金針酸棗袋泡劑與煎劑的水溶性浸出物、總黃酮含量的比較研究Δ

王 婷，孫偉寧，崔 勇，付曉蕓，羅曉煜，萬 軍，周 霞（西南交通大學生命科學與工程學院，成都610031）

金針酸棗袋泡劑與煎劑的水溶性浸出物、總黃酮含量的比較研究Δ

王 婷＊，孫偉寧，崔 勇，付曉蕓，羅曉煜，萬 軍，周 霞#（西南交通大學生命科學與工程學院，成都610031）

目的：比較金針酸棗袋泡劑與其煎劑的質(zhì)量控制指標，探討該袋泡劑對煎劑的補充替代性。方法：分別采用熱浸法和水煎法制備金針酸棗袋泡劑和煎劑供試品溶液，測定并比較2種制劑中水溶性浸出物和總黃酮的含量；另考察袋泡劑浸泡不同時間（0、5、10、15、20、25、30 min）的浸出率以優(yōu)化浸泡時間。結(jié)果：袋泡劑與煎劑中水溶性浸出物平均含量分別為50.56%、44.45% （P＜0.05），總黃酮含量分別為0.64、0.69 mg/g（P＜0.05）。袋泡劑在前20 min溶出量不斷增加、浸出率升高，25 min后逐漸達到平衡狀態(tài)。結(jié)論：綜合考慮袋泡劑的便捷性及各指標的考察結(jié)果，認為2種制劑在主要的質(zhì)量控制指標上差異不大，袋泡劑可作為煎劑的補充。

金針酸棗袋泡劑；金針酸棗煎劑；水溶性浸出物；浸出率；總黃酮

金針酸棗袋泡劑系張仲景經(jīng)方酸棗仁湯加減化裁而來，由金針菜、酸棗仁、茯苓、佛手、甘草、大棗、粳米等藥材和食材構(gòu)成，為臨床驗方，主要用于輔助治療以失眠為主要表現(xiàn)的抑郁癥。方中金針菜性味甘、涼，利水涼血、安神明目；酸棗仁以其甘、酸，養(yǎng)心益肝、安神，主虛煩不眠、驚悸怔忡；二者合為君藥，養(yǎng)血安神。佛手辛行苦泄、疏肝解郁、理氣和中，主肝氣郁結(jié)之脅痛、胸悶；茯苓寧心安神；二者合為臣藥。佐以大棗，補中益氣、養(yǎng)血安神；配甘草、粳米益氣和中，潤燥緩急，調(diào)和諸藥為使。七者合用，共湊補中益氣、疏肝解郁、養(yǎng)血安神的功效?！督饏T要略》記載：“虛勞虛煩不得眠，酸棗仁湯主之”。中醫(yī)臨床治療抑郁癥需要長期服用煎劑，但煎劑服用量大，使用較麻煩。中藥袋泡劑與煎劑比較，具有體積小、服用和攜帶方便等特點［1］，更符合現(xiàn)代人生活節(jié)奏，是一種更具有開發(fā)前景的新劑型。為探索其與煎劑中的有效成分的等同性，課題組擬從水溶性浸出物及總黃酮含量等方面對二者進行比較研究，為袋泡劑作為煎劑的有益補充提供試驗依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

BS110S電子天平（德國賽多利斯公司）；SL302K電子天平（上海民橋精密科學儀器有限公司）；HX-200高速中藥粉碎機（浙江省永康市溪岸五金藥具廠）；DHG-9030A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；DK-98-1電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.2 藥材與試劑

酸棗仁、佛手、茯苓、甘草、大棗均為中藥飲片（于2015年9月1日購于四川北京同仁堂有限責任公司）；金針菜、粳米（均于2015年9月1日購于成都沃爾瑪超市，并系符合質(zhì)量要求的產(chǎn)品）；蘆丁（成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-15010707，純度：≥98.0%）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 袋泡劑制備方法

2.1.1 處方 金針菜（干品）20 g，酸棗仁（炒）19 g，佛手5 g，茯苓7 g，甘草（炙）7 g，大棗（去核）47 g，粳米（炒）7 g。

2.1.2 制法 取以上7味藥材和食材，75 ℃ 干燥2 h，取出，晾涼，粉碎成粗粉，過篩（10～20目），混勻，70 ℃干燥，裝入袋泡茶濾紙袋，每袋4 g，即得。

