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    食品安全快速檢測技術(shù)的應(yīng)用和進(jìn)展

    2022-07-06 17:30:57馬志梅高春平
    食品安全導(dǎo)刊·中旬刊 2022年6期
    關(guān)鍵詞:快速檢測農(nóng)藥殘留食品安全

    馬志梅 高春平

    摘 要:食品安全快速檢測技術(shù)操作簡單、能夠快速檢測得出檢測結(jié)果,適合基層場景使用,因此得到迅速發(fā)展。本文對食品安全快速檢測技術(shù)進(jìn)行了概述和簡單評價。

    關(guān)鍵詞:食品安全;快速檢測;農(nóng)藥殘留

    Application and Advances of Food-Safety Fast Test Technology

    MA Zhimei, GAO Chunping*

    (Shijiazhuang Davidbiotech Co., Ltd., Shijiazhuang 050035, China)

    Abstract: The rapid detection technology of food safety is simple to operate and can quickly detect and obtain the detection results. It is suitable for grass-roots scenes, so it has developed rapidly. This paper summarizes and briefly evaluates the rapid detection technology of food safety.

    Keywords: food safety; fast test; pesticide residue

    食品是人們生活中最基本的必需品。隨著社會的發(fā)展,人們生活水平和健康意識的不斷提高,食品消費(fèi)也從注重數(shù)量向注重質(zhì)量和安全轉(zhuǎn)變。為了提高人們生活的幸福感,相關(guān)政府部門也在食品安全保障方面投入了大量的人力、物力和財力,大大降低了食品安全事件的發(fā)生概率。但是,商品經(jīng)濟(jì)的迅猛發(fā)展催生了種類繁多的各種商品、商品流通形式和巨大的流通量,隨之而來的是巨量的抽樣檢測樣品。而傳統(tǒng)食品安全檢測手段普遍存在檢測程序復(fù)雜、檢測周期長、成本高、檢驗(yàn)人員專業(yè)素質(zhì)要求高以及對檢測場地、環(huán)境要求高等特點(diǎn),難以適應(yīng)現(xiàn)場監(jiān)督和大批量通關(guān)檢驗(yàn)的需要。加上生鮮食品如蔬菜、水果等時效性強(qiáng),為了同時保護(hù)供應(yīng)商和消費(fèi)者雙方的利益,就需要在最短的時間內(nèi)分辨出產(chǎn)品是否合格,因此快速檢測手段應(yīng)運(yùn)而生。

    快速檢測技術(shù)由于操作簡單、攜帶方便,不需要特殊操作環(huán)境,一經(jīng)問世便迅速發(fā)展。從最初的檢測試劑盒、檢測卡、檢測箱,到今天的多功能食品檢測儀、多合一多功能機(jī)等各種新儀器、新技術(shù)不斷涌現(xiàn)并投入應(yīng)用,食品安全快速檢測技術(shù)在基層的食品經(jīng)營管理單位和監(jiān)管部門獲得廣泛應(yīng)用,這與政府部門的重視是分不開的。從2017年起,市場監(jiān)督管理部門開始對部分食品快速檢測技術(shù)組織了方法學(xué)上的認(rèn)證,解決了快速檢測技術(shù)長期以來存在的權(quán)威性問題,這將有利于規(guī)范市場上的快速檢測產(chǎn)品,并促進(jìn)整個行業(yè)的規(guī)范發(fā)展。國家市場監(jiān)督管理總局從2017年3月29日首次發(fā)布6個檢測項(xiàng)目的快速檢測方法的征求意見稿開始,至今總共發(fā)布了30項(xiàng)快速檢測方法的認(rèn)證[1]。扣除3項(xiàng)保健食品,其余27項(xiàng)都是關(guān)于食品的項(xiàng)目。對照國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法,對檢出限、靈敏度、特異性、假陰性率和假陽性率進(jìn)行了驗(yàn)證,證明了快速檢測方法的可靠性。

    本文主要討論用于檢測食品中有毒有害物質(zhì)的快速檢測技術(shù)手段,側(cè)重于分析技術(shù)成熟度高、檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,不需要專門儀器或者所需儀器小巧便攜、操作簡單以及在實(shí)際檢測中應(yīng)用廣泛的食品安全快速檢測技術(shù)。

