羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測 白細胞介素-6的方法學(xué)評價

衛(wèi)麗 刁曉艷 梁涯

作者單位： 810007 青海西寧，青海省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科（衛(wèi)麗、刁曉艷）

510006 廣東廣州，廣州市中醫(yī)醫(yī)院同德圍分院檢驗科（梁涯）

白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）是一種多效性細胞因子，且在人體中功能較多。大量研究顯示，IL-6不僅對B細胞有生理活性作用，對T細胞、造血干細胞、肝細胞和腦細胞也有生理活性作用［1］。 在外科手術(shù)后、患腫瘤時以及發(fā)生內(nèi)外傷、感染、腦死亡或其他急性炎癥反應(yīng)時，機體會快速產(chǎn)生IL-6［2-3］。 手術(shù)患者的IL-6水平對是否會發(fā)生手術(shù)并發(fā)癥有一定預(yù)測作用［4-5］。對重癥監(jiān)護病房（intensive care unit，ICU）患者的IL-6水平進行監(jiān)測能有效評估疾病嚴重程度和預(yù)后情況〔如系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）、 膿毒癥、膿毒性休克等〕［6-8］。另外有研究表明，IL-6可作為膿毒癥的早期預(yù)警指標(biāo)［9-11］，與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等慢性炎癥疾病也有關(guān)［12-13］。本實驗室將國際標(biāo)準化組織（International Organization for Standardization， ISO）制定的ISO15189：2007《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則》［14］作為工作質(zhì)量的管理標(biāo)準，通過IL-6項目全面驗證和評價羅氏Cobas E602全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的檢測性能（包括儀器檢測精密度、線性、方法學(xué)比較等），現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究檢測的血清標(biāo)本（高、中、低值濃度）來自青海省人民醫(yī)院門診、住院、體檢中心患者的新鮮血清（無溶血、黃疸和脂血）。低值標(biāo)本在正常參考值范圍內(nèi)，未經(jīng)稀釋的高值標(biāo)本高于正常參考值范圍的上限，但可被本儀器正常檢出。

1.2 儀器與試劑 使用德國羅氏診斷公司Cobas E602全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及原裝試劑。校準品和質(zhì)控品均為儀器原裝配套定標(biāo)液和血清基質(zhì)復(fù)合質(zhì)量控制（質(zhì)控）血清。

1.3 研究方法

1.3.1 準確度評價實驗 對不同于當(dāng)前使用校準品批號的另一個校準品進行檢測，與當(dāng)前使用的被檢校準品的靶值比較，計算相對偏差［15］。判斷標(biāo)準為相對偏差在±12.5%以內(nèi)。

1.3.2 精密度驗證實驗［16］選擇低、中、高值IL-6水平（分別為25.10、127.01、688.92 ng/L）的新鮮血清，連續(xù)檢測20次，計算平均值（x）、標(biāo)準差（standard deviation，SD）、變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）， 并計算批內(nèi)精密度。同時將高、中、低值血清標(biāo)本各分裝20份，儲存于2～8 ℃冰箱中，每日分別測量2次，持續(xù)10 d，計算批間精密度。評價試驗結(jié)果判定：計算出的批間精密度結(jié)果小于生產(chǎn)廠家所提供的參考范圍（CV＜8.5%），即為驗證合格。

1.3.3 檢測線性范圍評價 參照美國臨床和實驗室標(biāo)準協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，NCCLS）制定的標(biāo)準EP6-A評價方案［16］，選取各 1份高值（H）和低值血清樣本（L），樣本的IL-6水平與儀器生產(chǎn)廠家說明的檢測范圍相近，將樣本按不同比例（5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H）混 合，得到6份樣品，每份重復(fù)測定4次，計算均值。橫 坐標(biāo)x為理論值，縱坐標(biāo)y為實測值，列出回歸方程，繪制線性范圍，并計算相關(guān)系數(shù)。判斷線性范圍的標(biāo)準：回歸方程為y＝bx+a，若b在0.97～1.03，a值 接近0則說明檢測結(jié)果可達到驗證高限。

