酯1.587 3 mg的對照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取樣品粉末(過三號篩)約0.2 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入二氯甲烷10 mL，稱定重量，超聲處理(90 W，45 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失重量，搖勻，離心，取上清液。重復(fù)超聲處理提取3次，合并濾液，搖勻，離心，取上清液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液，備用。

2.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液1 μL、4 μL，供試品溶液2～3 μL，注入高效液相色譜儀，測定，記錄色譜峰峰面積，用外標兩點法對數(shù)方程計算甘油三油酸酯含量，即得。

2.5 精密度試驗

按“2.1”項下色譜條件，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各2 μL，分別連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰峰面積，計算得甘油三油酸酯峰面積RSD分別為0.93%、1.29%，均小于2%。結(jié)果表明該儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

將“2.3”項下供試品溶液，在室溫條件下放置0、1、2、4、8、12 h后測定，按“2.1”項下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液2 μL進樣1次，記錄色譜峰峰面積，計算得甘油三油酸酯峰面積RSD為1.71%，小于2%。結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 線性范圍考察

精密移取上述“2.2”項下甘油三油酸酯對照品溶液適量，稀釋成6個不同濃度的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液2 μL，每個濃度的線性溶液各進樣2次，記錄色譜峰峰面積。以甘油三油酸酯濃度對數(shù)值為橫坐標(X)，相應(yīng)平均峰面積對數(shù)值(Y)為縱坐標繪制標準曲線，計算線性回歸方程，得Y=1.693 4X+4.602 4，相關(guān)系數(shù)為0.999 5。結(jié)果表明，甘油三油酸酯在0.050 1～0.401 0 mg/mL范圍內(nèi)濃度對數(shù)與峰面積對數(shù)呈良好線性關(guān)系。

2.8 重復(fù)性試驗

取法薏苡仁樣品粉末6份，每份0.2 g，精密稱定，按“2.3”項下操作制備成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別精密吸取供試品溶液2 μL，各進樣2次，記錄色譜峰峰面積，計算得法薏苡仁中甘油三油酸酯含量的RSD值為2.55%，小于3%。結(jié)果表明，本含量測定方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收試驗

取甘油三油酸酯對照品適量，精密稱定，加入適量甲醇，超聲處理(90 W，45 kHz)使溶解，加甲醇定容，制成每mL含甘油三油酸酯0.5 mg的對照品儲備液。精密吸取1 mL對照品儲備液，精密加入色譜級甲醇，渦旋3 min，混勻，制成每1 mL含甘油三油酸酯0.132 mg的對照品溶液。

精密稱取已知含量的法薏仁樣品粉末9份，每份100 mg，精密稱定，每3份為一組，每組分別按已知樣品甘油三油酸酯含量的80%、100%、120%的比例加入一定量的甘油三油酸酯對照品溶液，搖勻，余按“2.3”項下操作制備成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，各進樣2次，記錄色譜峰峰面積并計算其回收率，見表2。測得回收率均在92%～105%限度范圍內(nèi)，平均回收率為99.66%，且其RSD值為1.96%，小于2 %。結(jié)果表明此方法準確度良好。

表2 加樣回收率實驗結(jié)果

2.10 不同薏苡仁炮制品甘油三油酸酯含量測定[9]

取不同薏苡仁炮制品樣品，粉碎，過三號篩，按“2.3”項下操作制備成供試液，按“2.1”項下色譜條件，各進樣2次，記錄色譜峰峰面積并計算甘油三油酸酯含量，結(jié)果見表3。

表3 不同薏苡仁炮制品中甘油三油酸酯含量

結(jié)果表明，法薏苡仁的甘油三油酸酯含量最高；薏苡仁的甘油三油酸酯含量均大于0.50%，麩炒薏苡仁的甘油三油酸酯含量均大于0.40%，都符合2020年版《中國藥典》規(guī)定標準。

2.11 不同薏苡仁炮制品共有峰成分的相對含量測定

在同一色譜條件，比較特征圖譜下7個共有峰成分相對含量的變化，分別計算不同薏苡仁炮制品共有成分的相對含量，結(jié)果見圖1、圖2和表4。

注：A：峰1；B：峰2；C：峰3；D：峰4；E：峰5；F：峰6；G：甘油三油酸酯。圖1 不同薏苡仁炮制品共有成分

圖2 不同薏苡仁炮制品中共有峰相對含量變化

表4 7個共有峰成分的相對含量(%)

結(jié)果表明，不同薏苡仁炮制品中，峰1、峰3和峰5的相對含量變化顯著，這種變化對療效的影響值得進一步深入研究。

3 討論

3.1 不同薏苡仁炮制品甘油三油酸酯含量

薏苡仁抗腫瘤主要成分是薏苡仁油中的甘油三酯類成分，包括甘油三油酸酯、甘油三亞油酸酯、1，2-油酸-3-亞油酸甘油酯、1，2-油酸-3-棕櫚酸甘油酯等[10]，其中甘油三油酸酯為2020年版《中國藥典》中薏苡仁和麩炒薏苡仁質(zhì)量評價的指標成分[2]。

本研究結(jié)果表明，同一地區(qū)(貴州)產(chǎn)的薏苡仁藥材，甘油三油酸酯含量雖有一定的差異，但被炮制成法薏苡仁后，其檢測出的甘油三油酸酯含量差異不大，均大于1.8%，含量最高且質(zhì)量穩(wěn)定。麩炒之后，甘油三油酸酯含量變化不大，說明麩炒并不會對薏苡仁的炮制以及成分發(fā)生根本性改變。本次收集的市面上麩炒薏苡仁的甘油三油酸酯含量參差不齊，但都不超過0.9%，遠低于法薏苡仁。

3.2 不同薏苡仁炮制品共有成分的相對含量

從不同炮制品薏苡仁共有峰成分的相對含量結(jié)果分析，薏苡仁炮制成法薏苡仁后，共有成分的相對含量變化明顯，峰1、峰3的相對含量明顯升高，峰5的相對含量明顯降低，峰2、峰4、峰6和甘油三油酸酯的相對含量變化不大。法薏苡仁與麩炒薏苡仁相比，法薏苡仁的峰1和甘油三油酸酯的相對含量明顯較高。這意味著薏苡仁炮制品中峰1、峰3和峰5的相對含量發(fā)生改變可能是法薏苡仁藥效顯著增強的成分基礎(chǔ)，法薏苡仁具有更強的利水祛濕、健脾止瀉功效，則很有可能與峰1相對含量的升高有關(guān)。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，相比于生薏苡仁和麩炒薏苡仁，法薏苡仁的甘油三油酸酯含量更高，抗腫瘤效果更佳；薏苡仁炮制品中7個共有峰成分的相對含量，尤其是峰1、峰3、峰5的相對含量，可能是法薏苡仁健脾祛濕藥效顯著增強的成分基礎(chǔ)。薏苡仁炮制品中7個共有成分的檢識、以及相對含量的變化對療效的確切影響和作用機制有待于進一步深入發(fā)掘及研究。