SH-6聯(lián)合CHKA基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及侵襲的影響①

黃 靈 鄒有瑞 李琢琦 岳芳倩 馬 輝 （寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，銀川 750004）

膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤的80%［1-2］。近年來，雖然醫(yī)療技術(shù)發(fā)展迅速，但膠質(zhì)瘤治療的主要方式仍然停留在手術(shù)切除輔助放化療階段，即便是采取了先進(jìn)的綜合治療措施，患者仍然容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)、耐藥、轉(zhuǎn)移［3］。膽堿激酶α（cho?line kinase alpha，CHKA）在肯尼迪途徑中是一種將游離膽堿磷酸化為磷酸膽堿的酶［4］。膽堿是合成磷脂所必需的底物，磷脂酰膽堿是膜和底物的主要磷脂成分之一，同時(shí)也是細(xì)胞大量增殖和合成脂質(zhì)信號(hào)分子的基本底物；研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞內(nèi)磷酸膽堿的濃度明顯增高［5］。磷酸膽堿是細(xì)胞內(nèi)維持磷脂酸產(chǎn)生所必需的；磷脂酸是磷脂酶D2裂解磷脂酰膽堿產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物之一，同時(shí)也是磷脂酰肌醇3-激酶PI3K/AKT 存活信號(hào)通路的關(guān)鍵激活因子［6］。與此同時(shí)，腫瘤內(nèi)部各信號(hào)通路及各個(gè)代謝通路之間存在錯(cuò)綜復(fù)雜的相互作用。這就是臨床上在使用單一藥物抗腫瘤時(shí)，腫瘤可在較短的時(shí)間內(nèi)對(duì)藥物形成耐受的原因。正是這些錯(cuò)綜復(fù)雜的因素使得科研和抗腫瘤臨床藥物治療都變得極其困難和復(fù)雜。這些綜合性因素提示無論是在科研，還是在臨床上采用單一的藥物抗腫瘤的效果可能不理想?；诖耍狙芯客ㄟ^利用新型AKT抑制劑SH-6聯(lián)合慢病毒沉默CHKA基因在體內(nèi)外干預(yù)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞并探討影響膠質(zhì)瘤生長的作用機(jī)制，為今后膠質(zhì)瘤聯(lián)合靶向藥物治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 U87細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞庫；兔抗人CHKA、AKT、GAPDH、p-AKT、PI3K、p-PI3K 蛋白抗體購自Abcam 公司；二抗購自北京中橋生物科技公司；多聚甲醛（4%）購自上海索萊寶公司；DMEM、胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）購自Gibco 公司；胰蛋白酶、結(jié)晶紫和雙抗購自上海碧云天有限公司；二幸可寧酸（bicinchoinic acid，BCA）蛋白定量檢測試劑盒購自江蘇凱基公司；Transwell 小室購自康寧公司；基質(zhì)膠購自BD 公司；CCK-8 細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期檢測試劑盒購自同仁公司；DMSO 購自MP生物醫(yī)療公司；電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀購自Bio-Rad 公司；CHKA 沉默慢病毒及其對(duì)照組慢病毒購自北京合生基因生化技術(shù)有限公司；實(shí)驗(yàn)用裸鼠購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體質(zhì)量250～320 g，日齡21～34 d，SPF級(jí)BALB/c 雌性大鼠，許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 37 ℃水浴鍋內(nèi)迅速復(fù)蘇膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞，將凍存管經(jīng)消毒后置于超凈工作臺(tái)中，向凍存管中加入1 ml 培養(yǎng)基并離心500 r/min，5 min，棄上清。加入5 ml DMEM（含5%FBS）培養(yǎng)基后，將細(xì)胞與培養(yǎng)基混勻后轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中做“井”字形晃動(dòng)使腫瘤細(xì)胞均勻鋪于瓶內(nèi)，置于37 ℃、5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待細(xì)胞長至總體積約80%時(shí)，加入不含EDTA 胰蛋白酶消化并傳代。待傳3～5 代膠質(zhì)瘤細(xì)胞穩(wěn)定后，取適量膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染 取對(duì)數(shù)生長期的U87 細(xì)胞以2×106個(gè)/孔接種于6 孔板，培養(yǎng)24 h 貼壁后，根據(jù)慢病毒使用說明書，分別向6 孔板中加入1 ml 含20μl CHKA 沉默慢病毒及對(duì)照組慢病毒。放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12 h。更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，使用熒光顯微鏡觀察慢病毒熒光在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況；若轉(zhuǎn)染后表達(dá)慢病毒熒光的膠質(zhì)瘤細(xì)胞數(shù)占未表達(dá)細(xì)胞數(shù)的80%以上，則可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。若轉(zhuǎn)染上熒光的細(xì)胞小于80%，則需要用嘌呤霉素對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外分組 慢病毒轉(zhuǎn)染成功，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。體外實(shí)驗(yàn)分組：①Control 組：該組培養(yǎng)未感染慢病毒的膠質(zhì)瘤細(xì)胞；②shNC 組：在該組中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染有對(duì)照慢病毒的U87 細(xì)胞；③SH-6組：向該組培養(yǎng)未感染慢病毒的U87 細(xì)胞中加入SH-6 溶液（10 μmol/ml）進(jìn)行干預(yù)處理；④shCHKASH-6 組，即轉(zhuǎn)染CHKA 沉默慢病毒12 h 后向該組中加入SH-6溶液。

