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    新冠病毒檢測技術分析研究

    2022-07-07 21:16:09姚文娟
    錦州醫(yī)科大學報 2022年4期
    關鍵詞:新冠病毒檢測技術研究

    姚文娟

    【摘要】新型嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2(SARS-CoV-2)感染人體后引起新型冠狀病毒肺炎(COVID-19),目前在全球大范圍流行,對人類健康造成巨大的威脅。因為該病毒是RNA正鏈病毒,在傳播過程非常容易變異,目前流行的奧密克戎突變株,大多是無癥狀感染者,具有傳播隱秘的特點,因此找到快速,準確,高效診斷該病毒的檢測手段非常重要。本文就目前新冠病毒檢測技術進行匯總分析,旨在為保障公共衛(wèi)生安全,預防和控制感染傳播提供診斷支持與幫助。

    【關鍵詞】新冠病毒;檢測技術;研究

    【中圖分類號】R51 【文獻標識碼】A 【文章編號】2026-5328(2022)04--01

    新型嚴重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2(SARS-CoV-2)從2019年流行開后,一直以非??斓乃俣葌鞑ィ瑥淖畛醯囊吧筒《静粩嗤蛔冞M化成現(xiàn)在的奧密克戎突變株,目前全世界累計感染人數520405719人,現(xiàn)有確診人數22282379人,最近流行的奧密克戎突變株,傳播力度強,無癥狀感染者居多。想要快速控制疫情的傳播,需要找到快速,準確,高效診斷該病毒的檢測手段。目前檢測新冠病毒的方法有逆轉錄-聚合酶鏈反應法(RT-PCR)達到擴增病原體的核酸(RNA),檢測病毒的蛋白即抗原檢測,檢測病毒感染后產生的抗體即抗體檢測[1],本文就目前新冠病毒檢測技術進行匯總分析,旨在為保障公共衛(wèi)生安全,預防和控制感染傳播提供診斷支持與幫助。

    1. 核酸檢測

    隨著SARS-CoV-2基因組測序解析工作的完成,解碼該病毒序列結構,此病毒具有大概29000個堿基,12個個蛋白編碼區(qū)/開放讀碼框(ORF),開放閱讀框ORF 1ab 與SARS病毒有著明顯的不同,而且這個區(qū)域相對保守,變異性較小,因此成為檢測SARS-CoV-2的一個生物靶標[2]。此外,N和E蛋白的基因也能作為檢測的序列。目前常用的檢測技術有實時熒光逆轉錄PCR 法,國內使用該技術一般會同時檢測ORF1ab 基因和N 基因,這個檢測技術具有檢測速度較快、成本相對低廉的特點,不過需要設計出靈敏度好、特異性強的PCR 引物和熒光探針來提高擴增效率,減少假陽性率出現(xiàn),常用的RT-PCR方法,提取23分鐘,擴增90分鐘;此外還有恒溫擴增-實時熒光法(RT-LAMP),該技術具有靈敏度高,反應速度快的特點,很適合在邊境口岸進行快速檢測;RNA捕獲探針法,這種方法檢測病毒的靈敏度和特異性都很強,實現(xiàn)高通量檢測,排除人為誤差。

