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    抗人球蛋白試驗(yàn)在RhD、ABO血型抗原鑒定的應(yīng)用效果

    2022-07-02 02:39:50劉敏靜杜思遠(yuǎn)高艷珠李健茹趙子賢廣東省江門市新會區(qū)人民醫(yī)院廣東江門529100
    首都食品與醫(yī)藥 2022年13期
    關(guān)鍵詞:改良法抗人效價(jià)

    劉敏靜,杜思遠(yuǎn),高艷珠,李健茹,趙子賢(廣東省江門市新會區(qū)人民醫(yī)院,廣東 江門 529100)

    新生兒溶血病(Hemolytic disease of the newborn,HDN)是由母嬰血型不合、紅細(xì)胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Erythrocyte glucose-6-phosphate dehydrogenase,G-6-PD)缺乏、球形紅細(xì)胞增多癥等原因所引起的新生兒疾病,其中多數(shù)原因?yàn)槟笅胙筒缓蟍1]。后者是母體與新生兒紅細(xì)胞抗原不配合,激活母體免疫系統(tǒng)被動產(chǎn)生免疫性的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)G抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi),可使得新生兒的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)受到破壞,從而形成被動免疫性溶血性疾病[2-3]。ABO血型不合是引起新生兒溶血病最常見的原因,大約3.5%的新生兒溶血病是因ABO血型不合所導(dǎo)致的[4]。Rh新生兒溶血病是由于母嬰Rh血型不合所致的IgM免疫抗體作用于胎兒紅細(xì)胞造成的高膽紅素血癥,可由人類紅細(xì)胞刺激引起同族免疫作用而產(chǎn)生[5]??谷饲虻鞍自囼?yàn)(Antiglobulin test,AGT)是檢查不完全抗體的一種經(jīng)典方法,是利用抗人球蛋白血清與體內(nèi)致敏紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集的原理,檢查紅細(xì)胞是否致敏的試驗(yàn)[6]。但傳統(tǒng)的抗人球蛋白試驗(yàn)是一種以抗球蛋白法為基礎(chǔ)的凝聚胺法,在低離子介質(zhì)中可促進(jìn)紅細(xì)胞和血清之間的抗原抗體反應(yīng)。改良的抗人球蛋白法是在經(jīng)典法的基礎(chǔ)上,利用二硫蘇糖醇作為裂解液,將凝聚胺試劑作為加速劑,能提高檢測效果[7]。本文具體探討并對比了抗人球蛋白試驗(yàn)在RhD、ABO血型抗原鑒定中的應(yīng)用效果,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 研究材料 選擇2018年9月-2021年11月在本院建檔分娩的夫婦ABO血型不合或RhD血型不合的孕婦78例作為研究對象。

    納入標(biāo)準(zhǔn):單胎活妊娠;孕周≥28周;孕婦知情同意本研究;年齡20-45歲;醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)了此次研究(批準(zhǔn)號為87725552)。排除標(biāo)準(zhǔn):臨床資料缺乏者;合并腫瘤者;合并先天性免疫性疾病者。

    抗A標(biāo)準(zhǔn)血清、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清購自上海生工公司,ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞試劑盒購自大連TAKARA公司??笵抗體購自Bio-rad公司,抗球蛋白試劑購自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,低離子抗人球蛋白卡、凝聚胺介質(zhì)試劑購自珠海貝索生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

    在78例孕婦中,年齡最小22歲,最大43歲,平均年齡(29.48±1.58)歲;平均體重指數(shù)(2 6.2 9±1.2 2)k g/m2;平均孕周(3 4.0 2±2.2 8)周;平均產(chǎn)次(1.87±0.24)次;平均孕次(2.58±0.28)次。

    1.2 配偶血型鑒定 采用玻片正定型法、試管反定型法進(jìn)行配偶血型鑒定,在玻片正定型法中,將抗A定型試劑、抗B定型試劑各一滴分別滴于玻片上A、B處,分別取等體積10.0%紅細(xì)胞懸液或全血于抗A定型試劑和抗B定型試劑處,混勻后觀察凝集狀況進(jìn)行結(jié)果判定。在試管反定型法中,取孕婦血清1滴分別加入3支標(biāo)記好的小試管中,加入RhD試劑紅細(xì)胞,1000rpm/min離心1min,混勻后觀察凝集狀況進(jìn)行結(jié)果判定。