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分組：①DMSO 組：向該組裸鼠移植未感染慢病毒的U87 細(xì)胞100μl 后，使用DMSO 10μl對(duì)腫瘤進(jìn)行干預(yù)處理；②shNC 組：向該組裸鼠移植轉(zhuǎn)染有對(duì)照慢病毒的U87細(xì)胞100μl；③SH-6組：在該組裸鼠皮下移植未感染慢病毒的U87細(xì)胞100μl后，使用SH-6 10 μl 對(duì)腫瘤進(jìn)行干預(yù)治療；④shCHKASH-6 組：向該組裸鼠中移植有沉默慢病毒轉(zhuǎn)染的U87 細(xì)胞，同時(shí)使用SH-6 10 μl 對(duì)腫瘤進(jìn)行干預(yù)治療。其中每組各6 只裸鼠。待腫瘤長到5～10 mm3時(shí)，DMSO組只用DMSO 10μl干預(yù)處理；shNC組不予任何處理；SH-6 組及shCHKA-SH-6 組用SH-6 10 μl進(jìn)行治療，每組均干預(yù)治療3 d/次。稱量各組裸鼠體質(zhì)量及測量膠質(zhì)瘤的長徑（L）及寬徑（W），腫瘤體積（V）=（LW2）/2，經(jīng)測量后計(jì)算各組腫瘤大?。╩m3）及體質(zhì)量的平均值，繪制腫瘤在30 d 內(nèi)的生長曲線并統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.4 CCK-8 法檢測U87 細(xì)胞的增殖能力 用胰蛋白酶將貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶壁上消化使其脫落并制成單細(xì)胞懸液，用培養(yǎng)基稀釋至細(xì)胞數(shù)為3×102個(gè)/ml。向96 孔板中加入100 μl 細(xì)胞懸液，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，置于37 ℃、5%CO2濕式培養(yǎng)箱培養(yǎng)貼壁，分別在24 h、48 h、72 h 時(shí)向每孔中加入10 μl CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)2 h。使用酶標(biāo)儀檢測不同時(shí)間點(diǎn)在450 nm處的OD值進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期 用不含EDTA的胰蛋白酶消化貼壁的U87 細(xì)胞重懸成單細(xì)胞懸液，收集適量的單細(xì)胞懸液到1.5 ml EP 管內(nèi)，向每管中加入約0.5 ml 預(yù)冷染色緩沖液，重懸細(xì)胞并重復(fù)1 次。1 000 r/min 離心3～5 min。棄上清，加入0.5 ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。最后加入4 μl 的Red NucleusⅠ染色液，緩慢并充分混勻，在避光常溫條件下孵育20 min后上機(jī)檢測。

1.2.6 流式檢測細(xì)胞凋亡 用不含EDTA 的胰蛋白酶消化并收集貼壁的U87 細(xì)胞，PBS 清洗2 遍，棄上清，在冰浴條件下加入5μl Annexin V-PE 和10μl 7-AAD并輕柔混勻，上機(jī)檢測并分析。