    1 化學(xué)方法

    理化技術(shù)是最早應(yīng)用于食品安全的快速檢測技術(shù)。主要是比色卡和比色管法,將檢測需要的試劑預(yù)先固定到試紙卡或一次性檢測管中,在使用現(xiàn)場只需將樣品液滴加到試紙卡或檢測管中搖勻,通過觀察顏色變化并與相應(yīng)的色階卡進(jìn)行比較,進(jìn)而得出樣品中待檢物質(zhì)的含量值。該方法具有使用簡單、準(zhǔn)確度較高、成本低等特點(diǎn)。

    通過市場監(jiān)督管理局方法學(xué)驗(yàn)證的檢測項(xiàng)目有亞硝酸鹽、甲醛、甲醇、硼酸、食用油過氧化值和酸價、水產(chǎn)品中的組胺和面制品中的鋁等。其中,鹽酸萘乙二胺法對肉及肉制品中亞硝酸鹽的檢測中,方法檢出限為1 mg/kg,遠(yuǎn)低于食品中的允許添加量,能夠滿足日常檢測要求[2]。采用色酸法和乙酰丙酮法檢測白酒中甲醇,檢出限分別為0.4 g/L和 0.6 g/L。硼酸用姜黃素比色法,檢出限達(dá)到2.5 mg/kg。水發(fā)產(chǎn)品中的甲醛使用AHMT比色法,檢出限可以達(dá)到固體樣品的5 mg/kg和液體樣品的5 mg/L。面制品中的鋁檢出限達(dá)到25 mg/kg,食用油的過氧化值和酸價也有用比色卡法檢測的產(chǎn)品。

    2 蔬菜中農(nóng)藥殘留的快速檢測

    由于農(nóng)藥殘留速測試劑中使用了生物酶催化顏色變化,嚴(yán)格說不能歸入化學(xué)方法。農(nóng)藥殘留快速檢測的原理是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶(AChE)的活性有抑制作用,其抑制率的大小與農(nóng)藥的含量呈正相關(guān)性,與酶的活性呈負(fù)相關(guān)性。正常情況下,膽堿酯酶催化神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿水解,水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)生成黃色物質(zhì),用分光光度計測定412 nm處吸光度便可以計算膽堿酯酶的活性,并可以進(jìn)一步計算出有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的含量[3]。

    農(nóng)藥殘留快速檢測設(shè)備主要有兩種,分別是多通道農(nóng)藥殘留快速檢測儀和農(nóng)藥殘留速測卡。

    (1)農(nóng)藥殘留快速檢測儀。農(nóng)藥殘留快速檢測儀一般都有多個檢測通道,可以同時測定多個樣品。通過分別測定樣品液和對照液412 nm處3 min時的吸光度差值,來計算對膽堿酯酶的抑制率。當(dāng)測出的抑制率≥50%時,表示蔬菜中存在有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留,結(jié)果判定為陽性。反之,則判為陰性。

    (2)農(nóng)藥殘留速測卡。將蔬菜用緩沖液提取并將提取液滴加到檢測卡上,其中殘留的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥會抑制預(yù)先固定于卡上的膽堿酯酶對靛酚乙酸酯(紅色藥片)水解為乙酸與靛酚(藍(lán)色)的催化作用,從而導(dǎo)致速測卡對合時出現(xiàn)顏色深淺的不同變化。通過空白對照,對樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥是否超標(biāo)進(jìn)行定性判定。農(nóng)藥殘留速測卡使用方便,可以直接用手指捏合卡片使酶和底物接觸反應(yīng)并提供反應(yīng)時所需的溫度條件。

    農(nóng)藥殘留速測技術(shù)主要用于檢測蔬菜中的農(nóng)藥殘留,有5種農(nóng)藥得到了驗(yàn)證,分別為敵百蟲,檢出限0.1 mg/kg;丙溴磷,檢出限0.5 mg/kg;滅多威,檢出限0.2 mg/kg;克百威,檢出限0.02 mg/kg;敵敵畏,檢出限0.2 mg/kg。

