淺談化學(xué)發(fā)光免疫分析方法與應(yīng)用進展

柳暉

[摘 要]隨著社會技術(shù)的不斷進步，在臨床、環(huán)境、食品、藥物檢測等領(lǐng)域不斷地被運用新技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法因為其具有選擇性良好、靈敏度較高、分析速度較快而且設(shè)備簡單等特點被廣泛的應(yīng)用。在實際應(yīng)用中，進行測定的往往是一些復(fù)雜樣品或者是低豐度分析物樣品，而一些經(jīng)典商品化的免疫分析方法不僅需要消耗的樣品多、而且成本高、周期長，遠(yuǎn)不能滿足需求，為此，建立一個低成本、高效率、高靈敏度的免疫檢測方法非常的必要。化學(xué)發(fā)光分析方法因為滿足與現(xiàn)實應(yīng)用的要求，所以獲得了廣泛的發(fā)展，本文就化學(xué)發(fā)光免疫分析方法進行分析，并對其前景進行展望。

[關(guān)鍵詞]化學(xué)發(fā)光免疫分析；免疫傳感；快速檢測

中圖分類號：TP317 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）14-0049-01

近年來，化學(xué)發(fā)光免疫分析法備受人們的青睞，主要是因為此方法具有高靈敏度、強特異性、廣適用面和設(shè)備簡單等特點。在臨床醫(yī)學(xué)、食品藥物等領(lǐng)域，此方法被廣泛應(yīng)用于抗原與抗體間的識別。生物分子的體積大、擴散率比較小，所加之對識別微電具有空間阻礙作用，所以受到傳質(zhì)速率和反應(yīng)動力學(xué)控制的免疫反應(yīng)速率一般都會比較低。傳統(tǒng)的免疫分析方法需要的溫育時間比較長，大大限制了樣品測試的通量和適用范圍。所以為了縮短免疫分析的時間，需要不斷的進行技術(shù)創(chuàng)新，從而擴展化學(xué)發(fā)光免疫分析的應(yīng)用范圍。

一、化學(xué)發(fā)光免疫分析法

化學(xué)發(fā)光分析是一種利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光的強度來進行物質(zhì)含量確定的分析方法。這種分析是化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)和免疫反應(yīng)的完美結(jié)合，主要是利用化學(xué)發(fā)光的相關(guān)物質(zhì)對抗體或者是抗原進行標(biāo)記，等到與需要進行測定的抗原或者抗體反應(yīng)之后，再利用分離游離態(tài)化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的方法，使得加入到化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)中的其他相關(guān)物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，然后進行抗原或者是抗體的定量或者是定性的檢測。在化學(xué)發(fā)光免疫分析中，主要使用4類標(biāo)記物，分別是異魯米諾及其衍生

物、過氧化物酶和堿性磷酸酶、魯米諾和吖啶酯衍生物。在目前的化學(xué)發(fā)光免疫分析法中，以酶為標(biāo)記物的化學(xué)發(fā)光是應(yīng)用的主流。常用的標(biāo)記酶是堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶。利用酶來做標(biāo)記物主要是因為酶具有相應(yīng)的化學(xué)發(fā)光底物，在臨床上的應(yīng)用比較廣泛。

在化學(xué)發(fā)光免疫分析方法中不可避免的會利用到標(biāo)記技術(shù)，而標(biāo)記技術(shù)是現(xiàn)代免疫分析的關(guān)鍵性技術(shù)之一。新的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，在目前的社會諸多領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用，并且展示了非常不錯的發(fā)展前景。在實際標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用中，納米技術(shù)廣泛的用于生物標(biāo)記，主要是因為納米粒子具有非常良好的生物相容性，而且具有信號放大的效果。在實際應(yīng)用中，量子點就是一種半導(dǎo)體納米顆粒，所以在發(fā)光免疫分析法中被大量的使用。

二、化學(xué)發(fā)光免疫分析法的應(yīng)用

（一） 快速化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

傳統(tǒng)的免疫分析方法需要的時間比較長，而且由于時間的延長往往會導(dǎo)致免疫試劑吸附在管道的內(nèi)壁上，這樣就會造成不同測定間的信號交叉，對于測定結(jié)果的準(zhǔn)確度具有嚴(yán)重的影響。為了實現(xiàn)免疫分析的高通量，克服傳統(tǒng)方法的不足，可以通過利用外場的驅(qū)動或者是利用溶液來進行有效混合策略，以此來達(dá)到加快抗原或者是抗體等大分子的傳質(zhì)速率。在實際中，還可以通過提高整個反應(yīng)體系的溫度來進行免疫反應(yīng)動力學(xué)的加速，這樣也可以實現(xiàn)快速的免疫檢測。