1.2.7 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測U87 細(xì)胞侵襲能力 將基質(zhì)膠（Matrigel）按試劑盒說明以1∶8 的比例稀釋。向小室上室加入50μl稀釋過的基質(zhì)膠，置于4 ℃冰箱晾干（無菌條件）。取2×105個(gè)/ml細(xì)胞懸液200μl于小室上室，下室加入正常培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h。取出小室，用棉簽擦去小室上室中的細(xì)胞和基質(zhì)膠，多聚甲醛（40 g/L）固定30 min；0.1%結(jié)晶紫溶液染色10 min后，用顯微鏡觀察不同視野下的細(xì)胞并計(jì)數(shù)。

1.2.8 腫瘤組織免疫化學(xué)染色 第30 天時(shí)，頸椎脫臼法處死裸鼠，用無菌剪刀剪開皮膚，鑷子小心取出各組膠質(zhì)瘤組織，去除周圍脂肪并剪至適量大小，置于4%多聚甲醛中固定24 h。進(jìn)行包埋、切片、在72 ℃恒溫箱中烘烤2 h，脫蠟及抗原修復(fù)之后，封閉2 h，加入相應(yīng)的一抗并孵育2 h，加抗體增強(qiáng)液20 min 后，依次加二抗，約30 min 后，加入DAB顯色液及蘇木素常規(guī)復(fù)染后，進(jìn)行常規(guī)封片，干燥后顯微鏡下觀察。

1.2.9 Western blot 檢測相關(guān)蛋白 提取膠質(zhì)瘤細(xì)胞及腫瘤組織總蛋白，用BCA 法檢測總蛋白的濃度。以30μg/孔的上樣量進(jìn)行SDS-PAGE 電泳分離蛋白質(zhì)，將凝膠上分離的蛋白在270 mA、2 h 條件下轉(zhuǎn)至PVDF 膜上，封閉2 h。用PBST清洗3遍。加入一抗（1∶1 000）、兔抗人GAPDH 抗體（1∶5 000），4 ℃搖床上過夜；第2 天，PBST 清洗3 遍，加入相應(yīng)種屬的二抗室溫下孵育1 h；用PBST清洗后，使用ECL發(fā)光液曝光，檢測蛋白條帶的吸光度（A）值。CHKA相對(duì)表達(dá)量=ACHKA/AGAPDH。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)分析處理采用Capture 2.1、Image Lab 和GraphPad Prism 8 軟件。組間比較使用t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果以±s表示。多個(gè)樣本間比較用單因素方差分析，P<0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 聯(lián)合治療抑制U87細(xì)胞增殖能力 根據(jù)CCK-8在450 nm 處A 值可以得出，與Control 組、shNC 組、SH-6 組相比，shCHKA-SH-6 組細(xì)胞在24 h、48 h 及72 h 的增殖速度明顯降低（P<0.05），而Control 組、shNC 組、SH-6 組基本保持同步增加，組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖1。

圖1 U87細(xì)胞增殖能力變化Fig.1 Changes in proliferation ability of U87 cells

2.2 聯(lián)合治療對(duì)U87 細(xì)胞周期的影響 結(jié)果顯示各組細(xì)胞G2期細(xì)胞的占比分別為：shCHKA-SH-6 組（27.5±0.3）% 、Control 組（4.3±3.2）% 、shNC 組（9.4±0.7）%、SH-6 組（10.9±0.4）%，shCHKA-SH-6組處于G2期的細(xì)胞數(shù)量明顯增多（P<0.05），結(jié)果表明：SH-6 聯(lián)合CHKA 基因干擾表達(dá)能夠使細(xì)胞停滯在G2期并抑制細(xì)胞增殖。見圖2。

圖2 各組細(xì)胞周期占比情況及統(tǒng)計(jì)結(jié)果Fig.2 Cell cycle situation and statistical results of eachgroup

2.3 SH-6 聯(lián)合下調(diào)CHKA 促進(jìn)細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡率分別為：Control 組（1.90±0.04%）、shNC 組（4.90±0.04）%、SH-6 組（8.80±0.06）%、shCHKA-SH-6 組（12.80±0.10）%。提示SH-6 聯(lián)合下調(diào)CHKA 能誘導(dǎo)凋亡，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖3。