    本法使用時需要注意蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄的汁液中含有對膽堿酯酶有影響的物質(zhì),容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,需要采取整株浸提的方法。另外,對一些葉綠素含量較高的蔬菜,為減少色素干擾,也可采取整株蔬菜浸提的方法。

    3 膠體金免疫層析技術(shù)

    食品安全快速檢測中的膠體金免疫層析技術(shù)利用競爭抑制法免疫層析的原理,當(dāng)待檢樣品液滴加到試紙條一端的樣本墊后,通過毛細(xì)作用側(cè)向移動,樣品中的待測物在向前移動的過程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合,抑制了抗體和NC膜檢測線上BSA偶聯(lián)物的結(jié)合。通過肉眼觀察樣品線和控制線的顏色來判斷樣品中是否含有被檢項(xiàng)目。由于該方法方便快捷、準(zhǔn)確度高,目前已在食品檢測中獲得廣泛應(yīng)用。

    膠體金免疫層析技術(shù)檢測結(jié)束后,目測判定結(jié)果需要注意以下幾點(diǎn)。①要看質(zhì)控線(C線)以確定試紙條是否有效。當(dāng)C線不顯色時,無論檢測線(T線)是否顯色,均表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效。②比較C線和T線的顏色以確定檢測結(jié)果是陰性或陽性。如果T線不出現(xiàn)或者雖然出現(xiàn)但顏色淺于C線,表示樣品中待測物含量高于方法檢出限,結(jié)果判定為陽性。如果T線顏色深于或等于C線,則表示樣品中不含待測物或其含量低于方法檢出限,判定為陰性。

    膠體金產(chǎn)品經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證的項(xiàng)目有20項(xiàng),是所有類別中最多的,包括水產(chǎn)品中的氯霉素、孔雀石綠、硝基呋喃類和地西泮;動物源性食品中的喹諾酮類、克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇[4];液體乳中的三聚氰胺和黃曲霉素M1;糧食及加工品中的嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮和伏馬毒素;谷物和咖啡類食品中的赭曲霉素A;食用油中的苯并(a)芘和黃曲霉素B1;調(diào)味品中的蘇丹紅I、羅丹明B、嗎啡和可待因等[5-7]。其中3種瘦肉精克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的檢出限均可達(dá)到0.5 μg/kg,而氯霉素的檢測限甚至達(dá)到0.1 μg/kg,同時靈敏度≥98%、特異性≥90%,假陰性率≤1%,假陽性率≤10%。

    4 熒光免疫層析法

    熒光免疫層析技術(shù)是免疫熒光技術(shù)和傳統(tǒng)免疫層析技術(shù)相結(jié)合發(fā)展出來的一種新型檢測技術(shù)。該技術(shù)在保留膠體金免疫層析技術(shù)操作簡便、檢測快速、便攜性強(qiáng)及便于現(xiàn)場使用的優(yōu)點(diǎn)外,還通過熒光微球增強(qiáng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了檢測結(jié)果的精確定量。雖然具有靈敏度高、定量檢測范圍寬、操作簡便和價格低廉的優(yōu)勢,但熒光免疫層析技術(shù)不同于膠體金免疫層析技術(shù),不能用肉眼判定檢測結(jié)果,必須使用熒光速測儀及配套附件。

    熒光定量免疫層析技術(shù)早前已在臨床醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測和農(nóng)業(yè)系統(tǒng)獲得廣泛應(yīng)用。近年來開始進(jìn)入食品快速檢測領(lǐng)域,2021年市場監(jiān)督管理局發(fā)布的驗(yàn)證方法中《食用植物油中天然辣椒素的快速檢測》就使用了熒光定量免疫層析技術(shù),其檢出限達(dá)到了0.4 μg/kg,同時靈敏度≥99%,特異性≥90%,假陰性率≤1%,假陽性率≤10%。熒光免疫層析法檢測食用油中辣椒素的應(yīng)用,使得高靈敏度的辣椒素快速檢測方法成為了可能[8]。