在提高傳質(zhì)速率的方法選擇上，主要有四種備選方案，分別是改變電滲流、超聲波驅(qū)動、電磁攪拌和電場驅(qū)動。通過這種提高傳質(zhì)速率的方法，可以有效的實現(xiàn)快速檢測，一般在3分鐘之內(nèi)就可以完成檢測工作。除去提高傳質(zhì)速率的方法，外力驅(qū)動的加速也會提高檢測，在實際應(yīng)用中，利用外力驅(qū)動的加速效果，可以在16分鐘內(nèi)完成整個測定分析工作。

（二） 多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析方法也是化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的一種重要應(yīng)用。在單個的分析流程中，同時實現(xiàn)多組分的檢測，具有的優(yōu)勢非常顯著。利用這種方法，不僅所需要的時間短、樣品的消耗量比較少，而且分析的通量高，分析成本整體較低。這些優(yōu)勢都是免疫分析長期追求的目標(biāo)，也是未來免疫分析的發(fā)展研究熱點。多組分免疫分析模式主要有兩種實踐模式，分別是：多組分同時檢測模式和順序檢測模式。在實際應(yīng)用當(dāng)中，同時檢測模式往往會與空間分辨技術(shù)，還有陣列檢測器同時進行結(jié)合檢測，而順序檢測一般是在同一個時間期限內(nèi)對多個組分進行分別檢測。近年來由于安培免疫傳感器陣列在多組分免疫分析中的廣泛應(yīng)用，多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析的方法獲得了非?？焖俚陌l(fā)展。多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析法的廣泛使用得益于其他技術(shù)的長足進步，也就是說多組分化學(xué)發(fā)光免洗分析的發(fā)展要建立在與其相關(guān)技術(shù)的發(fā)展基礎(chǔ)上，所以這種技術(shù)在未來的發(fā)展?jié)摿薮蟆?/p>

（三） 高靈敏化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

從過去的實踐經(jīng)驗中得知，現(xiàn)有的檢測手段其靈敏度和特異性都不是很理想，所以選擇高靈敏度的檢測方法越來越重要。納米技術(shù)快速發(fā)展和在檢測中的應(yīng)用為實現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析的高靈敏度提供了可能。就目前的情況而言，納米粒子在生物分析中得到了廣泛的使用，其信號放大的功效對于高靈敏免疫分析方法的構(gòu)建非常有幫助。

通過研究發(fā)現(xiàn)不同粒徑的納米粒子可以增強魯米諾過氧化氫體系的化學(xué)發(fā)光 ，在試驗中，38 nm 粒徑的納米粒子的增強效果最為顯著。通過實驗，合成的特殊形狀的不規(guī)則金納米粒子，對魯米諾過氧化氫化學(xué)發(fā)光體系的催化活性是普通納米粒子的100倍。在試驗中，將抗體固定在不規(guī)則金納米粒子表面后發(fā)現(xiàn)，會形成夾心免疫復(fù)合物，這中復(fù)合物對于信號的放大，其效果更加的顯著。也正是通過試驗得知，將納米粒子廣泛應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析中時，由于其信號放大的效果顯著，測定分析的敏感性和準(zhǔn)確度顯著加強。

三、發(fā)展與展望

化學(xué)發(fā)光免疫分析方法在目前的生命科學(xué)領(lǐng)域、食品、藥物的測定等方面被廣泛的使用，而且隨著我國對食品安全的重視程度不斷加深，測定范圍和深度肯定會逐漸增加?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法其本身就具有成本低、操作簡單、靈敏度較高、測定速度快等突出的優(yōu)勢，在未來的發(fā)展中這些優(yōu)勢會被充分的利用，化學(xué)發(fā)光免疫分析法的適用范圍也會更加的廣泛。再者，化學(xué)發(fā)光免疫分析法與技術(shù)的進步有著密切的關(guān)系，隨著未來技術(shù)的不斷進步，與化學(xué)發(fā)光免疫分析法相關(guān)的技術(shù)會得到不斷地改進和發(fā)展，這對于化學(xué)發(fā)光免疫分析法來說，是一個強有力的助推力。

結(jié)束語

化學(xué)發(fā)光免疫分析方法因為其優(yōu)勢突出所以在目前的各個領(lǐng)域具有非常廣泛的應(yīng)用。在實際應(yīng)用中，一定要不斷的加深對此方法的認(rèn)識深度，不斷地提高利用此方法的技術(shù)，使這種技術(shù)更好的為現(xiàn)代的測定工作來服務(wù)。

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