    2. 抗原檢測

    SARS-CoV-2冠狀病毒是β屬含有包膜的單個正義鏈RNA病毒,大小為直徑60 ~140 nm,呈現(xiàn)為圓形或橢圓形的顆粒,病毒的包膜蛋白能夠向四周延伸的凸起,所以像刺突一樣,因此也稱為冠狀病毒。SARS-CoV-2冠狀病毒的構成主要是以下幾個蛋白:核衣殼蛋白( nucleocapsid protein ,N),刺突表面糖蛋白(spike protein ,S),包膜蛋白(envelope protein,E),基質蛋白( matrix protein , M),其中S蛋白上的RBD受體能夠和人體的ACE2受體結合侵入細胞,因為S蛋白位于病毒表面,容易被免疫系統(tǒng)識別,N蛋白在包裝病毒基因組RNA,在病毒復制、組裝、釋放和干擾宿主細胞的過程中有著重要的作用[3],所以這兩種蛋白常作為檢測靶標。SARS-CoV-2抗原檢測能夠在大規(guī)模篩查中起到重要作用,在RT-PCR檢測不太方便或者結果出具較慢的時候,可以快速識別感染SARS-CoV-2的患者,通過這種檢測能夠有效防止病毒傳播,對患者進行及時的治療,第九版新冠診療指南提出使用抗原檢測,抗原檢測不需要專業(yè)人士進行操作,普通人在家就能進行檢測,上海疫情期間很多居民都是采用抗原檢測進行自測,極大的提高檢測效率,減少病毒傳播的風險。目前使用最多的是膠體金免疫層析法(GICA法),該方法是基于抗原抗體的特異性結合和顯色原理,通過人源化特異性的N蛋白和S蛋白的抗體來檢測是否含有病毒抗原,目前常用的是卡條形式,通過采取鼻拭子樣品與稀釋液混合,之后用滴瓶加樣到上樣孔中,等待10~15分鐘即可出結果,通過看T線和C線來判斷結果,操作簡便,出結果快捷,成本低廉、不需要專業(yè)設備,適合大范圍篩查。不過,快速抗原檢測技術沒有RT-PCR檢測敏感,只有在病毒載量很高時,抗原檢測的靈敏度和特異性才較好??傮w來說,抗原檢測的靈敏度相對不高,即使檢測陰性也不能完全排除感染病毒的可能性,會有假陰性存在。

    3. 抗體檢測

    人體感染新冠病毒后,外膜結構蛋白就會刺激體內免疫細胞產生特異抗體,分為IgM或IgG二類抗體,IgM抗體出現(xiàn)較早,IgG抗體出現(xiàn)較晚[4]。目前常用的檢測技術有膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法、磁微粒化學發(fā)光法、上轉發(fā)光免疫層析法、量子點熒光免疫層析、化學發(fā)光法、直接化學發(fā)光法和等。使用較多的還是膠體金免疫層析法(GICA法),該方法是基于抗原抗體的特異性結合和顯色原理,通過膠體金標記的S和N蛋白結合鼠IgG,C線是羊抗鼠的IgG抗體,T線是鼠抗人的IgM和IgG抗體,通過采取靜脈全血、血清或血漿樣品與稀釋液混合,之后用滴瓶加樣到上樣孔中,等待10~15分鐘即可出結果,通過看T線和C線來判斷結果,操作簡便,出結果快捷,成本低廉、不需要專業(yè)設備。酶聯(lián)免疫法也可以檢測抗體,包括中和抗體,總抗體,總的來說,IgA的ELISA 檢測的靈敏度更高,IgG的ELISA檢測特異性更高[5]。

    4. 小結

    抗體血清學相比,核酸檢測能夠檢測到處于窗口期的患者,及早發(fā)現(xiàn)感染者,是新型冠狀病毒檢測的“金標準”,但是對檢測設備或平臺要求較高,高靈敏度的RT-PCR儀器價格昂貴,對實驗室的潔凈度和操作人員要求也較高。此外,核酸檢測耗時較長,考慮到樣本運輸、樣本積壓的情況,通常最快4小時才可以報告結果??乖蚩贵w檢測時間較短,但是特異性和靈敏度不如核酸檢測。

    參考文獻:

    [1] 王淑燕,李娜,張欣悅,等.新冠病毒 SARS-CoV-2檢測方法研究進展[J].實驗室研究與探索,2020,39(5):1-7.

    [2] 武英,周洪彬,張玨,等.新冠肺炎病毒SARS-CoV-2國內檢測方法匯總[J]. 國外醫(yī)藥抗生素分冊,2020,41(4):296-301.

    [3] 魯雙艷,吳琳,劉成宇,等. 新型冠狀病毒特異性抗體IgM、IgG的臨床意義[J].中國輸血雜志,2021,34(8):861-864.

    [4] 余靜怡,余方友. 新冠病毒實驗室常見檢測方法[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2022,32(4):635-640.

    [5] 黃紅艷. 新型冠狀病毒檢測技術專利分析[J].廣東化工,2022,49(6):177-179.

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