圖3 各組細(xì)胞凋亡結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析Fig.3 Apoptosis results and statistical analysis of each group

2.4 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力 各組穿透的細(xì)胞數(shù)分別為：shCHKA-SH-6組（449.3±17.5）個(gè)、Control 組（1 359.0±33.3）個(gè)、shNC 組（1 353.0±35.4）個(gè)、SH-6 組（877.3±21.5）個(gè)，shCHKA-SH-6 組與其他3 組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見圖4。

圖4 Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析（結(jié)晶紫染色，×100）Fig.4 Transwell experimental results and statistical analysis（Crystal violet dyeing，×100）

2.5 腫瘤體積生長情況 經(jīng)過計(jì)算各組腫瘤平均體積分別為：DMSO 組（710.2±109.7）mm3、shNC 組（722.9±112.1）mm3、SH-6 組（500.7±67.7）mm3、sh-CHKA-SH-6組（211.7±25.9）mm3。結(jié)合圖片及計(jì)算結(jié)果可知：shCHKA-SH-6 組皮下腫瘤體積明顯小于其他3 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明SH-6聯(lián)合CHKA 基因沉默在體內(nèi)能明顯抑制腫瘤的生長。見圖5、圖6。

圖5 腫瘤組織在體內(nèi)生長情況Fig.5 Growth of tumor tissue in vivo

圖6 腫瘤組織體內(nèi)生長曲線Fig.6 In vivo growth curve of tumor tissue

2.6 免疫組化檢測結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示：與DMSO 組、shNC 組、SH-6 組相比，shCHKA-SH-6 組膠質(zhì)瘤組織中CHKA、PI3K/AKT 通路中關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05），這表明SH-6聯(lián)合CHKA基因沉默能有效抑制膠質(zhì)瘤中CHKA、PI3K/AKT 信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)。另外，在SH-6 組中CHKA蛋白表達(dá)量比其他3 組高（P<0.05），這說明使用SH-6 能夠抑制PI3K/AKT 信號(hào)通路中相關(guān)蛋白表達(dá)的同時(shí)，PI3K/AKT通路中相關(guān)蛋白的降低不會(huì)反饋性地抑制CHKA的表達(dá)。見圖7。

圖7 各組CHKA、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K 免疫組化染色及統(tǒng)計(jì)情況Fig.7 CHKA，AKT，p-AKT，PI3K，p-PI3K immunohisto?chemical stainings and statistical analysis of each group

2.7 Western blot 檢測各組細(xì)胞蛋白表達(dá)情況

2.7.1 體外實(shí)驗(yàn)Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與Control組、shNC組、DMSO組、SH-6組相比，shCHKASH-6組膠質(zhì)瘤組織中CHKA、PI3K/AKT 通路中相關(guān)蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05）；在SH-6組中，PI3K/AKT 通路中相關(guān)蛋白表達(dá)量降低，而CHKA 的表達(dá)量不受通路抑制劑SH-6的影響（P>0.05）。見圖8。

圖8 CHKA 對(duì)U87 細(xì)胞PI3K/AKT 通路蛋白表達(dá)水平的影響及統(tǒng)計(jì)結(jié)果Fig.8 Effect of CHKA on expression levels of PI3K/AKT pathway proteins in U87 cells and statistical results

2.7.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：shCHKA-SH-6 組膠質(zhì)瘤組織中CHKA、PI3K/AKT 通路中關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平明顯降低（P<0.05），這與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致；在SH-6 組中，CHKA 蛋白的表達(dá)與其他蛋白相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果表明CHKA 通過能夠抑制PI3K/AKT 信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤生長、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)功能。見圖9。

圖9 腫瘤組織中CHKA、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)及統(tǒng)計(jì)情況Fig.9 Expressions and statistical analysis of CHKA，PI3K，AKT，p-PI3K and p-AKT in tumor tissues