    1.3 抗人球蛋白試驗(yàn)方法 所有孕婦都給予經(jīng)典抗人球蛋白法(經(jīng)典法)、改良抗人球蛋白法(改良法)測定孕婦血清中IgG抗A(B)效價(jià)、抗D抗體,檢查前取試驗(yàn)患者紅細(xì)胞懸液50μl;取微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡,加入紅細(xì)胞懸液,置入卡式離心機(jī)離心5min,觀察凝集反應(yīng),對顯示陽性的標(biāo)本進(jìn)一步實(shí)施分型操作。比如在改良法中,用蒸餾水按1∶20的比例稀釋濃縮洗滌液,加入孕婦血清和裂解液各0.2ml,混勻后在37℃環(huán)境中孵育30min。選擇小試管16支,各加洗滌液0.1ml,倍比稀釋血清與紅細(xì)胞懸液形成洗滌液。向小試管中加入洗滌液,混合后離心1min,留取紅細(xì)胞,然后加入抗IgG抗體0.05ml,觀察紅細(xì)胞凝集情況。

    兩種方法的結(jié)果判斷方法如下:以肉眼可見紅細(xì)胞凝集(+)的最高稀釋倍數(shù)的倒數(shù)即為抗A(B)抗體、抗D抗體的抗體效價(jià)。

    根據(jù)效價(jià)結(jié)果陽性和陰性結(jié)果的判定原則,所有效價(jià)≥1∶64的標(biāo)本可判定為陽性結(jié)果。

    1.4 統(tǒng)計(jì)方法 本次研究統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS22.00,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)量數(shù)據(jù)與計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)分別以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差、n%等表示,對比為t檢驗(yàn)與卡方χ2檢驗(yàn)等。

    2 結(jié)果

    2.1 新生兒溶血病鑒定情況對比 在78例孕婦中,改良法判斷為ABO新生兒溶血病44例,RhD新生兒溶血病6例;經(jīng)典法判斷為ABO新生兒溶血病41例,RhD新生兒溶血病5例,對比無差異(P>0.05)。見表1。

    表1 兩種方法對新生兒溶血病鑒定情況對比[n(%)]

    2.2 IgG抗A(B)效價(jià)對比 經(jīng)典法的IgG抗A(B)效價(jià)陽性率為9.0%(7/78),改良法的IgG抗A(B)效價(jià)陽性率為25.6%(20/78),改良法的IgG抗A(B)效價(jià)陽性率高于經(jīng)典法(χ2=7.569,P<0.05)。見表2與表3。

    表2 經(jīng)典法測定IgG抗A(B)的效價(jià)(n=78)

    表3 改良法測定IgG抗A(B)的效價(jià)(n=78)

    2.3 Ig抗D效價(jià)對比 經(jīng)典法的Ig抗D效價(jià)陽性率為2.6%(2/78),改良法的Ig抗D效價(jià)陽性率為11.5%(9/78),改良法的Ig抗D效價(jià)陽性率高于經(jīng)典法(χ2=4.792,P<0.05)。見表4與表5。

    表4 經(jīng)典法測定Ig抗D的效價(jià)(n=78)

    表5 改良法測定Ig抗D的效價(jià)(n=78)

    3 討論

    新生兒溶血病在臨床上比較常見,可導(dǎo)致胎兒紅細(xì)胞被破壞,新生兒出現(xiàn)水腫、黃疸、貧血,甚至出現(xiàn)死胎。新生兒溶血病的主要病因是母嬰血型不合,包括ABO血型不合與RhD血型不合[8]。ABO血型鑒定與RhD血型鑒定是臨床重要檢驗(yàn)項(xiàng)目,是判斷母嬰血型相容性的重要依據(jù)。由于各種因素的影響,當(dāng)前對于血型鑒定多采用血清檢驗(yàn)方法,雖然有一定的效果,但是低效價(jià)血清抗體檢測操作比較復(fù)雜,也容易出現(xiàn)各種假陽性。抗人球蛋白試驗(yàn)是將抗人球蛋白血清加入已經(jīng)致敏的紅細(xì)胞鹽水懸液中,紅細(xì)胞表面的抗球蛋白與抗人球蛋白血清中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng),使紅細(xì)胞發(fā)生凝集[9]。本研究顯示在78例孕婦中,改良法判斷為ABO新生兒溶血病44例,RhD新生兒溶血病6例;經(jīng)典法判斷為ABO新生兒溶血病41例,RhD新生兒溶血病5例,對比無差異(P>0.05),表明經(jīng)典法與改良法對于新生兒溶血病的診斷具有良好的一致性,具有很好的應(yīng)用價(jià)值。