    5 分光光度法和拉曼光譜法

    對于能發(fā)生顏色變化,但又無法做成速測卡或速測管的檢測項(xiàng)目,則可以使用分光光度法進(jìn)行快速檢測。分光光度法快速檢測水發(fā)產(chǎn)品中的甲醛,已經(jīng)過了方法學(xué)驗(yàn)證。

    拉曼光譜法雖然成功應(yīng)用于液體乳中三聚氰胺的快速檢測,總體來說使用范圍有限。

    6 未來有望獲得較大發(fā)展的新技術(shù)

    食品安全快速檢測技術(shù)的未來發(fā)展,無非是更高的檢測精確度和更簡單便捷的使用操作兩大方向。未來有望獲得較大發(fā)展的主要有如下兩種技術(shù)。

    (1)熒光定量免疫層析技術(shù)。熒光定量免疫層析技術(shù)在傳統(tǒng)免疫層析技術(shù)的基礎(chǔ)上引入熒光微球增強(qiáng)技術(shù),使得該技術(shù)不僅具有快速檢測技術(shù)的便捷快速、成本低廉,同時還實(shí)現(xiàn)了檢測結(jié)果的精確定量。在定量檢測方面已接近化學(xué)發(fā)光法,成本大幅降低,同時兼具快速檢測技術(shù)和定量檢測技術(shù)的優(yōu)勢,已經(jīng)有個別項(xiàng)目通過了方法學(xué)的驗(yàn)證,未來勢必會得到更廣泛的應(yīng)用。

    (2)環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(Loop-Mediated Isothermal?Amplification,LAMP)。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)是一種新型的核酸擴(kuò)增技術(shù),與常規(guī)的PCR核酸擴(kuò)增技術(shù)相比,該技術(shù)不需要PCR儀復(fù)雜的程序化溫度循環(huán)控制,不需要電泳和紫外來觀測結(jié)果,只要保持60~65 ℃恒溫、15~60 min即可實(shí)現(xiàn)109~1010倍的擴(kuò)增。在核酸擴(kuò)增過程中快速地產(chǎn)生大量的白色焦磷酸鎂沉淀,憑肉眼就能判別是否擴(kuò)增。但針對靶基因的6個區(qū)域,LAMP需要設(shè)計4種特異性引物,而常規(guī)PCR只需要2條引物。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)成本低、耗時短、操作簡單,因此有著廣泛的應(yīng)用優(yōu)勢。

    環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)已經(jīng)在出入境系統(tǒng)用于轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的檢測,隨著試劑的廣泛國產(chǎn)化、氣溶膠問題得以妥善解決,未來有望普及到食品安全快速檢測及其他領(lǐng)域[9-10]。

    參考文獻(xiàn)

    [1]國家市場監(jiān)督管理總局食品安全抽檢監(jiān)測司.食品快速檢測方法數(shù)據(jù)庫[EB/OL].(2017-05-16)[2022-04-20].https://www.samr.gov.cn/spcjs/ksjcff/.

    [2]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定:GB 5009.33—2016[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

    [3]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.蔬菜和水果中有機(jī)磷?有機(jī)氯?擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定:NY/T 761—2008[S].北京:農(nóng)業(yè)出版社,2008.

    [4]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法:GB/T 22286—2008[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版,2008.

    [5]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定:GB/T 22338—2008[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版,2008.

    [6]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定:GB 5009.22—2016[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版,2016.

    [7]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.出口植物油中黃曲霉毒素B1?、B2、?G1、?G2的檢測-免疫親和柱凈化高效液相色譜法:SN/T 3868—2014[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014.

    [8]國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食用油脂中辣椒素的測定:BJS 201801[EB/OL].(2018-02-24)[2022-04-20].http://down.foodmate.net/standard/sort/9/103569.html.

    [9]陳金松,黃叢林,張秀海,等.環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測含有CaMV35S的轉(zhuǎn)基因玉米[J].華北農(nóng)學(xué)報,2011,26(4):8-14.

    [10]冀國楨,李剛,趙建寧,等.環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)在轉(zhuǎn)基因成分檢測中的應(yīng)用[J].食品科學(xué),2016,37(11):255-261.

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