2.2 袋泡劑和煎劑供試品溶液的制備

2.2.1 袋泡劑供試品溶液 取袋泡劑3袋（12 g），加入600 ml沸蒸餾水，90 ℃ 水浴中保溫20 min（此過程加水適量并保持體積不變），得頭汁，用紗布過濾后保留；再加沸水600 ml，浸泡20 min（此過程加水適量并保持體積不變），得二汁，用紗布過濾；合并2次浸泡液即得。

2.2.2 煎劑供試品溶液 按處方比例取12 g藥材，加水600 ml，浸泡20 min，煎煮20 min，濾過；藥渣再加水600 ml，煎煮20 min，濾過；合并2次煎液即得［1］。

2.3 水溶性浸出物的測定

分別取3份袋泡劑和煎劑供試品溶液60 ml移至恒質(zhì)量蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后放入烘箱中，105 ℃干燥3 h，放入干燥器冷卻30 min后稱質(zhì)量。按公式計算水溶性浸出物含量［2-4］：（恒質(zhì)量后總質(zhì)量－恒質(zhì)量后蒸發(fā)皿質(zhì)量）/樣品質(zhì)量×1 200/60×100%）；并用SPSS 22.0軟件進行t檢驗分析，結(jié)果見表1。

表1 袋泡劑與煎劑水溶性浸出物含量Tab 1 Content of water soluble extract between teabag and decoction

由表1可見，袋泡劑水溶性浸出物平均含量高于煎劑（t檢驗結(jié)果顯示P=0.040＜0.05）。

2.4 總黃酮含量測定

本試驗重點關(guān)注金針酸棗袋泡茶與煎劑中總黃酮的含量差異，故方法學考察選取袋泡劑進行研究。

2.4.1 袋泡劑待測溶液的制備 按“2.2.1”項下的制備方法量取袋泡劑供試品溶液，置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，得固形物；加7 ml 70%乙醇充分溶解，移至10 ml量瓶中，超聲（300 W，40 kHz）處理5 min，用70%乙醇定容至刻度，即得。

2.4.2 對照品溶液的制備 取干燥至恒質(zhì)量的蘆丁對照品約10 mg，精密稱定，置于25 ml量瓶中，加70%乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取20 ml，置于50 ml量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 陰性對照溶液的制備 取方中不含黃酮類的藥材和食材，按“2.2”項下方法制備得陰性對照溶液。

2.4.4 最大吸收波長的選擇 選取300～800 nm波長范圍，對蘆丁對照品溶液、袋泡劑待測溶液、陰性對照溶液進行光譜掃描，篩選最大吸收波長。結(jié)果顯示，蘆丁對照品溶液在506 nm波長有最大吸收，袋泡劑待測溶液在508 nm波長處有最大吸收，陰性對照溶液在507、508 nm波長處未見吸收，故本試驗選擇507 nm為檢測波長。3種溶液的紫外光譜掃描結(jié)果見圖1。

2.4.5 標準曲線的建立 分別精密量取0.16 mg/ml蘆丁對照品溶液1、2、3、4、5、6 ml，置于25 ml量瓶中，分別加入70%乙醇溶液至6 ml，加5%亞硝酸鈉溶液1 ml，搖勻，放置6 min；加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，放置6 min；加4%氫氧化鈉試液10 ml，再加70%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min。以70%乙醇為空白對照，于507 nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為橫坐標、質(zhì)量濃度（c，μg/ml）為縱坐標，計算得回歸方程為c= 0.013 9A－0.004 7（r=0.999 7），結(jié)果表明蘆丁檢測質(zhì)量濃度線性范圍為6.4～38.4 μg/ml。

圖1 紫外光譜掃描結(jié)果Fig 1 UV scanning spectrum

2.4.6 精密度試驗 取0.16 mg/ml蘆丁對照品溶液，連續(xù)測定5次，記錄吸光度，計算得RSD為1.31%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.4.7 重復(fù)性試驗 取同一批袋泡劑待測溶液5份，測定吸光度，計算得RSD為1.92%（n=5）。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗 取同一批袋泡劑，于50 min內(nèi)每隔10 min測定1次吸光度，結(jié)果RSD為2.38%（n=5），表明待測溶液在50 min內(nèi)測定較穩(wěn)定。