    ABO血型不合導(dǎo)致的新生兒溶血病是由于母嬰ABO血型不合,可使得胎兒的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)受到免疫性破壞,從而誘發(fā)溶血[10-11]。IgG抗A(B)抗體效價(jià)與溶血程度有一定的相關(guān)性,但是也與新生兒A(B)抗原強(qiáng)弱、胎盤屏障作用、血型物質(zhì)含量等有關(guān)。Rh血型抗體只能由人類紅細(xì)胞作為抗原刺激引起同族免疫作用而產(chǎn)生,血清中含有Rh抗體的孕婦,如果受孕一個(gè)Rh陽性胎兒,Rh抗體可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi),破壞胎兒紅細(xì)胞引起新生兒溶血病[12]。而出現(xiàn)胎盤出血與產(chǎn)道損傷,紅細(xì)胞便可進(jìn)入母體內(nèi),刺激母體產(chǎn)生Rh抗體,當(dāng)母體再次妊娠可再次誘發(fā)新生兒溶血病的發(fā)生[13-14]。本研究顯示,經(jīng)典法的IgG抗A(B)效價(jià)陽性率為9.0%(7/78),改良法的IgG抗A(B)效價(jià)陽性率為25.6%(20/78),改良法的IgG抗A(B)效價(jià)陽性率高于經(jīng)典法(χ2=7.569,P<0.05)。經(jīng)典法的Ig抗D效價(jià)陽性率為2.6%(2/78),改良法的Ig抗D效價(jià)陽性率為11.5%(9/78),改良法的Ig抗D效價(jià)陽性率高于經(jīng)典法(χ2=4.792,P<0.05),表明改良法的應(yīng)用能提高對于新生兒溶血病與各血型效價(jià)的檢測陽性率。從機(jī)制上分析,經(jīng)典法是利用抗人球蛋白血清可與體內(nèi)已經(jīng)被不完全抗體或補(bǔ)體致敏的紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理,可有效確定母嬰血型不合導(dǎo)致的新生兒溶血病??谷饲虻鞍自囼?yàn)為一項(xiàng)經(jīng)典的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),但是經(jīng)典法忽略了自身抗體的存在,可能存在檢測誤差[15-17]。但大量陽性患者由于存在自身抗體,導(dǎo)致配血發(fā)生困難,可出現(xiàn)與所有供者樣本凝集的現(xiàn)象,且難以鑒定出同種抗體[18]。而凝聚胺是多價(jià)陽離子聚合物,可促進(jìn)紅細(xì)胞和血清之間的抗原抗體反應(yīng),加速抗體致敏紅細(xì)胞,可破壞紅細(xì)胞間相互排斥的電位,可以提高試驗(yàn)的陽性率[19-21]。但是陰性結(jié)果仍需做抗球蛋白試驗(yàn)以防漏診,還需以鹽水試驗(yàn)作對照。在改良法中,將凝聚胺試劑作為加速劑可使紅細(xì)胞致敏能力增強(qiáng),縮短裂解時(shí)間,增強(qiáng)裂解效果[22]。本研究由于經(jīng)費(fèi)限制,納入孕婦數(shù)量比較少,對比方法也比較少,將在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。

    總之,不同抗人球蛋白試驗(yàn)在RhD、ABO血型抗原鑒定的應(yīng)用都有很好的效果,改良法的應(yīng)用能提高對于新生兒溶血病與各血型效價(jià)的檢測陽性率。

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