3 討論

膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展與多種因素有關(guān)，如NOK、CMTM6、促血管生成因子等，這些綜合性因素導(dǎo)致膠質(zhì)瘤有較強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，同時(shí)也是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的主要原因［7-10］。因此，在保護(hù)正常腦組織的前提下，如何最大程度地診斷腫瘤的邊界和徹底切除膠質(zhì)瘤成為當(dāng)前研究重點(diǎn)。核磁共振（magnetic resonance imaging，MRI）是常用的診斷腦膠質(zhì)瘤的輔助檢查，但卻不能明確診斷腫瘤邊界及腫瘤邊界處腫瘤細(xì)胞代謝物的變化情況，因此MRI在腦部腫瘤的邊界具有一定的局限性。然而，多體素1H-MRS 的出現(xiàn)就彌補(bǔ)了MRI 的這一不足，它能夠無創(chuàng)性地檢測并分析膠質(zhì)瘤及腦組織之間具有差異的代謝物，利用該代謝物［如：膽堿/肌酸（Cho/Cr）］的差異來評(píng)估和明確腫瘤的邊界，該診斷能夠從分子水平上對(duì)腫瘤的邊界進(jìn)行診斷，有望成為MRI 的有力補(bǔ)充［11-14］。本課題組在前期實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)：Cho/Cr在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中明顯高于正常腦組織，因此使用多體素1H-MRS 作為輔助指導(dǎo)切除膠質(zhì)瘤可以更加有效地切除腦膠質(zhì)瘤，能夠明顯改善患者的預(yù)后和提高生活質(zhì)量［15-16］。

CHKA 是在肯尼迪代謝通路中參與膽堿代謝的第一個(gè)關(guān)鍵酶，并調(diào)節(jié)磷脂酰膽堿（PC）合成。磷脂酰膽堿是腫瘤細(xì)胞膜重要組成部分之一，主要通過該代謝途徑從頭合成，此外，膽堿代謝后生成的產(chǎn)物及催化酶本身對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長起到正反饋?zhàn)饔茫?7-18］。因此，CHKA 基因被認(rèn)為是新的癌基因產(chǎn)物。PI3K/AKT（磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶B）信號(hào)通路由磷酸化磷脂酰肌醇3羥基的脂類激酶活性PI3K 及下游AKT 組成，分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。研究表明，AKT 致癌基因的激活可促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展［19-20］。因此，AKT 被認(rèn)為是有效的藥物干預(yù)靶點(diǎn)［21］。在經(jīng)過幾十年AKT 抑制劑合成及大量的臨床試驗(yàn)，如Perifosine、GSK2110183和RX-0201進(jìn)入了Ⅰ期和Ⅱ期臨床試驗(yàn)。這些臨床試驗(yàn)證明，合成的磷脂酰肌醇磷酸酯（PIA）類似物能有效阻斷腫瘤細(xì)胞中的AKT 活性［22-23］。因此，本研究使用了最新人工合成的磷脂酰肌醇磷酸類似物（SH-6），因?yàn)镾H-6 在肌醇環(huán)的第三位缺失羥基，并且有能夠修飾的脂肪族側(cè)鏈，具有更高的代謝穩(wěn)定性。經(jīng)過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明，通過SH-6 聯(lián)合CHKA基因敲除策略能夠使CHKA 表達(dá)降低干擾AKT 的激活，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞停滯在G2期并抑制腫瘤細(xì)胞生長，增殖能力下降，凋亡增加，作為一種重要的凋亡信號(hào)通路，PI3K/AKT在抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要作用，這一機(jī)制有可能與阻止AKT 與磷脂酰肌醇結(jié)合有關(guān)［24］，但是只使用SH-6 干預(yù)膠質(zhì)瘤細(xì)胞時(shí)卻發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT信號(hào)通路中關(guān)鍵因子減少的同時(shí)CHKA卻無明顯變化，這一現(xiàn)象說明CHKA對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的調(diào)控可能是單向性的，PI3K/AKT 信號(hào)通路對(duì)CH?KA并無負(fù)反饋?zhàn)饔谩?/p>

綜上所述，CHKA 通過調(diào)控PI3K/AKT 信號(hào)通路中的關(guān)鍵信號(hào)分子在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)，從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，增加細(xì)胞凋亡等生物學(xué)功能。通過實(shí)驗(yàn)證明CHKA 與PI3K/AKT信號(hào)通路在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有相互作用。CHKA 的敲低至少能夠通過PI3K/AKT 信號(hào)通路的失活抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，這為人腦膠質(zhì)瘤的精準(zhǔn)靶向治療提供了一定的分子依據(jù)及理論基礎(chǔ)。