1.3.4 交叉污染率評估實驗 將1份低值濃度標(biāo)本和1份高值濃度標(biāo)本分別連續(xù)測定3次，結(jié)果分別為L1、L2、L3和H1、H2、H3。按以下公式計算：交叉污染率＝（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

2 結(jié)果

2.1 準確度評價實驗 檢測系統(tǒng)使用批號168763的IL-6校準品進行校準，再檢測批號169837和178635的IL-6校準品，比較測定值與靶值，相對偏差為-3.01%～3.84%，表明檢測系統(tǒng)準確度較高。準確度評價實驗結(jié)果見表1。

表1 IL-6的準確度評價實驗結(jié)果

2.2 精密度驗證實驗 羅氏Cobas E602全自動化學(xué)發(fā)光自動免疫分析儀檢測IL-6高、中、低值濃度標(biāo)本的批內(nèi)和批間精密度均符合要求。見表2。

表2 IL-6精密度驗證實驗結(jié)果

2.3 線性評價實驗 進行回歸分析，得到回歸方程：y＝1.0081x-1.0009（R2＝0.99996），從而證實預(yù) 期值與實際測得值的相關(guān)性較好。因此，IL-6在線性 范圍內(nèi)呈線性，接近廠家提供的參考范圍，見表3。線性回歸圖見圖1。

表3 IL-6線性評價實驗結(jié)果

圖1 IL-6的線性范圍及線性回歸圖

2.4 交叉污染率評估 低值和高值濃度標(biāo)本檢測結(jié)果分別為L1＝24.26 ng/L，L3＝23.76 ng/L，H3＝627.0 ng/L，按公式計算可得IL-6的攜帶污染率為0.077%，符合標(biāo)準（交叉污染率＜3.0%）。

3 討論

本研究采用羅氏Cobas E602全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀定量檢測IL-6，該儀器具有敏感度和特異度高、重復(fù)性好、無放射性危害等優(yōu)點［17-18］，近年來廣泛被臨床使用。羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀根據(jù)夾心法，采用羅氏公司的封閉檢測系統(tǒng)對IL-6進行檢測，所有試劑和消耗品都來自德國羅氏診斷公司。全自動免疫分析儀的廠家說明書中提供的儀器指標(biāo)參數(shù)均在最佳檢測條件下完成，與實際操作實驗室的環(huán)境和條件有差異，因此，本實驗室旨在驗證羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對IL-6的檢測性能，并評價該儀器的分析功能。

精密度是指在規(guī)定條件下不同批次檢測結(jié)果間的一致程度，是反映儀器檢測功能的重要指標(biāo)，也是進行其他方法學(xué)驗證實驗的前提。為驗證檢測儀器的精密度，可選擇已經(jīng)檢測過的樣本、質(zhì)控品、標(biāo)準品作為標(biāo)本。本研究采用低值、中值、高值3個IL-6水平的患者新鮮血清，設(shè)計天數(shù)和重復(fù)次數(shù)進行精密度驗證實驗，從而得到批內(nèi)和批間精密度，方法簡單，適合用于臨床實驗室。結(jié)果顯示，IL-6的驗證結(jié)果符合廠商要求。在NCCLS制定的標(biāo)準EP6-A2中，線性實驗的多項式回歸統(tǒng)計方法要求檢測結(jié)果具有較高的精密度，否則會降低統(tǒng)計功效，因此，實驗前一般先使用集合分差（set difference，SDr）來判斷檢測的精密度。結(jié)果顯示，IL-6的SDr＜5%目標(biāo)允許總誤差（allowable total error，TEa）時線性評價有意義。SPSS 13.0軟件擬合結(jié)果顯示，IL-6檢測的線性范圍為0.24～70.00 ng/L，基本接近說明書提供的＜7.00 ng/L范圍。

綜上，羅氏Cobas E602全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對IL-6的檢測性能驗證結(jié)果與廠商聲明的基本一致，同時，該儀器也具有檢測速度快、敏感度高、線性范圍寬等優(yōu)點，符合臨床實驗室檢驗質(zhì)量的目標(biāo)要求，可以正式投入實驗室使用，應(yīng)用于臨床標(biāo)本檢測。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突