2.4.9 加樣回收試驗 精密量取已知成分含量的袋泡劑待測溶液3 ml 6份，分別加入一定量的蘆丁對照品，按“2.4.1”項下方法制備，測定含量并計算回收率。結(jié)果平均回收率為102.52% （RSD=2.26%，n=6），表明該方法準確度較好。

2.4.10 2種樣品中總黃酮含量的測定 分別精密量取2種制劑的待測溶液6 ml，置于25 ml量瓶中，其余操作同“2.4.5”項下方法。測定吸光度，計算總黃酮含量［5-7］，并對結(jié)果采用t檢驗。結(jié)果顯示袋泡劑與煎劑中總黃酮的含量分別為0.64、0.69 mg/g（n=3），差異有統(tǒng)計學意義（t=－6.124，P=0.004＜0.05），煎劑中的總黃酮含量更高。

2.5 袋泡劑浸出率的測定

取袋泡劑7份，每份3袋，同時在600 ml熱水中浸泡，并于90 ℃水浴中進行保溫，按保溫時間為0（沸水浸濕后立即取出）、5、10、15、20、25、30 min（過程中不斷振搖）依次編號為1～7。按時取出，將浸泡液用紗布過濾后轉(zhuǎn)移至燒杯中，用移液管精密量取30 ml，置于蒸發(fā)皿中水浴蒸干；放入烘箱在105℃條件下干燥3 h，取出；在干燥器中冷卻30 min，迅速稱質(zhì)量，計算浸出率［8］：（干燥后質(zhì)量－蒸發(fā)皿質(zhì)量）/樣品質(zhì)量×600/30×100%，結(jié)果見表2、圖2。

表2 袋泡劑浸泡不同時間浸出率測定結(jié)果（n=3）Tab 2 Leaching rate of teabag at different soak time（n=3）

圖2 時間-浸出率曲線圖Fig 2 Time-leaching rate curve

由表2以及圖2可見，袋泡劑在前20 min的溶出量不斷增加、浸出率升高，25 min后逐漸達到平衡、飽和狀態(tài)。

3 討論

3.1 指標選擇依據(jù)

本試驗測定了金針酸棗袋泡劑的浸出率并將其與煎劑的水溶性浸出物、總黃酮含量進行比較。水溶性浸出物是煎劑和袋泡劑發(fā)揮作用的固形物質(zhì)基礎(chǔ)之一。2010年版《中國藥典》（一部）中未收載煎劑相關(guān)制劑通則檢查，而在2010年版《中國藥典》的第一增補本及2015年版《中國藥典》（一部）中收載有川芎茶調(diào)袋泡茶（川芎茶調(diào)袋泡劑）的質(zhì)量標準，其中，水溶性浸出物為質(zhì)量控制指標之一［9-10］。在文獻研究中，也大都采用了水溶性浸出物為研究指標［1，4-5］，因此本試驗選擇水溶性浸出物作為對比研究指標之一。

為了篩選袋泡劑的最優(yōu)沖泡時間，本試驗以浸出率為評價指標，考察袋泡劑在沖泡過程中有效成分浸出的程度。該指標是依據(jù)袋泡劑的實際使用情況選擇的，在本文中其與水溶性浸出物是兩個不同的評價指標，可從不同角度反映樣品質(zhì)量。

本方主要用于輔助治療以失眠為主要癥狀的抑郁癥，除茯苓外，方中藥材和食材中均含有黃酮類化合物。近年來，黃酮類化合物的抗抑郁作用日益引起關(guān)注［11-14］，因此本試驗選擇總黃酮含量作為煎劑和袋泡劑的重要對比研究指標。

