無菌操作在食品微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果

魏茂琪

摘要：目的 分析無菌操作在食品微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果。方法 選取本市62例肉類食品，時間2021年04月-2022年04月，用隨機(jī)數(shù)字表法平均分為對照組31例，包括16例豬肉，15例牛肉，行常規(guī)方法檢驗(yàn);觀察組31例，包括17例豬肉，14例牛肉，行無菌操作檢驗(yàn)，比較兩組檢驗(yàn)效果。結(jié)果 觀察組的豬肉、牛肉菌落總數(shù)均明顯低于對照組（P<0.05）。 結(jié)論 在食品微生物檢驗(yàn)中執(zhí)行無菌操作，能夠顯著提升檢驗(yàn)效果，具有推廣價值。

關(guān)鍵詞：無菌操作;食品;微生物檢驗(yàn)

近些年來，在食品微生物檢驗(yàn)中存在各種問題，超標(biāo)現(xiàn)象屢禁不止，尤其多發(fā)生于肉類食品，威脅到食品安全，成為當(dāng)下一種熱議話題，產(chǎn)生嚴(yán)重影響。提升食品安全質(zhì)量的關(guān)鍵在于微生物檢驗(yàn)，不同檢驗(yàn)方法取得結(jié)果各不相同，以往常應(yīng)用常規(guī)方法檢驗(yàn)，該方式缺乏規(guī)范化流程，未嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，容易致使檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。本次研究以肉類食品為對象，分析無菌操作的應(yīng)用效果。

1 資料和方法

1.1一般資料

選取本市62例肉類食品，時間2021年04月-2022年04月，樣品來源為昆明市盤龍、官渡、五華、西山四個主城區(qū)規(guī)范化農(nóng)貿(mào)市場，采取隨機(jī)抽樣的方式。用隨機(jī)數(shù)字表法平均分為對照組31例，包括16例豬肉，15例牛肉;觀察組31例，包括17例豬肉，14例牛肉。提前將乳糖、氯化鈉和磷酸氫二鉀等準(zhǔn)備好，做好標(biāo)記處理。

1.2方法

1.2.1菌落總數(shù)檢驗(yàn)方法

以無菌操作稱取25g樣品置盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器拍1min;若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，震蕩混勻，制成1：10的樣品勻液。取1mL1：10稀釋液注入含有9mL稀釋液的試管中，制備1：100稀釋液。如上法依次制備10倍系列稀釋樣品勻液。選擇2個～3個適宜的稀釋度各吸取1mL稀釋液于滅菌平皿，每個稀釋度做兩個平皿。同時分別取1mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。傾注平板計數(shù)瓊脂，混勻，瓊脂凝固后倒置在恒溫培養(yǎng)箱36℃培養(yǎng)，48小時后計數(shù)（水產(chǎn)品30℃培養(yǎng)72h）。選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU的平板，按公式N=∑C/（n1+0.1n2）d計算，結(jié)果“四舍五入”后采用兩位有效數(shù)字報告。

1.2.2菌落總數(shù)計算公式

若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按以下公式計算：N=∑C/（n1+0.1n2）d

式中：N——樣品中菌落數(shù);

∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和;

n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù);

n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù);

d——稀釋因子（第一稀釋度）

1.2.3測定菌落總數(shù)

以《GB4789.2-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定》為標(biāo)準(zhǔn)，對菌落總數(shù)述展開測定，對樣本進(jìn)行稀釋，倍數(shù)為10倍，選擇2個～3個適宜的稀釋度各吸取1mL稀釋液于滅菌平皿，每個稀釋度做兩個平皿，設(shè)置空白對照和陰性對照。

1.2.4操作方法

對照組行常規(guī)方法檢驗(yàn)，按照流程展開各項(xiàng)操作，未遵循無菌理念。觀察組行無菌操作檢驗(yàn)：①在無菌室內(nèi)，將操作時間和緩沖時間設(shè)置好，確保潔凈度達(dá)到1萬級，定時清掃室內(nèi)衛(wèi)生，保證干凈整潔，不存在雜物。②采取新潔爾滅溶液，濃度為0.1%，酒精，濃度為75%，展開消毒處理。③對于各項(xiàng)儀器，需嚴(yán)格展開高壓滅菌處理，嚴(yán)密包扎。④在檢驗(yàn)過程中，應(yīng)用陰性作為對照，在進(jìn)行接種時，先采取火焰灼燒方式，展開滅菌處理。⑤選取新潔爾滅溶液，濃度為5%，對吸管和含有菌液的試管進(jìn)行浸泡，時間為24h，然后沖洗。⑥待營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基融化，并且經(jīng)過冷卻處理達(dá)到56℃ 后，注入，含量為15毫升，等到其凝固后，放置于培養(yǎng)箱中，溫度為36℃，過48h后，將其取出，確保無菌。展開空白對照，選取空氣稀釋液1毫升，將其注入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，對器皿發(fā)揮出的消毒功效展開評價，判斷無菌環(huán)境以及存儲方式是否符合要求，同時空白對照，能夠?qū)o菌技術(shù)實(shí)施方式提供參考。

1.3觀察指標(biāo)

評價兩組菌落總數(shù)檢出情況：觀察兩組檢出豬肉和牛肉的菌落總數(shù)，展開組間對比。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

錄入SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件中處理。

2 結(jié)果

觀察組的豬肉、牛肉菌落總數(shù)均明顯低于對照組，P<0.05。詳見表1。

3 討論

在無菌環(huán)境下，對取得的食品樣本展開微生物檢驗(yàn)，采取無菌設(shè)備，分析食品中微生物情況，落實(shí)細(xì)胞接種技術(shù)，促使檢驗(yàn)水平提高，避免檢驗(yàn)環(huán)境或者食品樣本中涌入外界微生物。

針對環(huán)境，需要確保操作環(huán)境潔凈且無菌，定時對實(shí)驗(yàn)室展開消殺處理，確保無菌防塵，避免樣本受到污染。檢驗(yàn)員進(jìn)入室內(nèi)后，需要少說話、少走動，嚴(yán)格遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，執(zhí)行無菌操作。針對檢驗(yàn)員，其需要先將無菌鞋服穿戴好，然后進(jìn)入室內(nèi)，對手部展開消毒處理，不能將未經(jīng)過消毒處理的任何事物帶到室內(nèi)。在對食品進(jìn)行采集時，需要和樣本保持距離，預(yù)防自身攜帶的微生物會對樣本產(chǎn)生污染。另外，檢驗(yàn)員需要確保動作準(zhǔn)確、快速，預(yù)防樣本在空氣中長久暴露，避免雜菌感染。在進(jìn)行檢驗(yàn)前，需要應(yīng)用高壓滅菌、乙醇擦拭等方法，消毒滅菌平板、樣本瓶、無菌檢驗(yàn)設(shè)備、試管和玻片等。將物品擺放好，按照要求將各種物品擺放好，做好維護(hù)工作，每次應(yīng)用前，消毒，引入無菌操作技術(shù)。

綜上所述，在食品微生物檢驗(yàn)中執(zhí)行無菌操作，能夠顯著提升檢驗(yàn)效果，具有推廣價值。

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