3.2 袋泡劑與煎劑的藥材取樣量

前期工藝研究中，袋泡劑規(guī)格暫定為每袋4 g。為保證各指標的可比性，在進行取樣測定時，袋泡劑藥材按處方比例稱取3袋，共12 g；煎劑按相同比例稱取12 g藥材。加水量均為600 ml，然后按各自工藝（袋泡劑為熱浸法、煎劑為煎煮法）進行處理后進行檢測，如此操作可最大程度地保證結(jié)果的可比性。

3.3 劑型的選擇

袋泡劑是一種新劑型，是將藥材粉碎成一定細度后分裝在濾紙袋中，用開水沖泡飲用的一種制劑；而煎劑是由中藥飲片直接加水通過浸泡、煎煮而成的一種制劑。在本試驗中，由金針酸棗袋泡劑與煎劑的水溶性浸出物結(jié)果比較可知，袋泡劑的水溶性浸出物含量明顯大于煎劑，其主要原因是由于袋泡劑顆粒粒徑小、表面積大，成分易于擴散浸出。在日常生活中，煎劑煎煮耗時長，而袋泡劑可直接沖服，并具有體積小、服用方便、適于工業(yè)生產(chǎn)等優(yōu)點，故后者更具有開發(fā)前景。

3.4 總黃酮差異分析

本試驗結(jié)果顯示，袋泡劑的總黃酮含量低于煎劑，分析其原因可能是在酸棗仁中發(fā)揮抗焦慮的主要成分為黃酮類及黃酮碳苷類，其難溶于水；在操作中，由于袋泡劑僅在90 ℃ 保溫，而在煎劑的制備過程中溶液一直處于微沸狀態(tài)，使后者的有效成分能更充分地溶出。與煎劑相比，袋泡劑總黃酮平均含量僅相差0.05 mg/g，考慮到袋泡劑使用的便捷性，仍推薦其可作為煎劑的有益補充劑型。

3.5 浸出率測定

參考與袋泡劑相關(guān)的文獻［1，5］及日常生活常識可知，煎劑的浸出率常認為可達100%，故在測定浸出率時只對袋泡劑進行了考察，以確定其最優(yōu)沖泡時間。本試驗結(jié)果顯示，金針酸棗袋泡劑的浸出率在浸泡前5 min較快，20 min以后逐漸達到飽和狀態(tài)，到25 min后浸出率基本上不再改變。故暫定袋泡劑的最優(yōu)沖泡時間為20～25 min；為了提高其利用率，每袋可以同法再泡1～2次。

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Comparative Study on Water Soluble Extract and Total Flavonoid Content between Jinzhen Suanzao Teabag and Decoction

WANG Ting，SUN Weining，CUI Yong，F(xiàn)U Xiaoyun，LUO Xiaoyu，WAN Jun，ZHOU Xia（College of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China）

OBJECTIVE：To compare the quality control index between Jinzhen Suanzao teabag and decoction，and explore the alternative supplement of teabag to decoction.METHODS：The test sample solutions of Jinzhen Suanzao teabag and decoction were prepared by hot-maceration method and water-decoction method.The contents of water soluble extract and total flavonoids were determined and compared between 2 kinds of preparation.The leaching rates of teabag were investigated at different soak time（0，5，10，15，20，25，30 min）to optimize soaking time.RESULTS：The average content of water soluble extract were 50.56%and 44.45%（P＜0.05）respectively for the teabag and decoction.The total flavonoids content were 0.64 mg/g and 0.69 mg/g（P＜0.05）.The dissolution amount of teabag were increasing and leaching rate increased within first 20 min，and reached balance gradually 25 min later.CONCLUSIONS：According to the convenience of use and results of each index，the difference in quality control index is not great between 2 kinds of preparation.Teabag can be as the supplement of decoction.

Jinzhen Suanzao teabag；Jinzhen Suanzao decoction；Water soluble extract；Leaching rate；Total flavonoids

R283

A

1001-0408（2016）25-3542-03 DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.25.26

2015-11-13

2016-03-10）（編輯：劉 萍）

四川省中醫(yī)藥管理局科研項目（No.2015ys007）；四川省大學生科研創(chuàng)新訓練計劃項目（No.2015101）

＊本科生。研究方向：制藥工程。E-mail：wangtswjtu@163.com

講師，博士。研究方向：中藥制劑與炮制。電話：028-87603202。E-mail：wwangyidi@126.com